膽固醇氧化物分析方法研究進(jìn)展

方 益， 趙 凱， 周 勇， 趙巧靈*

(1.浙江省海洋水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心，浙江舟山 316000；2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江舟山 316000；3.浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316000；4.杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)院，浙江杭州 310000)

?

膽固醇氧化物分析方法研究進(jìn)展

方 益1,2,3， 趙 凱4， 周 勇1， 趙巧靈1*

(1.浙江省海洋水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心，浙江舟山 316000；2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江舟山 316000；3.浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316000；4.杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)院，浙江杭州 310000)

介紹了膽固醇氧化物種類，綜述目前國內(nèi)外對(duì)膽固醇氧化物檢測(cè)方法：包括油脂提取、膽固醇氧化物純化、富集，及儀器分析方法對(duì)其定性、定量檢測(cè)。

膽固醇氧化物；膽固醇氧化物檢測(cè)；色譜分析

膽固醇是有機(jī)生物細(xì)胞的極為重要的組成部分，廣泛分布在所有的生物器官中[1]，但是膽固醇氧化物在光照、加熱等環(huán)境因素影響時(shí)，其內(nèi)部就會(huì)快速發(fā)生一系列氧化反應(yīng)，會(huì)造成多種膽固醇氧化產(chǎn)物的產(chǎn)生[2]。膽固醇氧化物可造成生物體內(nèi)DNA的損壞以及致癌性和致突變性危害[3-4]，膽固醇氧化物在血管內(nèi)聚集，也會(huì)造成血管內(nèi)膜損傷、神經(jīng)衰弱和誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化等慢性疾病[5]，對(duì)人體的健康有很大的潛在威脅[6]。筆者闡述了形成膽固醇氧化物的各類影響因素，以此為基礎(chǔ)，介紹了膽固醇氧化物的提取、富集、凈化和色譜分析方法，為分析研究膽固醇氧化物的應(yīng)用檢測(cè)提供一定的理論依據(jù)。

1 膽固醇氧化物的形成機(jī)制

一般未加工過的食品中不含有膽固醇氧化物，但在加工過程中就會(huì)產(chǎn)生膽固醇氧化物，當(dāng)食品在光、熱、氧等環(huán)境因素影響時(shí)，氧化反應(yīng)就在膽固醇內(nèi)部快速進(jìn)行，例如脫氫、脫水等反應(yīng)，導(dǎo)致多種膽固醇氧化產(chǎn)物的產(chǎn)生(圖1)[7]，其自氧化反應(yīng)的速度由其側(cè)鏈的長度決定，同時(shí)一些自氧化反應(yīng)需要生物活性酶的參與。膽固醇氧化發(fā)生在碳7、碳20和碳25位置上，氧化反應(yīng)發(fā)生時(shí)，有一個(gè)氫會(huì)從第7位的碳上脫去，之后加一個(gè)氧形成了差向異構(gòu)體：3β-羥膽固醇基-5-烯-7α-氫過氧化物和3β-羥膽固醇基-5 -烯-7β-氫過氧化物，其中后者較為穩(wěn)定[8]。第20位碳和第25位碳的位置上也可能發(fā)生脫氫，接著會(huì)形成3β-羥膽固醇基過氧化物。在此過程中，此類氫過氧化物結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌€(wěn)定的化合物，包括膽固醇基-5-烯-3β,7α-二醇、膽固醇基-5-烯-7-酮、膽固醇基-5-烯-3β-20α-二醇、膽固醇基-5-烯-3β,25-二醇、5,6α-環(huán)氧-5α-膽固醇烷-3β-醇、5,6β-環(huán)氧-5β-膽固醇烷-3β-醇、膽固醇烷-3β-醇和膽固醇烷-3β,5α,6β-三醇等[9]。在這些復(fù)雜的形態(tài)變化中，7-酮膽固醇是一種相當(dāng)穩(wěn)定的最終產(chǎn)物。

2 膽固醇氧化物的提取

2.1 脂類物質(zhì)的提取在食品中，膽固醇氧化物溶解在脂類中，故提取膽固醇氧化物須先提取與之相溶的脂溶性物質(zhì)，例如酯化游離膽固醇、游離脂肪酸、甘油三酯等，提取的方式有：索氏抽提法、液液萃取法、超聲提取法等。在一些研究報(bào)道中，使用最頻繁的方法是以2種或者3種溶劑以不同的比例來提取，這樣可以充分地提取不同脂類物質(zhì)，同時(shí)也可以將其他非脂質(zhì)物質(zhì)去除，避免了提取液基質(zhì)的復(fù)雜性。極性和非極性基團(tuán)同時(shí)存在于膽固醇氧化物中，所以使用單一的溶劑提取效果不理想，例如非極性溶劑(正己烷等)和極性溶劑(丙酮、甲醇等)單獨(dú)使用提取，不適于提取膽固醇氧化物。故需使用不同配比的混合溶劑進(jìn)行提取，甲醇-氯仿體系[10]經(jīng)常被用來提取膽固醇氧化物。Hara 等采用正己烷與異丙醇(體積比為3∶2)對(duì)膽固醇氧化物提取，能夠不使用具有神經(jīng)性毒性的氯仿，已廣泛應(yīng)用于對(duì)膽固醇氧化物提取[11]。也有研究報(bào)道了其他方法對(duì)膽固醇氧化物進(jìn)行提取，例如加速溶劑萃取法、超臨界萃取法，雖然這些方法的萃取效率和效果都很好，但使用和維護(hù)成本較高，故沒能廣泛應(yīng)用。在萃取膽固醇氧化物的過程中，要盡量避免體系與氧氣的接觸，避免膽固醇氧化物再次氧化，用正己烷來溶解提取的油脂，以供下次使用。

2.2 脂類物質(zhì)的皂化和酯交換膽固醇氧化物在提取物中是痕量級(jí)別，所提取脂類物質(zhì)中含有甘油三酯、酯化游離甾醇、游離脂肪酸等，所以必須對(duì)提取的脂類物質(zhì)進(jìn)行凈化操作，但膽固醇氧化物在凈化的過程中會(huì)有損失，所以凈化方法也是整個(gè)膽固醇氧化物檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)?，F(xiàn)凈化方法主要有以下幾種，層析法、酯交換法、皂化法。皂化是堿水解反應(yīng)，皂化目的是將脂類中甘油三酯和游離脂肪酸變?yōu)樗苄喳}類物質(zhì)，能夠更加容易除去，在該過程中膽固醇氧化物不受影響。由于油脂具有較為復(fù)雜的體系構(gòu)成，會(huì)與其他脂類物質(zhì)結(jié)合，例如游離脂肪酸、苷類物質(zhì)等，而皂化可解開這些膽固醇氧化物和脂類物質(zhì)的結(jié)合。通過皂化反應(yīng)，甘油三酯會(huì)轉(zhuǎn)化為水溶性鹽類，水溶性鹽類能夠溶于水相中；而膽固醇和膽固醇氧化物等不能被皂化的物質(zhì)能夠溶于有機(jī)相中，故可以加入水和有機(jī)相(如正己烷等)，從而將膽固醇氧化物與甘油三酯等皂化物分離開來。膽固醇氧化物的組成及穩(wěn)定性會(huì)被皂化過程中皂化溫度的高低所影響。過高的皂化溫度會(huì)增加膽固醇被氧化和膽固醇氧化物被再次氧化的可能性[12]，故目前多采用冷皂化，即在室溫或略高于室溫下進(jìn)行皂化。皂化反應(yīng)多在15 h以上，皂化完畢用有機(jī)溶劑(乙醚、石油醚、正己烷等)將未被皂化物萃取出來。

將原有的酯鍵斷裂，形成酸和醇，然后再與其他酸和醇合成新的酯，這一過程稱為酯交換反應(yīng)。甲醇-甲醇鈉溶液通常作為酯交換試劑，在酯交換過程中，膽固醇酯中會(huì)發(fā)生膽固醇與甲醇互換，從而生成脂肪酸甲酯。酯交換過程可以在0.5 h內(nèi)能完成，具有反應(yīng)時(shí)間短、效率高等優(yōu)點(diǎn)[13]。Lars Johnsson 等在植物油中加入已知量膽固醇氧化物，通過酯交換、固相萃取小柱洗脫，經(jīng)儀器分析，分析得到膽固醇氧化物回收率為 95%[14]。

3 膽固醇氧化物的富集

對(duì)膽固醇氧化物富集，一般采用SPE柱法進(jìn)行富集。SPE柱法因效率高、靈敏度高、回收率高，所以越來越受到人們關(guān)注。SPE柱法的原理是，根據(jù)各種組分與吸附劑之間不同極性進(jìn)行分離。膽固醇氧化物與其他物質(zhì)能夠使用SPE柱進(jìn)行分離，通過不同極性溶劑淋洗和洗脫小柱，分離膽固醇氧化物和油脂中其他成分，可達(dá)到很好的分離效果。如今SPE柱經(jīng)過多年的發(fā)展，具有了很多類型，如弗羅里硅土小柱、氨基柱、氧化鋁柱、硅膠柱等；硅膠柱和氨基柱常被用于膽固醇氧化物的富集，這兩款SPE柱都為正相柱。正己烷/乙醚混合溶劑或正己烷單一溶劑并不會(huì)將膽固醇氧化物洗脫下[15]。也有研究對(duì)比了幾款SPE柱對(duì)膽固醇氧化物的富集和洗脫效果，如Penazzi等使用ODS柱和硅膠柱洗脫，前者效率最差，后者效率最好[16]。

使用氨基柱富集膽固醇氧化物，使用丙酮洗脫，但洗脫液中會(huì)含有一定的雜質(zhì)，會(huì)影響氣-質(zhì)分析，故需要進(jìn)一步凈化[17]。Guardiola 等研究發(fā)現(xiàn)，洗脫溶劑會(huì)對(duì)回收率產(chǎn)生影響，使用正己烷-乙醚混合溶劑洗脫時(shí)，回收率最高[18]。Pizzoferrato 等對(duì)樣品先進(jìn)行皂化處理，再使用 TLC 法分離不可皂化物，以乙酸∶正己烷∶乙醚=1∶40∶60作為展開劑，分離出膽固醇氧化物[19]。

4 膽固醇氧化物的衍生

膽固醇氧化物具有高沸點(diǎn)、雙性基團(tuán)、化學(xué)不穩(wěn)定性，故氣相色譜分析前需進(jìn)行衍生反應(yīng)，改變其物理性狀，能夠有利于氣相色譜分析時(shí)分離度的改善和檢測(cè)靈敏度的提高。有研究證明，膽固醇氧化物進(jìn)行衍生化與非衍生化對(duì)比分析中發(fā)現(xiàn)，衍生化對(duì)色譜分析效果更好[20]。常用衍生試劑有BSTFA (N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酸胺)[21]；BTZ (N,O-雙三甲基硅烷乙酞胺∶三甲基氯硅烷∶N-三甲基硅烷咪哇，3∶2∶3)[22]；吡啶∶三甲基氯硅烷∶六甲基二硅氨烷(9∶3∶1)[23]；Sylon BFT(N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酞胺：三甲基氯硅烷，99∶1)[24]。吡啶都存在于這些衍生反應(yīng)中。室溫即可滿足反應(yīng)需要，有些研究報(bào)道也在80 ℃[25]或120 ℃[26]下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間大多數(shù)在0.5～1.0 h。

5 膽固醇氧化物的色譜分析

膽固醇氧化物的儀器測(cè)定方法有多種，包括氣相色譜法[27-28]、高效液相色譜法[29-30]、色-質(zhì)聯(lián)用法[31-32]、核磁共振[33]和酶法[34]等。常用的是氣相色譜法、高效液相色譜法和色-質(zhì)聯(lián)用法。

5.1 氣相色譜法氣相色譜法經(jīng)常被用于膽固醇氧化物的檢測(cè)，使用的色譜柱大多數(shù)為非極性、弱極性柱，如：DB-1，DB-5，CP-Si119CB等。一般多以持續(xù)升溫為主，但也有恒溫色譜分析，例如張明霞等采用恒溫色譜，幾種膽固醇氧化物得到了較好地分離[35]。

5.2 液相色譜法目前，和氣相色譜法相比，膽固醇氧化物的檢測(cè)方面使用液相色譜法還較為少見。液相色譜法在檢測(cè)膽固醇氧化物方面有幾個(gè)較為明顯的缺點(diǎn)：首先，液相色譜儀所使用的色譜柱的容量和分離效果達(dá)不到膽固醇氧化物所需的要求；其次，液相色譜儀的檢測(cè)器對(duì)于膽固醇氧化物的檢測(cè)就2種，紫外或者熒光檢測(cè)器，但是大多數(shù)的膽固醇氧化物均不能使用熒光或者紫外，因?yàn)樗鼈冊(cè)谶@些區(qū)域內(nèi)無吸收。當(dāng)然，使用液相色譜法檢測(cè)膽固醇氧化物也有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，不用擔(dān)心因?yàn)榧訜岬仍蚨鴮?dǎo)致膽固醇氧化物的分解，從而影響試驗(yàn)結(jié)果。

5.3 色-質(zhì)聯(lián)用法氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法統(tǒng)稱為色-質(zhì)聯(lián)用法，這2種方法可以為膽固醇氧化物的分析測(cè)定提供了較為準(zhǔn)確、可靠的手段，在平時(shí)使用中，以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法為主。

5.3.1氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在分析檢測(cè)方面已經(jīng)有30多年的歷史了，在檢測(cè)研究領(lǐng)域具備了豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。它兼顧了氣相色譜和質(zhì)譜的兩者各自的優(yōu)點(diǎn)，即氣相色譜具有較高的分離能力，質(zhì)譜具有較好的定性定量能力，在目前在世界化學(xué)分析領(lǐng)域中屬于較好的檢測(cè)方式之一。

色譜柱通常選用具有低流失的DB-5ms柱，進(jìn)樣口溫度與柱箱溫度的設(shè)置和氣相色譜法相近，以氦氣作為載氣，質(zhì)譜端采用標(biāo)準(zhǔn)電子轟擊離子源(70 eV )，電離溫度為200 ℃，離子掃描范圍在m/z50～650。表1為幾種常見膽固醇氧化物定性定量特征離子峰。

表1 7種膽固醇氧化物的定性定量離子

5.3.2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析膽固醇氧化物的研究報(bào)道較少，其主要原因有2個(gè)，其一是設(shè)備價(jià)格昂貴，普通實(shí)驗(yàn)室和研究機(jī)構(gòu)難以承擔(dān)；其二是液相色譜和質(zhì)譜之間串聯(lián)技術(shù)的限制。E.Razzazi-Fazeli等用該法對(duì)5，6α-epoxyeholesterol、5，6β-epoxyeholesterol、3β-eholestan，5α，6β-triol等7種氧化物使用液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行了檢測(cè)研究[36]，使用乙腈和甲醇作為流動(dòng)相，色譜柱選擇C18柱。

5.4 核磁共振使用核磁共振法在日常檢測(cè)研究領(lǐng)域較為少見，尤其是在測(cè)定膽固醇氧化物方面更加缺少，但是也有學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了研究，例如A.FONTANN等[33]，他們使用核磁共振技術(shù)對(duì)雞蛋粉和小甜餅中的膽固醇氧化物進(jìn)行了定性和定量研究，因不同的膽固醇氧化物具有完全不同的核磁共振譜的化學(xué)位移，然后根據(jù)這些化學(xué)位移來進(jìn)行定性定量分析研究。在核磁共振管中加入內(nèi)標(biāo)物(苯甲酸甲酯)，使用氘代氯仿溶解膽固醇氧化物。

5.5 酶法從1973年開始，已經(jīng)有學(xué)者使用酶法對(duì)膽固醇進(jìn)行研究，Richmand就用膽固醇氧化酶法對(duì)血清中的膽固醇進(jìn)行定量研究，這種方法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)常用方法之一[37]。VeraR等在Richmand的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)膽固醇氧化物在與氧化酶反應(yīng)后，用特定波長的光束進(jìn)行測(cè)定，其吸光度與膽固醇氧化物濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[38]，該法對(duì)于某些膽固醇氧化物是一種便捷的定量分析法。

6 結(jié)論

目前我國對(duì)食品中膽固醇氧化物研究較少，并且還未對(duì)膽固醇氧化物分析方法建立統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，所以非常有必要建立快速、準(zhǔn)確、高效分析食品中膽固醇氧化物的檢測(cè)方法。

[1] 竺尚武.肉食品中的膽固醇氧化物[J].食品與機(jī)械，2004，20(4)：19-21.

[2] OTAEGUI-ARRAZOLA M,MENENDEZ-CARRENO D,ANSORENA I,et al.Oxysterols:A world to explore[J].Food and Chemical Toxicology,2010,48:3289-3303.

[3] ANNE V,GéRARD L.Cytotoxic effects of oxysterols associated with human diseases:Induction of cell death(apoptosis and/or oncosis),oxidative and inflammatory activities,and phospholipidosis[J].Molecular Aspects of Medicine,2009，30：153-170.

[4] BEATA K,JOAN EL,ROBERT CM,et al.Apoptosis induced by ozone and oxysterols in human alveolar epithelial cells[J].Free Radical Biology &Medicine,2010,48:1513-1524.

[5] JIANLIN Y,XAVIER C,CRAIG M,et al.Apoptosis of vascular smooth muscle cells induced by cholesterol and its oxides in vitro and in vivo[J].Atherosclerosis,2000,148:365-374.

[6] 胡冰，金大勛，范文溝.氧化膽固醇對(duì)動(dòng)脈毒性作用的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報(bào)，1988，10(2)：105-109.

[7] 周建科，陸敏，李敬霞.食品中膽固醇氧化物研究進(jìn)展[J].河北大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24(5)：550-555.

[8] SMITH L L.Cholesterol Autooxidation[C].New York,USA:Plenum Press,1981:125.

[9] WANG,CHEN H.Kinetic model of eholesterol autoxidation in the Presenee of linoeic acid during heating[J].Shi Pin Ke Xue,1985,25(l):82-93.

[10] JORDI FOLCH,LEES M,SLOANE STANLEY G H.A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissue[J].Journal of Biological Chemistry,1956,226:497-509.

[11] HARA A,RADIN N S.lipid extraction of tissues with a low-toxicity solvent[J].Analytical Biochemistry,1978,90:420-426.

[12] MAERKER G,UNRUH J,CHOLESTEROL OXIDES.1.Isolation and Determination of Some Cholesterol Oxidation Products[J].J Am Oil Chem Soc,1986,63:767-773.

[13] SCHMARR H G,GROSS H B.Analysis of polar cholesterol oxidation products:evaluation of a new method involving transesterification,solid phase extraction,and gas chromatography[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1996,44(2):512-517.

[14] JOHNSSON L,DUTTA P C.Determination of phytosterol oxides in some food products by using an optimized transesterification method[J].Food Chemistry,2006,97:606-613.

[15] LAI S M,J L G,ZABIK M E.Evaluation of solid phase extraction and gas chromatography for determination of cholesterol oxidation products in spray-dried whole egg[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1995,43(5):1122-1126.

[16] PENZZI G,CABONI M F,ZUNIN P,et al.Routine high-performance liquid chromatographic determination of free 7-ketocholesterol in some foods by two different analytical methods[J].Journal of the American Oil Chemists’ Society,1995,72(12):1523-1527.

[17] JOHNSON C B.Isolation of cholesterol oxidation products from animal fat using aminopropyl solid-phase extraction[J].Journal of Chromatography A,1996,736(1):205-210.

[18] GUARDIOLA F,RAFECAS M,BOATELLA J,et al.Comparison of three methods for the determination of oxysterols in spray-dried egg[J].Journal of Chromatography A,1995,705(2):289-304.

[19] PIZZOFERRATO L,NICOLI S,LINTAS C.GC-MS characterization and quantification of sterols and cholesterol oxidation products[J].Chromatographia,1993,35:269-274.

[20] 陳貴凰，楊勝欽，蘇正德.市售肌肉及其制品中膽固醇氧化物含量調(diào)查[J].食品科學(xué)，1993，20(3)：277-290.

[21] LAKE R J,SCHOLES P.Consumption of cholesterol oxides from fast foods fried in beef fat in New Zealand[J].JAOCS,1997,74(9):1069.

[22] PARK P W,GUARDIOLA F,PARK S H,et al Kinetic Evaluation of 3β-Hydroxycholest-5-en-7-one(7-ketocholesterol) Stability During Saponification[J].JQACS,1996,73(5):623-629.

[23] 盧義發(fā)，湯政宜.市售蛋制品及頭足類產(chǎn)品之膽固醇氧化物含量調(diào)查研究[J].食品科學(xué)(臺(tái)灣)，1993，20(2)：168-177.

[24] LI S X,CHERIAN C,AHN D U,et al.Storage,heating,and tocopherols affect T.Hardin,and jeong cholesterol oxide formation in food oils[J].Agric Food Chem,1996,44:3830.

[25] LI S X,CHERIAN G,SIM J S. Cholesterol oxidation in egg yolk powder during storage and heating as affected by dietary oil and tocopherol[J].Journal of Food Science,1996,61(4):721-725.

[26] S MC.GLUSKEY,CONNOLLY J F,DEVERY R,et al.Lipid and cholesterol oxidation in whole milk powder during processing and storage[J].Journal of Food Science,1997,62(2):331-337.

[27] 李楠.水產(chǎn)加工制品中膽固醇氧化物的分布與由來[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2002，28(6)：27-31.

[28] ANTONIJ ANGULO J,ROMERA JUAN M,RAMIREZ MARIA,et al.Determination of cholesterol oxides in dairy products.effect of storage condition[J].J Agric Food Chem,1997,45:4318-4323.

[29] ZANARDI E,NOVELLI E,GHIRETTI G P,et al.Oxidation stability of lipids and cholesterol in salame Milano,coppa and Parma ham:dietary supplementation with vitamin E and oleic acid[J].Meat Science,2000,55:169-175.

[30] LUF J,HISBERGER W.Oxidation of cholesterol in butter during storage-effects of light and temperature[J].Eur Food Res Technol,2000,211:161-164.

[31] NAM K C,DU M,JO C,et al.Cholesterol oxidation products in irradiated raw meat with different packaging and storage time[J].Meat Science,2001,58:431-435.

[32] BOSELLI EMANUELE,VELAZCO V,CABONI M F,et al.Pressurized liquid extraction of lipids for the determination oxysterols in egg-containing food[J].Journal of Chromatography A,2001,917:239-244.

[33] FONTANA A.1H-NMR Study of Cholesterol autooxidation in egg powder and cookie exposed to adverse storage[J].Journal of Food Science,1993,58(6):1286-1289.

[34] LEBOVICS VERA K,ANTAL MAGDOLNA,GAAL ODON,et al.Enzymatic determination of cholesterol oxides[J].Sci Food Agric,1996,71:22-26.

[35] 張明霞，周建科，梁俊紅.膽固醇受熱氧化產(chǎn)物研究[J].食品科學(xué)，2002，23(5)：99-102.

[36] RAZZAZI-FAZELI E,KLEINEISEN S,LUF W.Determination of cholesterol oxides in proeessed food using high performance liquid chromatography-mass speetrometry with atmospheric pressure chemiealionization[J].Journal of Chromatography A,2000,896:321-334.

[37] RICHMOND W.Preparation and properties of a cholesterol oxidase from Nocardia sp. and its application to the enzymatic assay of total cholesterol in serum[J].Clin Chem,1973,19:1350-1356.

[38] LEBOVICS V K,ANTAL M,GAAL O.Enzymatic determination of cholesterol oxides[J].Sci Food Agric,1996,71:22-26.

Research Progress of Analysis Methods on Cholesterol Oxidation Products

FANG Yi1,2,3, ZHAO Kai4, ZHOU Yong1, ZHAO Qiao-ling1*

(1. Zhejiang Ocean Food Quality Inspection Center, Zhoushan, Zhejiang 316000; 2. Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang, Zhoushan, Zhejiang 316000; 3. Key Lab of Sustainable Utilization of Technology Research for Fishery Resource of Zhejiang, Zhoushan, Zhejiang 316000; 4. Hangzhou Institute of Calibration and Testing for Quality and Technical Supervision, Zhoushan, Zhejiang 316000)

The types of cholesterol oxidation products were introduced, the detection methods of cholesterol oxidation products at home and abroad were reviewed, including the extraction of oil, purification and enrichment of cholesterol oxidation products, the qualitative and quantitative of the method of instrumental analysis.

Cholesterol oxidation products; Detection of cholesterol oxidation products; Chromatographic analysis

浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013C37077)；質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201210060)。

方益(1986- )，男，浙江舟山人，助理工程師，碩士，從事色譜分析研究。*通訊作者，工程師，碩士，從事色譜分析研究。

2014-11-28

S 188

A

0517-6611(2015)02-277-03