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    四種香蘑屬真菌子實體抗氧化活性比較分析

    2015-03-01 02:50:27薛春梅張躍華李佳琳杜春梅趙永勛
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年4期
    關(guān)鍵詞:花臉清除率真菌

    李 凡,薛春梅,趙 曄,張躍華,李佳琳,杜春梅,趙永勛*

    (1.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江佳木斯 154007;2.北京碧水源膜科技股份有限公司,北京 101407)

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    四種香蘑屬真菌子實體抗氧化活性比較分析

    李 凡1,薛春梅1,趙 曄2,張躍華1,李佳琳1,杜春梅1,趙永勛1*

    (1.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江佳木斯 154007;2.北京碧水源膜科技股份有限公司,北京 101407)

    [目的] 為了評價4種香蘑屬真菌的抗氧化活性。[方法] 對4種香蘑屬真菌子實體微波水提物進(jìn)行抗氧化活性比較分析。[結(jié)果] 灰褐香蘑(Lepistaluscina)、白香蘑(Lepistacaespitosa)、紫丁香蘑(Lepistanuda)、花臉香蘑(Lepistasordida)4種香蘑子實體提取物對二苯基苦味?;诫伦杂苫?·DPPH)和羥自由基(·OH)的清除作用較顯著,對·DPPH的清除率依次達(dá)到73.9%、59.2%、80.7%和82.8%;對·OH的清除率分別達(dá)到92.5%、95.7%、83.6%和94.4%。這4種真菌子實體提取物對超氧陰離子亦有一定的清除作用。[結(jié)論]4種香蘑真菌子實體中可能存在著活性較強(qiáng)的天然抗氧化活性物質(zhì)。

    香蘑屬真菌; 抗氧化活性; DPPH; 羥自由基; 超氧陰離子

    現(xiàn)代研究表明,許多疾病如心腦血管疾病、癌癥以及人體衰老等過程都與自由基過剩有關(guān)[1]。自由基是生物體內(nèi)生物化學(xué)反應(yīng)的普遍介質(zhì),是帶有不配對電子的原子、原子團(tuán)或分子如羥自由基、超氧陰離子自由基等,可直接損傷各種生物膜,導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生[2]。因而,如何開發(fā)利用抗氧化活性物質(zhì)調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝、延緩衰老、預(yù)防疾病等問題已引起人們的廣泛關(guān)注。國內(nèi)外的許多研究證明,很多大型真菌子實體和發(fā)酵產(chǎn)物中多含有抗氧化活性物質(zhì)[3-6]。這表明大型真菌可能是提取天然、安全的抗氧化活性物質(zhì)的理想原料。

    香蘑屬(Lepista)真菌隸屬于真菌門(Eumycota)擔(dān)子菌綱(Basidiomysetes)傘菌目(Agaricales)口蘑科(Tricholomatceae)。我國已發(fā)現(xiàn)有12種[7]。到目前為止,關(guān)于香蘑屬真菌子實體提取物抗氧化活性的比較研究未見報道。筆者主要通過制備灰褐香蘑[Lepistaluscina(Fr.) Sing.]、白香蘑[Lepistacaespitosa(Bres.)Sing.]、紫丁香蘑[Lepistanuda(Bull.:Fr.)Cooke]、花臉香蘑[Lepistasordida(Fr.)Sing]等4種常見香蘑子實體提取物,測定其清除·DPPH、·OH以及超氧陰離子的能力,評價這4種香蘑屬真菌的抗氧化活性,并且進(jìn)行比較分析。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料供試灰褐香蘑、白香蘑、紫丁香蘑、花臉香蘑均為野生香蘑,采集于黑龍江省佳木斯市周邊林場。

    1.2 提取液的制備[8]將采集的白香蘑、灰褐香蘑、紫丁香蘑、花臉香蘑放入干燥箱中烘干,準(zhǔn)確稱取烘干后這4種香蘑各5.0 g,放入燒杯中,按料液比1∶20加雙蒸水至10.00 ml,用玻棒攪拌均勻,同時放入微波爐中,調(diào)至300 W輸出檔,定時1 min,取出,8 000 r/nmin離心4 min,取上清液,即為這4種香蘑的提取液。將這4種香蘑的提取液分別稀釋至0.5、1、2、4、6、8、10 mg/ml的濃度梯度,4 ℃冰箱保存,備用(保存時間最好不超過72 h)。

    1.3 指標(biāo)測定與方法

    1.3.1清除·DPPH能力的測定[9]。精確稱取DPPH試劑0.015 8 g,用無水乙醇溶解,并定容至200.0 ml,使其濃度為200 μmol/L,避光保存(該溶液最好現(xiàn)配現(xiàn)用)。準(zhǔn)確吸取各濃度樣品溶液2.0 ml與2.0 ml DPPH溶液,加入同一具塞試管中,充分混勻,37 ℃恒溫水浴暗反應(yīng)30 min后,于波長517 nm處測定吸光度(Ai),以無水乙醇調(diào)零。每個樣品平行測定3次,取平均值。按以下公式,計算各待測樣品對DPPH自由基的清除率。

    式中,Ai為2.0ml樣品溶液與2.0mlDPPH試劑混合液的吸光度;Aj為2.0ml樣品溶液與2.0ml空白溶劑(無水乙醇)混合液的吸光度;Ao為2.0mlDPPH溶液與2.0ml溶劑混合液的吸光度。

    1.3.2清除·OH能力的測定[10-12]。采取鄰二氮菲-Fe2+法測定羥基自由基的清除率。吸取 1.5 ml 5 mmol/L 鄰二氮菲應(yīng)用液,加入4 ml pH 7.4磷酸鈉緩沖液,再加入1.0 ml 7.5 mmol/L FeSO4溶液,立即混勻。加入1 ml某一濃度的樣品溶液,立即混勻。加入 1.5 ml雙蒸水以補(bǔ)充體積,最后加入1.0 ml濃度1% H2O2溶液,以雙蒸水代替H2O2溶液作為空白對照,輕輕混勻。37 ℃保溫 90 min,于 536 nm測定吸光度。

    ·OH清除率計算公式為:

    式中,Ai為加入樣品(子實體提取液)及H2O2;Aj為加H2O2而不加樣品;As為兩者都不加;Ao為空白對照。

    1.3.3清除超氧陰離子(·O2-)能力的測定[10-12]。取pH為8.2的Tris-HCl緩沖液6.0 ml,加入不同濃度的樣品0.5 ml,37 ℃水浴 10 min,最后加入 37 ℃預(yù)熱過的7 mmol/L PR(鄰苯三酚鹽酸溶液 )1.0 ml,混勻后反應(yīng)4 min,用0.5 ml濃鹽酸終止反應(yīng),測定325 nm處吸光度(A)以等體積pH為8.2的Tris-HCl緩沖液為空白吸光度(A0)。蒸餾水調(diào)零。

    式中,A(試樣)為試樣組在波長325nm的吸光度;A0為空白組在波長325nm的吸光度值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 ·DPPH清除率的比較對這4種香蘑屬真菌子實體的水提物清除·DPPH的能力進(jìn)行雙因素方差分析。從圖1可以看出,這4種香蘑屬真菌子實體的水提物都有一定清除·DPPH的能力。在一定程度上,隨著子實體提取物濃度的增加,清除·DPPH的能力也在升高。當(dāng)質(zhì)量濃度為4.00 mg/ml時,灰褐香蘑、白香蘑、紫丁香蘑和花臉香蘑的·DPPH清除率均達(dá)到較大值,分別為70.5%、58.6%、80.4%和80.5%。·DPPH去除能力強(qiáng)弱順序為花臉香蘑>紫丁香蘑>灰褐香蘑 >白香蘑。在0.50~4.00 mg/ml濃度梯度范圍內(nèi),·DPPH清除率隨著濃度的升高而增加。當(dāng)質(zhì)量濃度為6.00 mg/ml時,花臉香蘑的清除率最大,達(dá)到82.7%。在6.00~10.00 mg/ml濃度梯度范圍內(nèi),隨著濃度的增加,4種香蘑的·DPPH清除率均有些許的降低。在0.50~10.00 mg/ml濃度梯度范圍內(nèi),同種香蘑不同濃度梯度·DPPH清除率均有顯著差異。在提取物濃度相同的情況下,不同香蘑清除·DPPH能力之間存在差異,但白香蘑均與其他3種香蘑之間有顯著性差異。

    2.2 清除·OH能力的比較從圖2可以看出,4種香蘑屬真菌子實體均有很強(qiáng)的清除·OH能力,在0.50~10.00 mg/ml濃度梯度范圍內(nèi)對·OH的清除能力均隨提取物質(zhì)量濃度的增加而升高。當(dāng)質(zhì)量濃度為4.00 mg/ml時,去除能力強(qiáng)弱順序為花臉香蘑>白香蘑>灰褐香蘑>紫丁香蘑。當(dāng)質(zhì)量濃度為10 mg/ml時,白香蘑的清除率最大,達(dá)到94.9%。在提取物濃度相同的情況下,不同香蘑·OH的能力均存在差異,但白香蘑均與其他3種香蘑之間的清除率均有顯著差異。

    2.3 清除超氧陰離子能力的比較由圖3可知,4種香蘑屬真菌子實體對鄰苯三酚自氧化均有抑制作用,在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對超氧陰離子的清除能力均隨提取物質(zhì)量濃度的增加而升高。在所測樣品中,白香蘑具有較強(qiáng)的清除超氧陰離子的能力,并且隨著濃度的升高而增加。當(dāng)質(zhì)量濃度為4.00 mg/ml時,清除超氧陰離子能力的強(qiáng)弱順序為花臉香蘑>白香蘑>灰褐香蘑>紫丁香蘑。而當(dāng)質(zhì)量濃度為10.00 mg/ml時,白香蘑的清除率最高,達(dá)到25.4%。在0.50~4.00 mg/ml濃度梯度范圍內(nèi),各香蘑屬真菌間的清除率無顯著差異,但隨著質(zhì)量濃度的升高,紫丁香蘑與其他3種香蘑的清除率均有顯著性差異。這可能與紫丁香蘑的藥用成分有關(guān)。

    3 討論

    目前,食品安全成為全世界關(guān)注的話題。人工合成抗氧化劑存在潛在的致癌作用,以天然抗氧化劑取代合成抗氧化劑是食品行業(yè)的發(fā)展趨勢[13]。傳統(tǒng)食用菌因含有多種抗氧化成分,受到人們的青睞,而對于那些珍惜的野生食用菌,科學(xué)家對其進(jìn)行系統(tǒng)性抗氧化活性比較分析的研究較少。

    研究表明,灰褐香蘑、白香蘑、紫丁香蘑、花臉香蘑4種香蘑屬真菌子實體微波處理水提取物對·DPPH和·OH的清除作用比較顯著,其中對·DPPH的清除率分別達(dá)到73.0%、58.6%、80.0%和82.7%,花臉香蘑的清除能力最強(qiáng);對·OH 的清除率分別達(dá)到91.0%、94.8%、82.3和90.3%,白香蘑的清除能力最強(qiáng)。4種香蘑屬真菌子實體的水提物對超氧陰離子均有一定的清除作用,分別達(dá)到17.3%、25.4%、14.8和17.5%,白香蘑的清除能力最強(qiáng)。這4種香蘑真菌子實體中可能存在著活性較強(qiáng)的天然抗氧化活性物質(zhì),推測其水提物中含有較多親水性抗氧化活性物質(zhì)。該研究沒有對這4種香蘑屬真菌子實體中的抗氧化活性物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化,所以不能確定抗氧化活性物質(zhì)的具體成分,有待于今后進(jìn)行深入研究。

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    A Comparative Analysis on Antioxidant Activity for Four Kinds ofLepistaepiphyte

    LI Fan1, XUE Chun-mei1, ZHAO Ye2, ZHAO Yong-xun1*et al

    (1.College of Life Science, Jiamusi University, Jiamusi, Heilongjiang 154007;2. Beijing Origin Water Membrane Technology Co. Ltd, Beijing 101407)

    [Objective] The research aimed to evaluate the antioxidant activity of four kinds ofLepistaepiphyte. [Method] The comparative analysis for anti-oxidant activity of fungi microwave water extracts of the four fragrant mushroom fruiting bodies was carried out. [Result] Fungi microwave water extracts ofLepistaepiphyte,Lepistaluscina,Lepistacaespitosa,LepistanudaandLepistasordidashowed significant clearance ,which was 73.0%, 73.0%, 58.6% and 73.0% respectively to ·DPPH and 91.0%, 94.8%, 82.3% and 91.0% respectively to ·OH in the microwave processed water extract of their fruiting body. Moreover, the fruiting body extracts of the four kinds of fungus showed a clear effect on superoxide anion. [Conclusion] Fruiting body of four kinds ofLepistaepiphytemight contain natural antioxidant substances.

    Lepistaepiphyte; Antioxidant activity; DPPH; Hydroxyl free radicals; Superoxide anion

    黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究面上項目(12531696)。

    李凡(1989-),女,山東陽谷人,碩士研究生,研究方向:微生物學(xué)。*通訊作者,教授,碩士生導(dǎo)師,從事真菌生物化學(xué)方面的研究。

    2014-12-15

    S 646

    A

    0517-6611(2015)04-015-03

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