• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    神經(jīng)元特異性烯醇化酶在神經(jīng)元氧糖剝奪損傷模型復(fù)氧后的表達(dá)變化

    2015-03-02 04:31:28徐偉華黃嘯元王業(yè)忠
    中國(guó)全科醫(yī)學(xué) 2015年20期
    關(guān)鍵詞:化酶烯醇腦損傷

    徐偉華,趙 冬,戴 晶,劉 祺,許 暉,黃嘯元,王業(yè)忠

    ?

    ·論著·

    神經(jīng)元特異性烯醇化酶在神經(jīng)元氧糖剝奪損傷模型復(fù)氧后的表達(dá)變化

    徐偉華,趙 冬,戴 晶,劉 祺,許 暉,黃嘯元,王業(yè)忠

    目的 探討神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)在體外培養(yǎng)神經(jīng)元氧糖剝奪損傷模型復(fù)氧后的水平變化。方法 體外原代培養(yǎng)24 h內(nèi)的新生SD大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元,應(yīng)用免疫熒光染色及電子顯微鏡鑒定神經(jīng)元,應(yīng)用體外氧糖剝奪建立大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元缺血低氧損傷模型,分別對(duì)復(fù)氧1、6、12、24、48、72 h神經(jīng)元提取蛋白質(zhì),Western blotting法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元損傷模型中NSE表達(dá)水平。結(jié)果 培養(yǎng)第4天的細(xì)胞免疫熒光染色顯示神經(jīng)元細(xì)胞核染色清晰,形態(tài)典型,突起走形如網(wǎng)狀,陽(yáng)性率為(93.6±1.6)%。各組NSE蛋白表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=500.75,P<0.01)。實(shí)驗(yàn)組損傷后各時(shí)間點(diǎn)NSE蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h NSE蛋白表達(dá)均高于其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)。結(jié)論 NSE可作為自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后早期腦損傷(EBI)標(biāo)志物,能夠反映腦組織的損傷程度。

    蛛網(wǎng)膜下腔出血;原代細(xì)胞培養(yǎng);海馬;神經(jīng)元;氧糖剝奪;神經(jīng)元特異性烯醇化酶

    徐偉華,趙冬,戴晶,等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶在神經(jīng)元氧糖剝奪損傷模型復(fù)氧后的表達(dá)變化[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2015,18(20):2444-2447.[www.chinagp.net]

    Xu WH,Zhao D,Dai J,et al.Changes of the expression of neuron specific enolase after the reoxygenation of neuron model damaged by oxygen-glucose deprivation[J].Chinese General Practice,2015,18(20):2444-2447.

    自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血(spontaneous subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期腦損傷(early brain injury,EBI)是導(dǎo)致SAH患者死亡風(fēng)險(xiǎn)升高和不良預(yù)后的首要原因[1],而海馬區(qū)神經(jīng)元是腦損傷最敏感的部位。神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)在腦損傷診斷及患者預(yù)后評(píng)估中起重要作用[2]。本課題前期體外實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠SAH模型,于傷后1、6、12、24、48、72 h時(shí)采用酶標(biāo)免疫檢測(cè)法(ELTSA)檢測(cè)SD大鼠腦組織NSE水平,原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡情況,初步證實(shí):NSE表達(dá)水平與細(xì)胞凋亡數(shù)呈正相關(guān)。本研究通過(guò)體外培養(yǎng)神經(jīng)元,建立損傷模型,探討神經(jīng)元損傷與NSE表達(dá)水平變化,判斷不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元損傷的嚴(yán)重程度,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取新生24 h內(nèi)SD大鼠3~4只,雌雄不限,SPF級(jí),由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    1.2 主要化學(xué)試劑 DMEM/F12(Hyclone公司),Neurobasal A medium(Gibco公司),胎牛血清(FBS,Gibco公司),B-27添加劑(Gibco公司),左旋多聚賴氨酸(PLL,Sigma公司),胰蛋白酶(Amerisco公司),磷酸鹽緩沖液(PBS,Hyclone公司),10 000 U/ml青霉素、10 000 U/ml鏈霉素和L-谷氨酰胺(Gibco公司),NSE多克隆抗體(Gibco公司),無(wú)血清培養(yǎng)基:Neurobasal培養(yǎng)基+2% B-27添加劑(50×)+1% L-谷氨酰胺(200 mmol/L)+雙抗(100 U/ml青霉素、100 U/ml鏈霉素),于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆茫欢嗑?L-賴氨酸包被液:采用PBS配制1 mg/ml多聚-L-賴氨酸溶液,0.22 μm濾器過(guò)濾除菌,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的分離及培養(yǎng) 取SD大鼠,常規(guī)碘伏消毒3遍后,75%乙醇消毒3遍,無(wú)菌條件下持眼科剪沿正中線剪開(kāi)頭皮與顱骨,暴露兩側(cè)大腦半球,用眼科無(wú)齒鑷迅速取出整個(gè)腦組織,放入冰上盛有PBS的玻璃培養(yǎng)皿中,仔細(xì)剝離腦組織表面血管及腦膜,去除小腦、腦干,分離大腦皮質(zhì),PBS清洗2~3遍(去除紅細(xì)胞)后,剪碎成1 mm×1 mm×1 mm,以0.25%胰蛋白酶在37 ℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中消化10~15 min(其間振蕩3次),加入種植培養(yǎng)基(90% DMEM-F12+10% FBS)終止消化3~5 min,去除終止消化液,加入5 ml種植培養(yǎng)基(90% DMEM-F12+10% FBS)后將大腦皮質(zhì)吸至離心管A中,輕輕吹打10次(切記吹打時(shí)不可有氣泡產(chǎn)生),冰中靜置2 min,吸取2 ml上清液至離心管B中,再次加入2 ml種植培養(yǎng)基(90% DMEM-F12+10% FBS)至離心管A中吹打10次,重復(fù)3遍,將裝有6 ml上清液的離心管B以1 000 r/min,4 ℃離心5 min,棄上清液后加入種植培養(yǎng)基,200目鋼篩過(guò)濾,輕輕吹打10次制成細(xì)胞懸液。臺(tái)盼藍(lán)拒染試驗(yàn),血細(xì)胞計(jì)數(shù)板鏡下計(jì)數(shù),以1.0×105~1.0×106個(gè)/ml的密度接種于多聚-L-賴氨酸包被過(guò)的培養(yǎng)皿中,置37 ℃ 5%CO295%濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4~6 h后,將種植培養(yǎng)基全量換成飼養(yǎng)培養(yǎng)基(97% Neurobasal-A+2% B-27+1% L-谷氨酰胺)維持培養(yǎng),每隔3 d飼養(yǎng)培養(yǎng)基全量換液。

    1.4 免疫熒光[3]染色鑒定神經(jīng)元 神經(jīng)元培養(yǎng)第4天后首先用0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次。4%多聚甲醛固定30 min,PBS洗滌5 min×3次。0.3% Triton X-100孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次。5% BSA封閉1 h。孵育NSE多克隆抗體(1∶100,Gibco公司,USA),4 ℃過(guò)夜。室溫復(fù)溫5 min,37 ℃恒溫30 min。孵育NSE二抗(1∶100,中杉金橋),37 ℃ 1 h。0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次。DAPI(1∶1 000,Sigma,USA)染細(xì)胞核5 min,0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次。50%甘油封片。培養(yǎng)板在普通熒光顯微鏡(Olympus,Japan)下檢測(cè)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)只加0.01 mol/L PBS和二抗,細(xì)胞均為陰性染色??贵w稀釋液為0.01 mol/L PBS。

    1.5 神經(jīng)元損傷模型的建立 體外應(yīng)用氧糖剝奪模型,能夠較理想地模擬體內(nèi)缺血低氧情況。選取培養(yǎng)7 d的神經(jīng)元,倒去原培養(yǎng)液,用PBS沖洗2遍,加入無(wú)糖培養(yǎng)基,置于通入95% N2和5% CO237 ℃的恒溫低氧培養(yǎng)箱中,孵育60 min后,去除無(wú)糖培養(yǎng)基,重新加入飼養(yǎng)培養(yǎng)基(97% Neurobasal-A+2% B-27添加劑+1% L-谷氨酰胺)置于37 ℃ 5% CO295%濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),分別在培養(yǎng)1、6、12、24、48、72 h時(shí)提取神經(jīng)元蛋白質(zhì)。

    1.6 Western blotting法檢測(cè)NSE蛋白表達(dá)水平 提取神經(jīng)元蛋白質(zhì)后,經(jīng)10% SDS-PAGE凝膠分離,采用半干法轉(zhuǎn)膜47 min,然后用5% BSA封閉2 h,加一抗置于搖床上放入4 ℃冰箱內(nèi)孵育過(guò)夜,室溫下?lián)u床上孵育二抗2 h,化學(xué)發(fā)光,曝光,于凝膠成像系統(tǒng)中采集圖像分析。

    2 結(jié)果

    2.1 神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)觀察 在倒置顯微鏡下,初次分離種植的海馬神經(jīng)元呈圓形或橢圓形,胞體透明,體積小,無(wú)突起,單個(gè)散在分布。培養(yǎng)4~6h,大部分細(xì)胞基本貼壁,12h可見(jiàn)部分細(xì)胞伸出短小突起,胞體立體感強(qiáng),發(fā)亮。培養(yǎng)1d,突起的長(zhǎng)度增加(見(jiàn)圖1A);培養(yǎng)3d,細(xì)胞明顯增多,胞體明顯增大,飽滿,突起明顯增長(zhǎng),多呈雙極、多極突起,相互連接交織成網(wǎng)狀(見(jiàn)圖1B);培養(yǎng)5~7d,胞體聚集,突起縱橫交錯(cuò),增粗、增長(zhǎng),形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(見(jiàn)圖1C、D)。

    注:圖A、B分別為培養(yǎng)1、3d細(xì)胞形態(tài);圖C、D為培養(yǎng)5~7d細(xì)胞形態(tài)

    圖1 大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)形態(tài)變化(×200)

    Figure1Morphologicalchangesofrathippocampusneuroncellsatdifferenttimepointsduringinvitroculture

    2.2 免疫熒光染色鑒定觀察結(jié)果 選取培養(yǎng)第4天的細(xì)胞(此時(shí)細(xì)胞形態(tài)較為典型,且膠質(zhì)細(xì)胞尚未發(fā)育成熟),免疫熒光染色,以胞質(zhì)和/或突起染成黃綠色為陽(yáng)性,整個(gè)細(xì)胞都不被染色為陰性。在20倍物鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野范圍內(nèi)的所有細(xì)胞,分別統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞核數(shù)(細(xì)胞總數(shù)),計(jì)算陽(yáng)性率(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞核數(shù)),陽(yáng)性率的平均數(shù)代表神經(jīng)元的純度[4]。經(jīng)鑒定,神經(jīng)元細(xì)胞核染色清晰,形態(tài)典型,突起走形如網(wǎng)狀,陽(yáng)性率為(93.6±1.6)%,見(jiàn)圖2。

    注:A為細(xì)胞核藍(lán)染,代表細(xì)胞總數(shù);B為陽(yáng)性神經(jīng)元;C為陰性神經(jīng)元

    圖2 免疫熒光染色計(jì)數(shù)陽(yáng)性神經(jīng)元

    Figure 2 Neuron cells of positive immunofluorescence staining

    2.3 Western blotting檢測(cè)NSE蛋白表達(dá) 各組NSE蛋白表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=500.75,P<0.01)。實(shí)驗(yàn)組損傷后各時(shí)間點(diǎn)NSE蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h NSE蛋白表達(dá)均高于細(xì)胞培養(yǎng)其他時(shí)間點(diǎn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)圖3、4)。

    注:NSE=神經(jīng)元特異性烯醇化酶

    圖3 Western blotting檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)NSE蛋白表達(dá)水平

    Figure 3 NSE protein expression levels tested by Western blotting at different time points

    注:與對(duì)照組比較,aP<0.05

    圖4 不同時(shí)間點(diǎn)NSE蛋白表達(dá)水平比較

    Figure 4 Comparison of NSE protein expression level at different time points

    3 討論

    EBI是指SAH發(fā)生后72 h內(nèi)出現(xiàn)的全腦直接損傷[5],早期海馬區(qū)神經(jīng)元即可出現(xiàn)凋亡、壞死及數(shù)目減少,在SAH患者預(yù)后中起重要作用。因此,EBI的研究在SAH患者的治療、預(yù)防中具有很大的潛力,能有效減輕SAH造成的損傷,對(duì)降低SAH后致殘率和病死率有重要意義[6]。

    近年來(lái),許多臨床及實(shí)驗(yàn)研究顯示,NSE僅存在于神經(jīng)元及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)中,正常情況下,血清和腦脊液中NSE的含量極少,然而在腦損傷后,部分神經(jīng)元壞死、崩解,從而導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞膜破壞,NSE可釋放入細(xì)胞間隙和腦脊液中,通過(guò)血-腦脊液屏障(BBB)進(jìn)入血液和腦脊液中。因此,NSE在腦損傷中的變化水平目前已成為廣大學(xué)者的研究熱點(diǎn)。有報(bào)道認(rèn)為,腦脊液或血液中增高的NSE與神經(jīng)元損傷的數(shù)目有關(guān)[7]。本研究通過(guò)Western blotting檢測(cè)神經(jīng)元損傷模型中NSE蛋白表達(dá),結(jié)果顯示,在神經(jīng)元損傷后1 h即有NSE低表達(dá),而在6 h時(shí)NSE表達(dá)明顯增加,且逐漸增多,24~48 h達(dá)到高峰,72 h表達(dá)逐漸減少,提示建模1 h后神經(jīng)元即有損傷并逐漸加重,24~48 h最嚴(yán)重,與本課題前期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,進(jìn)一步證實(shí)神經(jīng)元損傷后可引起NSE升高,血液中NSE升高及升高的幅度可以反映腦損傷的程度及范圍[8-9]。

    有報(bào)道認(rèn)為,腦出血后血腫周圍神經(jīng)元的死亡形式主要以凋亡為主[10-11]。有研究表明,SAH發(fā)生后的整個(gè)EBI過(guò)程中,同側(cè)額葉基底皮質(zhì)的自體吞噬顯著增加,造成了神經(jīng)元的損傷,并引起一系列的功能障礙[12]。在SAH發(fā)生后,凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)很早就被激活,引起腦水腫、腦血管痙攣、全腦缺血、免疫炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)等導(dǎo)致廣泛性的細(xì)胞凋亡[13],主要包括BBB、海馬和血管內(nèi)皮細(xì)胞。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育階段中神經(jīng)元凋亡最早出現(xiàn),成年個(gè)體極少見(jiàn)神經(jīng)元凋亡,一般多發(fā)生在病理情況下[14]。探索細(xì)胞凋亡在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮的作用,對(duì)揭示神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生機(jī)制及病程的進(jìn)展有重要意義[15]。本課題前期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組術(shù)后6 h即出現(xiàn)大量TUENL染色陽(yáng)性細(xì)胞,24~48 h達(dá)到高峰后逐漸下降[16],這與本實(shí)驗(yàn)中NSE表達(dá)的時(shí)間趨于一致,提示在腦損傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡發(fā)揮了重要的作用,NSE水平升高在一定程度上能夠反映腦損傷的嚴(yán)重程度,其機(jī)制可能與神經(jīng)元的凋亡率增高有關(guān)。

    綜上所述,NSE作為一種簡(jiǎn)便易行的生化監(jiān)測(cè)指標(biāo),能夠直接反映腦損傷的程度及范圍,監(jiān)測(cè)其水平變化在早期腦損傷患者病情判斷及臨床診療過(guò)程中存在一定的參考價(jià)值。此外,細(xì)胞凋亡對(duì)SAH后早期腦損傷的發(fā)生、發(fā)展有著重要作用,抑制海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡是否能夠改善SAH后早期腦損傷患者的預(yù)后仍需進(jìn)一步研究探討。

    [1]Pluta RM,Hansen-Schwartz J,Dreier J,et al.Cerebral vasospasm following subarachnoid hemorrhage:time for a new world of thought[J].Neurol Res,2009,31(2):151-158.

    [2]Foerch C,Singer OC,Neumann-Haefelin T,et al.Evaluation of serum S100B as a surrogate marker for long-term outcome and infarct volume in acute middle cerebral artery infarction[J].Arch Neurol,2005,62(7):1130-1134.

    [3]Xin G,Su Y,Wang GF,et al.Cultivation of cerebral cortex neuronal cells of newborn BALB/c mice[J].Letters in Biotechnology,2011,22(1):85-88.(in Chinese) 辛崗,蘇蕓,王革非,等.新生BALB/c小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立[J].生物技術(shù)通訊,2011,22(1):85-88.

    [4]Sun Q,Xu ZW,Ao HQ,et al.In-vitro primary culture and identification of hippocampal neurons from newborn rats[J].Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology,2010,21(5):461-464.(in Chinese) 孫琪,徐志偉,敖海清,等.大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞體外原代培養(yǎng)與鑒定[J].中藥新藥與臨床藥理,2010,21(5):461-464.

    [5]Cahill J,Calvert JW,Zhang JH.Mechanisms of early brain injury after subarachnoid hemorrhage[J].J Cereb Blood Flow Metab,2006,26(11):1341-1353.

    [6]邵春香,郭暉,張弘娟,等.蛛網(wǎng)膜下腔出血并發(fā)低鈉血癥36例臨床分析[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2011,25(9):920-922.

    [7]Barone FC,Clark RK,Price WJ,et al.Neuron-specific enolase increases in cerebral and systemic circulation following focal ischemia[J].Brain Res,1993,623(1):77-82.

    [8]Oksanen T,Tiainen M,Skrifvars MB,et al.Predictive power of serum NSE and OHCA score regarding 6-month neurologic outcome after out-of-hospital ventricular fibrillation and therapeutic hypothermia[J].Resuscitation,2009,80(2):165-170.

    [9]Marquardt G,Setzer M,Szelenyi A,et al.Prognostic relevance of serial S100b and NSE serum measurements in patients with spinal intradural lesions[J].Neurol Res,2009,31(3):265-269.

    [10]Qureshi AI,Suri MF,Ostrow PT,et al.Apoptosis as a form of cell death in intracerebral hemorrhage[J].Neurosurgery,2003,52(5):1041-1047.

    [11]Qureshi AI,Ling GS,Khan J,et al.Quantitative analysis of injured,necrotic,and apoptotic cells in a new experimental model of intracerebral hemorrhage[J].Crit Care Med,2001,29(1):152-157.

    [12]Lee JY,He Y,Sagher O,et al.Activated autophagy pathway in experimental subarachnoid hemorrhage[J].Brain Res,2009(1287):126-135.

    [13]Sugawara T,Jadhav V,Ayer R,et al.Thrombin inhibition by argatroban ameliorates early brain injury and improves neurological outcomes after experimental subarachnoid hemorrhage in rats[J].Stroke,2009, 40(4):1530-1532.

    [14]Savitz SI,Rosenbaum DM.Apoptosis in neurological disease[J].Neurosurgery,1998,42(3):555-574.

    [15]孫倩,李凈兵.細(xì)胞凋亡與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,31(12):1526-1528.

    [16]Wang JP,Wang YZ.Relationship of the changes of neuron specific enolase with neuronal apoptosis in brain injured rats after spontaneous subarachnoid hemorrhage[J].Journal of Chinese Practical Diagnosis and Therapy,2013,27(5):452-454.(in Chinese) 王建璞,王業(yè)忠.大鼠自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦損傷中神經(jīng)元細(xì)胞凋亡與神經(jīng)元特異性烯醇酶水平變化的關(guān)系[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2013,27(5):452-454.

    (本文編輯:賈萌萌)

    Changes of the Expression of Neuron Specific Enolase After the Reoxygenation of Neuron Model Damaged by Oxygen-glucose Deprivation

    XUWei-hua,ZHAODong,DAIJing,etal.

    MedicalSchoolofShiheziUniversity,Shihezi832000,China

    Objective To explore the changes of the expression of neuron specific enolase(NSE)after the reoxygenation of in vitro culture neuron model damaged by oxygen-glucose deprivation.Methods In vitro primary culture was conducted on the neurons in hippocampus area of newborn SD rats within 24 hours.Evaluation of the neurons was carried out by using immunofluorescent staining and electron microscope.By oxygen-glucose deprivation,the damaged neuron model which was ischemic and hypoxic was established.Protein was extracted from the model 1,6,12,24,48 and 72 hours after reoxygenation,and Western blotting method was used to test NSE expression level in the model at different time points.Results On day 4 during in vitro culture,immunofluorescent staining showed clear nuclear staining,typical shape of net with protuberance and deformation and a positive rate of(93.6±1.6)%.The two groups were significantly different in NSE protein expression level(F=500.75,P<0.01).The trial group was higher(P<0.05)than the control group in NSE protein expression at different time points after neuron damage.The NSE protein expression levels at hour 24 and hour 48 during in vitro culture were higher(P<0.05)than those at other time points.Conclusion NSE could be used as an indicator of SAH and EBI,for it could reflect the damage degree of brain tissue.

    Subarachnoid hemorrhage;Primary cell culture;Hippocampus;Neurons;Oxygen-glucose deprivation;Neuron specific enolase

    國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81360185);新疆生產(chǎn)兵團(tuán)博士基金資助項(xiàng)目(2011BB016)

    832000新疆石河子市,石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院(徐偉華,黃嘯元);石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科(趙冬,戴晶,劉祺,許暉,王業(yè)忠)

    王業(yè)忠,832000新疆石河子市,石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科;E-mail:wangyz2008@126.com

    R 743.35

    A

    10.3969/j.issn.1007-9572.2015.20.020

    2015-01-03;

    2015-04-20)

    猜你喜歡
    化酶烯醇腦損傷
    高效液相色譜法測(cè)定小麥中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇
    烯醇化酶在微生物中的研究進(jìn)展
    腦損傷 與其逃避不如面對(duì)
    幸福(2019年21期)2019-08-20 05:39:10
    兩種氯前列烯醇誘導(dǎo)母豬同期分娩的研究
    脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的制備與鑒定
    認(rèn)知行為療法治療創(chuàng)傷性腦損傷后抑郁
    胡黃連苷Ⅱ?qū)δX缺血損傷后神經(jīng)元特異性烯醇化酶表達(dá)的影響
    新生兒腦損傷的早期診治干預(yù)探析
    β-烯醇化酶及其mRNA在COPD下肢骨骼肌表達(dá)水平的研究
    急性腦梗死患者血清缺血修飾清蛋白和神經(jīng)元特異性烯醇化酶變化的臨床價(jià)值
    中国三级夫妇交换| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久午夜欧美精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 看非洲黑人一级黄片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 高清午夜精品一区二区三区| 又爽又黄a免费视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 美女内射精品一级片tv| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品国产av成人精品| 精品熟女少妇av免费看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲无线观看免费| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩大片免费观看网站| 日日啪夜夜撸| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 水蜜桃什么品种好| 久久 成人 亚洲| 亚洲av.av天堂| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 人体艺术视频欧美日本| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久99一区二区三区| 91aial.com中文字幕在线观看| 十分钟在线观看高清视频www | 免费看av在线观看网站| 免费黄频网站在线观看国产| 97超碰精品成人国产| h日本视频在线播放| 男的添女的下面高潮视频| 精华霜和精华液先用哪个| 久久久久视频综合| 日韩成人av中文字幕在线观看| 婷婷色综合www| 韩国av在线不卡| 日日啪夜夜爽| 97超碰精品成人国产| 欧美区成人在线视频| 欧美精品一区二区大全| 日韩中字成人| 久久久国产一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美精品亚洲一区二区| 女人精品久久久久毛片| 亚洲美女视频黄频| 黑人猛操日本美女一级片| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 日韩强制内射视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 熟女电影av网| 亚洲欧美日韩东京热| 看免费成人av毛片| 老司机影院毛片| 国产成人精品久久久久久| 国产成人精品无人区| 日韩三级伦理在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久这里有精品视频免费| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 丰满乱子伦码专区| 一级av片app| 亚洲在久久综合| 日本与韩国留学比较| 国产高清国产精品国产三级| 色视频www国产| 国产毛片在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 国模一区二区三区四区视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久久久久久久久成人| 国产精品国产三级专区第一集| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 赤兔流量卡办理| 日韩人妻高清精品专区| 午夜免费鲁丝| av线在线观看网站| 亚洲电影在线观看av| 亚洲av.av天堂| 春色校园在线视频观看| 久久久国产欧美日韩av| 免费观看在线日韩| 大码成人一级视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲四区av| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲成色77777| 亚洲真实伦在线观看| 一级毛片 在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 男人和女人高潮做爰伦理| 嘟嘟电影网在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久国产精品麻豆| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品成人在线| 男女边吃奶边做爰视频| 日本欧美国产在线视频| 99热这里只有是精品50| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 中文字幕人妻丝袜制服| 男女免费视频国产| 一区二区三区精品91| 国产真实伦视频高清在线观看| 成人国产麻豆网| 国产亚洲91精品色在线| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲成人手机| 免费黄频网站在线观看国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品色激情综合| 大香蕉97超碰在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩视频精品一区| 嫩草影院入口| 国产av一区二区精品久久| a级毛片在线看网站| 搡老乐熟女国产| 久久人人爽人人片av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 美女cb高潮喷水在线观看| 老女人水多毛片| 国产精品一区二区性色av| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲电影在线观看av| 国产亚洲91精品色在线| 青春草国产在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 99热网站在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产一区二区三区综合在线观看 | 只有这里有精品99| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久久久久久久久丰满| 在线天堂最新版资源| 最近最新中文字幕免费大全7| 在现免费观看毛片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日韩大片免费观看网站| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲性久久影院| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产av一区二区精品久久| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产高清有码在线观看视频| 午夜影院在线不卡| 深夜a级毛片| 大片免费播放器 马上看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 高清黄色对白视频在线免费看 | 一个人看视频在线观看www免费| 五月伊人婷婷丁香| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 观看免费一级毛片| 国产精品福利在线免费观看| 插阴视频在线观看视频| 久久亚洲国产成人精品v| av福利片在线| 在现免费观看毛片| 欧美+日韩+精品| 成人毛片60女人毛片免费| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲成人一二三区av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产成人freesex在线| 男的添女的下面高潮视频| 精品一区二区免费观看| 天堂8中文在线网| 成年人午夜在线观看视频| 中文字幕制服av| 两个人免费观看高清视频 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 中文在线观看免费www的网站| 国产在线视频一区二区| 亚洲美女黄色视频免费看| 国国产精品蜜臀av免费| 在现免费观看毛片| 男女无遮挡免费网站观看| 久久国产精品大桥未久av | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久久久精品性色| 欧美最新免费一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产av国产精品国产| 丝袜喷水一区| 日韩精品有码人妻一区| 热99国产精品久久久久久7| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产免费福利视频在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产淫语在线视频| 黑丝袜美女国产一区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产精品成人在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 一本久久精品| 欧美日本中文国产一区发布| 我的女老师完整版在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲天堂av无毛| 国国产精品蜜臀av免费| 老司机影院成人| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一级a做视频免费观看| 午夜老司机福利剧场| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲色图综合在线观看| 精品一区二区三卡| 精品一区二区免费观看| 三级国产精品片| 国产av码专区亚洲av| 伦理电影免费视频| 亚洲三级黄色毛片| 国产成人免费观看mmmm| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 老司机影院毛片| 男女国产视频网站| 欧美97在线视频| 亚洲天堂av无毛| 男人爽女人下面视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产精品国产精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 青春草国产在线视频| 日本免费在线观看一区| 久久久久久久精品精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲91精品色在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲av免费高清在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 一级毛片电影观看| 国产成人精品一,二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久6这里有精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 精品一区二区免费观看| 欧美另类一区| 精品久久久久久久久av| 嫩草影院新地址| 精品少妇内射三级| 国产精品久久久久久精品古装| 尾随美女入室| 国产黄频视频在线观看| 亚洲成人手机| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久午夜欧美精品| 嫩草影院入口| 女性生殖器流出的白浆| 免费大片18禁| 亚洲精品一二三| 成人国产av品久久久| 春色校园在线视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 视频中文字幕在线观看| 人妻 亚洲 视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产视频内射| 男人舔奶头视频| 国产精品熟女久久久久浪| 国产成人精品福利久久| 观看美女的网站| 国产淫语在线视频| 国产精品人妻久久久影院| 欧美 日韩 精品 国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品99久久久久久久久| 搡老乐熟女国产| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 最近手机中文字幕大全| 夫妻性生交免费视频一级片| 黄色毛片三级朝国网站 | 精品少妇内射三级| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久精品国产自在天天线| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品久久久久久久电影| 一本久久精品| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久精品精品| 色5月婷婷丁香| 夫妻午夜视频| 欧美97在线视频| 亚洲国产av新网站| 成年av动漫网址| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品熟女久久久久浪| .国产精品久久| 国精品久久久久久国模美| 日韩在线高清观看一区二区三区| 多毛熟女@视频| 一级爰片在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 97在线人人人人妻| 日本wwww免费看| 丝袜在线中文字幕| 日本与韩国留学比较| 少妇 在线观看| 久久99一区二区三区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久国产精品大桥未久av | 老司机影院毛片| 黄色毛片三级朝国网站 | 好男人视频免费观看在线| 亚洲在久久综合| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲国产av新网站| 亚洲国产精品国产精品| 99久久精品热视频| 国产精品久久久久久久久免| 日韩中字成人| 亚洲av综合色区一区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 乱系列少妇在线播放| 我的老师免费观看完整版| 国产免费一区二区三区四区乱码| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久 成人 亚洲| 亚洲久久久国产精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久热这里只有精品99| 黑人高潮一二区| 中文在线观看免费www的网站| 视频区图区小说| 日本黄色片子视频| 中文欧美无线码| 韩国av在线不卡| 2022亚洲国产成人精品| 少妇人妻精品综合一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 女性被躁到高潮视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 美女内射精品一级片tv| 国产有黄有色有爽视频| 最后的刺客免费高清国语| 久久久国产精品麻豆| 国精品久久久久久国模美| 中国美白少妇内射xxxbb| xxx大片免费视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲人成网站在线播| 久久人妻熟女aⅴ| 黑人猛操日本美女一级片| 自线自在国产av| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲精品国产成人久久av| 中文字幕亚洲精品专区| 伊人亚洲综合成人网| 国产黄片视频在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av网站免费在线观看视频| 日日爽夜夜爽网站| 人人妻人人看人人澡| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产免费又黄又爽又色| 午夜av观看不卡| 亚洲综合精品二区| 亚洲国产日韩一区二区| 国产视频首页在线观看| 欧美高清成人免费视频www| av一本久久久久| 少妇的逼水好多| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲国产精品999| 久久综合国产亚洲精品| 黄色配什么色好看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产高清不卡午夜福利| 能在线免费看毛片的网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产在视频线精品| 欧美精品一区二区大全| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产极品天堂在线| 免费看日本二区| 视频区图区小说| 久久精品国产a三级三级三级| 日日撸夜夜添| 男人添女人高潮全过程视频| 伦理电影免费视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产av国产精品国产| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产伦在线观看视频一区| 777米奇影视久久| 青春草国产在线视频| 国产成人精品福利久久| 久久久久久伊人网av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 九九在线视频观看精品| 我要看日韩黄色一级片| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 曰老女人黄片| 黑丝袜美女国产一区| 日日爽夜夜爽网站| 熟女av电影| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 熟女电影av网| 高清不卡的av网站| 熟女av电影| 丰满乱子伦码专区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av成人精品一二三区| 韩国高清视频一区二区三区| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产欧美亚洲国产| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人精品一,二区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美97在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 三级国产精品片| av播播在线观看一区| 另类精品久久| 一区二区av电影网| av在线老鸭窝| 91久久精品国产一区二区三区| 麻豆成人av视频| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品无大码| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 七月丁香在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 偷拍熟女少妇极品色| 国产成人精品福利久久| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲精品自拍成人| 午夜精品国产一区二区电影| 免费大片黄手机在线观看| 国产在视频线精品| freevideosex欧美| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产精品免费大片| 国产一区二区三区综合在线观看 | 最近中文字幕高清免费大全6| .国产精品久久| 在现免费观看毛片| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 在线观看三级黄色| 日韩成人伦理影院| 国产免费视频播放在线视频| 永久免费av网站大全| 国产视频内射| 国产成人91sexporn| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 伦理电影大哥的女人| 老司机影院成人| av在线观看视频网站免费| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲国产精品专区欧美| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久国产精品大桥未久av | 美女主播在线视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 午夜91福利影院| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品久久久久久久久免| 99久久中文字幕三级久久日本| 99久久精品一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 插逼视频在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美bdsm另类| 亚洲三级黄色毛片| 国产高清有码在线观看视频| 永久网站在线| 亚洲精品456在线播放app| 99久久中文字幕三级久久日本| 18+在线观看网站| 一二三四中文在线观看免费高清| 中文天堂在线官网| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久久精品久久久久真实原创| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线看a的网站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费少妇av软件| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲人成网站在线观看播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久av网站| 黄色怎么调成土黄色| 欧美人与善性xxx| 热re99久久国产66热| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 插阴视频在线观看视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 精品少妇黑人巨大在线播放| av在线播放精品| 少妇高潮的动态图| 婷婷色综合www| 男的添女的下面高潮视频| 日本黄色片子视频| 久久精品国产自在天天线| 国产色爽女视频免费观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 中文字幕久久专区| 中国国产av一级| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美精品国产亚洲| 久热这里只有精品99| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品久久久久久久久免| 日韩精品有码人妻一区| 久久久国产欧美日韩av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 少妇精品久久久久久久| 久久久久视频综合| 国产在线男女| 中国国产av一级| 免费看光身美女| 黄色毛片三级朝国网站 | 亚洲熟女精品中文字幕| 丰满少妇做爰视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品日本国产第一区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美日韩av久久| 只有这里有精品99| 欧美 日韩 精品 国产| 国产一区二区在线观看日韩| 十八禁高潮呻吟视频 | 熟女av电影| 日日啪夜夜撸| 777米奇影视久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产伦精品一区二区三区四那| 在线观看美女被高潮喷水网站| 老司机影院毛片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲av中文av极速乱| 如何舔出高潮| 观看av在线不卡| 亚洲精品一区蜜桃| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产又色又爽无遮挡免| 一本色道久久久久久精品综合| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久韩国三级中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品国产av成人精品| 国产极品天堂在线| av黄色大香蕉| 久久久久人妻精品一区果冻| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品偷伦视频观看了| 涩涩av久久男人的天堂| 搡老乐熟女国产| 国产高清不卡午夜福利| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩精品有码人妻一区| 日韩一区二区视频免费看| 色视频在线一区二区三区| 插逼视频在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 美女国产视频在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲欧美一区二区三区国产|