荷葉水提取物的降血脂作用實(shí)驗(yàn)探討*

★　郭慧玲第一作者：郭慧玲，教授。研究方向：中藥制劑新技術(shù)與新劑型。E-mail：ghl66@6.com。　江蕾　胡志方通信作者：胡志方，教授。研究方向：中藥制劑新劑型與新技術(shù)。E-mail：hzf99@6.com。　趙曉娟　胡律江　郭三?！?.江西中醫(yī)藥大學(xué)　南昌330004；.江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)?！〗?撫州 344000)

荷葉水提取物的降血脂作用實(shí)驗(yàn)探討*

★郭慧玲1*第一作者：郭慧玲，教授。研究方向：中藥制劑新技術(shù)與新劑型。E-mail：ghl6262@126.com。江蕾1胡志方2*通信作者：胡志方，教授。研究方向：中藥制劑新劑型與新技術(shù)。E-mail：hzf9912@126.com。趙曉娟1胡律江1郭三保1(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌330004；2.江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校江西 撫州 344000)

摘要：目的：研究荷葉水提物對(duì)高脂血癥小鼠的降血脂作用。方法：將昆明小鼠隨機(jī)分成六組，即空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組(5g/kg)、中劑量組(10g/kg)、高劑量組(20g/kg)，除空白組外，其他組均造成高脂血癥模型，并且給予相應(yīng)的藥物，分別測(cè)定各組小鼠的TC、TG和HDL-C含量。結(jié)果：荷葉水提物能顯著降低TC、TG水平，同時(shí)增高HDL-C水平。結(jié)論：荷葉水提物具有顯著的降血脂作用。

關(guān)鍵詞：荷葉；水提物；高血脂癥；降血脂作用

荷葉(Lotus leaf)，為睡蓮科植物蓮的葉，屬藥、食兩用植物，由于具有良好的減肥功效引起大眾關(guān)注。荷葉于1991年被列入第二批“既是食品又是藥品”的名單，有清暑化濕、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血的功效[1]，主要分布于中國(guó)、日本、印度等亞熱帶和溫帶地區(qū)。荷葉具有調(diào)節(jié)血脂、抑菌、抗氧化、止血、抑制脂肪酶等作用[2]。高血脂主要包括高膽固醇血癥、高甘油酯血癥以及復(fù)合性高脂血癥。隨著現(xiàn)代生活飲食方式的改變，國(guó)人血脂異常率急劇增高，目前高血脂患者極為普遍，是造成動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的主要原因之一[3]。因此，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝對(duì)防治心腦血管疾病發(fā)生有著極其重要的作用[4]，如何防治高脂血癥一直是研究熱點(diǎn)。由于臨床常用的西藥類(lèi)降血脂藥物毒副作用較大，從天然藥物中尋找降血脂有效成分的研究日益受到重視，中藥治療高血脂癥有獨(dú)特效果，作用雖緩慢但毒副作用小。本文主要通過(guò)高脂乳劑飼養(yǎng)小鼠，復(fù)制高血脂模型，探討荷葉水提物的降血脂作用。

1材料與器材

1.1實(shí)驗(yàn)材料荷葉購(gòu)自江西省南昌市樂(lè)康中藥房(生產(chǎn)批號(hào)：131201，產(chǎn)地湖南)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院左月明副教授鑒定為睡蓮科植物蓮的葉(Lotus leaf)。豬膽鹽(索萊寶科技有限公司，批號(hào)：604C051，規(guī)格：25g)；丙硫氧嘧啶片(上海朝暉藥業(yè)有限公司，規(guī)格：50mg×100片，批號(hào)：1309F18)，膽固醇(索萊寶科技有限公司，批號(hào)：121B106，規(guī)格：100g)，蔗糖(西隴化工股份有限公司，批號(hào)：1403011，規(guī)格：500g)，豬油自制，辛伐他汀片(魯南貝特制藥有限公司，規(guī)格：5mg×24片，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20030705)，水為蒸餾水，甘油三酯(TG)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：146561)，高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：130521)，總膽固醇(TC)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：141661)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18～22g，雄性，購(gòu)自江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)SCXK(贛)2011-0001。

1.3儀器和設(shè)備BT25S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)，96孔酶標(biāo)板(美國(guó)Costar公司)，Bio Tek ELx800型酶標(biāo)儀(基因有限公司)，GZX-9076 MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng))，RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生長(zhǎng)儀器廠(chǎng))，SHZ-D(III)型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，KQ5200DA型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，SIGMA 3-18K型高速離心機(jī)(德國(guó)SIGMA公司)，HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)，AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1灌胃液樣品的制備

2.1.1藥品的配制低劑量藥品的配制：稱(chēng)取荷葉25g，按料液比1∶30，提取溫度為100℃，蒸餾水連續(xù)回流兩次，每次2h，合并藥液，濃縮定容至100mL，配制成0.25g/mL的藥液，備用；中劑量藥品的配制：稱(chēng)取荷葉50g，同上法得到0.5g/mL中劑量藥液，備用；高劑量藥品的配制：稱(chēng)取荷葉100g，同上法得到1.0g/mL高劑量藥液，備用。

2.1.2陽(yáng)性組對(duì)照藥品的配制取辛伐他汀片50mg，碾碎后用蒸餾水溶解，定容至100mL，配制成0.5mg/mL，備用。

2.1.3脂肪乳劑的配制[5-6]稱(chēng)取20g豬油于37℃水浴鍋融化后置于研缽中，依次加入10g膽固醇，10g蔗糖，1g丙硫氧嘧啶與研缽中，充分研勻，再加入吐溫-80 1mL，丙二醇2mL，研磨均勻后，加入膽鹽20mL研磨至乳化，加蒸餾水稀釋定容至100mL，冷卻，置于4℃冰箱冷藏，備用。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組及給藥方法[7]將實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，隨機(jī)分成六組：空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、荷葉低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組12只，上午除空白組給予灌胃(ig)蒸餾水，其它各組小鼠均ig高脂乳劑，下午除空白組和模型組外，其它各組ig相應(yīng)的藥品，給藥劑量見(jiàn)表1。造模兩周后，各組小鼠禁食不禁水12h，末次給藥2h后，摘眼球取血，靜置2h，離心10min(4 000r/min)，取其血清按照試劑盒說(shuō)明，采用酶標(biāo)儀分別測(cè)定小鼠血清中TC、TG、HDL-C的水平。

表1　動(dòng)物分組及給藥劑量

注：表中荷葉給藥劑量均為折合的生藥材量。

±s，n=12)

注：模型組與空白組比較，△P<0.05，△△P<0.01；給藥組與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3測(cè)定方法

2.3.1甘油三酯采用酶比色法(GPO-PAP法)，將工作液與樣品以100∶1的比例混合， 37℃保溫10分鐘，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)計(jì)算公式： CTG=ATG/A校準(zhǔn)品×C校準(zhǔn)品，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CTG為甘油三酯濃度單位為mmol/L，C校準(zhǔn)品濃度為2.26mmol/L，ATG為甘油三酯吸光度，A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

2.3.2總膽固醇采用酶比色法(COD-PAP法)，將工作液與樣品以100∶1的比例混合， 37℃保溫6分鐘，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定TC值，根據(jù)公式：CTC=ATC/A校準(zhǔn)品×C校準(zhǔn)品，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CTC為總膽固醇濃度單位mmol/L，C校準(zhǔn)品濃度為5.19mmol/L，ATC為總膽固醇吸光度，A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

2.3.3高密度脂蛋白采用磷鎢酸-鎂沉淀法，將工作液與樣本上清液以40∶1的比例混合， 37℃保溫6分鐘，用酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定HDL-C值，根據(jù)公式：CHDL-C=AHDL-C/A校準(zhǔn)×C校準(zhǔn)×2，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CHDL-C為高密度脂蛋白濃度單位mmol/L，C校準(zhǔn)品濃度為3.74mmol/L，AHDL-C為高密度脂蛋白吸光度，A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

3結(jié)果

由表2可知，造模兩周后，模型組小鼠血脂TC、TG水平明顯高于空白組，而HDL-C水平模型組低于空白組，均有顯著性差異(P<0.05)，表明造模成功，提示高脂乳劑灌胃法為較理想的造模方法。不同劑量給藥組、對(duì)照組與模型組對(duì)比小鼠血脂TC、TG及HDL-C水平，結(jié)果表明均能顯著降低TC、TG水平，升高HDL-C水平，實(shí)驗(yàn)表明各給藥組均有顯著的調(diào)節(jié)血脂作用。

4討論

目前，造成小鼠高脂血癥的常用方法有兩種，即喂食高脂飼料和灌胃高脂乳劑，這兩種造模方式均通過(guò)消化道吸收而形成，這與人類(lèi)的飲食模式形成高脂血癥相似。但喂食高脂飼料會(huì)使小鼠產(chǎn)生油膩感，易出現(xiàn)厭食，不易于掌握準(zhǔn)確的小鼠攝入量，因此本實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[7]采用灌胃高脂乳劑法復(fù)制小鼠高脂血模型。由于甲狀腺素具有降血脂功能，為避免其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，在普通高脂乳劑(豬油，膽固醇，吐溫，丙二醇)的基礎(chǔ)上加入一定量的丙硫氧嘧啶，以抑制體內(nèi)甲狀腺素的分泌，并加入一定量的蔗糖使小鼠更容易形成高脂血癥模型[6]。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明荷葉水提物具有一定的降血脂功效，可為荷葉新劑型的開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

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The Study on Antihyperlipidemia of Aqueous Extract of Lotus Leaf

GUO Hui-ling1，JIANG Lei1， HU Zhi-fang2，ZHAO Xiao-juan1， HU Lv-jiang1，Guo San-bao1

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004，China;

2.JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine，F(xiàn)uzhou344000，China.

Abstract:Objective:To study the antihyperlipidenmia effect of aqueous extract of lotus leaf on mice's lipids with hyperlipidemia. Methods: Kunming mice were randomly divided into six groups, including blank group, model group, positive control group, low does group (5g/kg aqueous extract of lotus leaf), middle does group (10g/kg), high does group (20g/kg), in addition to blank group, the other groups were established to became hyperlipidemia mice, and gave appropriate medicine, then determine the content of TC, TG, HDL-C. Results: Aqueous extract of lotus leaf could significantly decrease TC and TG levels, at the same time it could also rise the HDL-C level. Conclusion: Aqueous extract of lotus leaf show notable reducing blood lipid of mice.

Key words:Lotus Leaf; Aqueous Extract; Hyperlipidemia; Reducing Blood Lipid

收稿日期：(2014-09-16)編輯：薛鐵瑛

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

基金項(xiàng)目：*江西省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(GJJ13599)。