雞肌肉瘤病理形態(tài)學觀察

劉曉丹周小林劉 洋

（1.南充市動物疫病預防控制中心，四川南充 637000；2.南充市農牧業(yè)局，四川南充 637000）

雞肌肉瘤病理形態(tài)學觀察

劉曉丹1周小林1劉 洋2

（1.南充市動物疫病預防控制中心，四川南充 637000；2.南充市農牧業(yè)局，四川南充 637000）

禽腫瘤性疾病作為世界范圍發(fā)生的疾病，嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。其中，危害最嚴重的主要包括馬立克氏?。∕arek′s disease，MD）、禽白血?。ˋvian leukaemia，AL）和網狀內皮組織增生癥（Reticuloendotheliosis，RE）三種。禽群中腫瘤的發(fā)生率和重要性只能進行大概估計，腫瘤的發(fā)生率各異，從3%到19%不等。肌肉瘤是以肌肉組織形成腫瘤實質的成熟型腫瘤。其中，由平滑肌組織構成的肌肉瘤稱為平滑肌瘤；由橫紋肌發(fā)生的肌肉瘤稱為橫紋肌瘤。平滑肌瘤屬于膨脹性生長，且生長緩慢的一種成熟型腫瘤；橫紋肌瘤是由未成熟的橫紋肌構成的惡性腫瘤。本病例經實驗室病理學診斷為平滑肌瘤，是于2014年5月發(fā)生于南充一蛋雞場，其發(fā)病率為40%，死亡率高達60%，對生產上造成了嚴重的經濟損失，對當地養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴重的影響，且本病易誤診為馬立克。

1 材料和方法

1.1 材料及用具

南充某養(yǎng)殖場100日齡病雞；酒精，純凈水，甲醛，二甲苯，石蠟，蛋白膠，蘇木紫，1%鹽酸酒精；切片刀，熔蠟箱，真空泵。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗材料的獲取

首先對發(fā)病雞進行詳細的臨床癥狀觀察，然后選擇病變明顯，有典型腫瘤性病變的病雞作為取材對象，對其進行系統(tǒng)剖解，觀察其大體病變情況。接著選取病雞的腎、胃、肝、脾、肌肉、肺、卵巢等主要病變部位作為制作組織切片的材料。

1.2.2 實驗材料的固定

打開病雞的腹腔取出其內臟器官肝、脾、肺、腎、卵巢、肌肉、肌肉和卵巢上的腫塊等，粗略選取大小約為2cm×2cm×1cm的病理組織材料用刀片切下來，立即投入盛有固定液體的標本瓶中，貼上標簽，注明固定日期、固定液名稱。固定4～12 h。

1.2.3 制作切片

固定后的材料，先用流水緩慢沖洗1～2 h，采用逐漸提高酒精濃度來減少材料中水分的含量的辦法，這樣可避免組織過度的收縮。只需最后再脫去酒精，則可直接使用病料。本次試驗所采用的濃度和作用時間依次是：75%（6～12 h），85%（6～12 h），95%（過夜），100%Ⅰ（1～2 h），100%Ⅱ（1～2）之后吸干酒精。然后將組織置于透明劑（為二甲苯，需二次更換）中，二甲苯Ⅰ（1～2），二甲苯Ⅱ（1～2）小時，使組織變得透明。在恒溫箱中溫度保持高于石蠟熔點1℃左右（一般為62℃）。甲苯石蠟（甲苯：石蠟為1∶1）30 min→第一純石蠟1 h→第二純石蠟1 h。最后，進行包埋時應切面向下，且多塊組織間每塊間距為1 cm左右。將切好的蠟片貼附至玻片后，入烘箱烤12 h左右，溫度以低于包埋蠟熔點為佳。

1.2.4 切片的染色

采用蘇木紫染色得到的結果為胞核藍色，胞漿淺紅色；結締組織鮮紅色，肌纖維深紅色。最后進行切片的固定：滴一滴樹膠在組織上，加蓋蓋玻片。

1.2.5 切片觀察

將制作好的病雞各病理組織切片置于光學顯微鏡下進行細致的觀察，并與正常禽類組織切片進行比較，了解并掌握雞腫瘤性疾病鏡下的主要典型病理變化。

2 實驗結果

2.1 病雞的解剖眼觀病變

腿部肌肉、胸部肌肉等全身多處肌肉均見到塊狀、結節(jié)狀和少量境界不明顯的腫塊，切面呈魚肉狀，灰白色和灰紅色。卵巢外也有大小不一的腫塊，質地變實。其他組織器官無明顯異常。

2.2 切片觀察結果

2.2.1 肝

肝細胞胞體較大，界限清楚，肝小葉間結締組織較少，肝小葉分界不明顯，中央靜脈、小葉間膽管、小葉間靜脈、小葉間動脈、清晰可見。有的炎癥細胞浸潤。

2.2.2 腎

切片觀察到大量紅細胞存在于皮質和髓質中，皮質和髓質血管擴張、出血、瘀血。腎小管上皮腫脹，部分出現(xiàn)空泡變性。腎小球腫大、瘀血，間質靜脈擴張。另有細胞浸潤。

2.2.3 卵巢

大量腫瘤細胞存在于組織中，散布性的細胞浸潤現(xiàn)象出現(xiàn)，正常組織被大量腫瘤細胞替代。

2.2.4 肺

組織出血嚴重，毛細血管壁增厚，靜脈瘀血，腫瘤細胞浸潤。

2.2.5 肌肉

全身多處肌肉切片觀察，均可見大量不同于正常肌細胞的細胞浸潤。肌纖維中的橫紋不均勻，有的甚至沒有。瘤細胞則應以梭形細胞為主，呈明顯的多形性，伴有多角形和圓形或者帶狀瘤細胞。瘤細胞胞漿內，有縱行肌原纖維。橫紋只見于纖維和細胞的邊緣于尖端。中央部由均質的肌漿構成，也見少量縱紋。胞核大小不一。詳見圖1和圖2。

圖1 部分肌肉組織被腫瘤細胞替代（×400）（some muscle tissue replaced by tumor cells）

圖2 病變灶區(qū)（×400）

2.2.6 腫瘤

分為實質和間質兩部分。實質差異為大量腫瘤細胞，其特點是胞核和胞體的比例和正常組織有顯著的差異。胞核于胞漿相比，核和核仁較大，核染色質豐富，且在高倍鏡下能看到較多的核分裂現(xiàn)象。間質由結締組織和血管構成，血管數量較多，結締組織較少，腫瘤細胞貼近血管，實質于間質分界不是很明顯。詳見圖3和圖4。

圖3 肌組織完全被腫瘤細胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

圖4 肌組織完全被腫瘤細胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

2.2.7 脾

被膜、小梁、白髓、紅髓等結構均清晰可見。脾小結的數量略有增加，有少量的細胞浸潤。

3 討論和結論

3.1 討論

3.1.1 肌瘤與纖維瘤的區(qū)別

肌細胞邊界清楚，胞漿豐富、色深粉紅，有肌原纖維；胞核兩端較鈍，常有柵欄狀排列。在Van Gieson染色下，纖維呈紅色，肌肉呈黃色。纖維肉瘤無完整包膜，質地比較柔軟，色澤淡紅，富有光澤。已分化的纖維肉瘤瘤細胞胞漿很少，胞核呈棗核狀，核染色質為粗顆粒狀，分布不均勻，核仁大小不一，核膜清晰，膠原纖維多。

3.1.2 肌瘤與馬立克的區(qū)別

馬立克病是由皰疹病毒引起的一種傳染性的淋巴組織增生疾病。患馬立克的病雞其外周神經由大量的增生的成淋巴細胞組成或炎癥反應，特別以小淋巴細胞和漿細胞的彌散，以及輕微至中度的細胞浸潤為顯著特征，通常還伴有部分水腫。病雞另外一個最常見的變化眼部的虹膜單核細胞浸潤，在眼肌，特別是外直肌和睫狀肌中也常見浸潤，前房常伴有顆?；驘o定型物的存在。

而內臟器官的淋巴瘤性病變性質則表現(xiàn)很一致，都是增生性的。細胞成分很像神經的增生性病變，由彌散性小到中等增生的淋巴細胞、成淋巴細胞和活化了的及原始的網狀細胞所組成，很少見漿細胞。

3.1.3 腫瘤和炎癥、增生性病變的區(qū)別

腫瘤和周圍組織有分界、無過渡、無組織上的連接，而增生、慢性炎癥的增生則常和周圍組織無界限、有過渡、有組織上的連接。腫瘤的細胞種類、形態(tài)、排列、生長方式等，有它們的相對一致性，而炎癥、增生，細胞類型較多，主要為各種炎細胞、成纖維細胞、纖維細胞和脈管內皮細胞。炎癥、增生常不持續(xù)增長，可自然消退，腫瘤呈持續(xù)性增長，一般不會自然消退。

3.1.4 肌瘤與禽白血病的區(qū)別

禽白血病是指由反轉錄病毒科中的禽反轉錄病毒屬的成員引起的雞的各種可傳播的良性和惡性腫瘤。其特征是瘤細胞體積較大，細胞核大，核中央呈空泡狀，胞質中含有大量的核糖核酸。肝、脾、骨髓等組織中有大量的成紅細胞堆積。成紅細胞的主要形態(tài)特征為胞體較大，細胞形態(tài)不規(guī)則，表面有突起。

3.2 結論

根據對病雞的病史調查、剖解觀察、切片觀察后診斷結論為肌肉瘤。

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