硅酮凝膠噴霧劑對小型豬瘢痕模型膠原表達的影響*

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硅酮凝膠噴霧劑對小型豬瘢痕模型膠原表達的影響*

**通訊作者， E-mail：labnong@hotmail.com

高彥晨，農(nóng)曉琳**，李戰(zhàn)

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院頜面外科，廣西 南寧 530021)

摘要：目的 研究硅酮凝膠對小型豬豬背瘢痕模型中膠原的影響，探討醫(yī)用硅酮凝膠的作用機制。方法構(gòu)建小型豬豬背增生性瘢痕模型， 在術(shù)后28d外用醫(yī)用硅酮凝膠噴霧劑，術(shù)后56d處死動物，切取豬背瘢痕及正常皮膚，采用免疫組化的方法觀察瘢痕中Ⅰ型膠原的變化情況。結(jié)果醫(yī)用硅酮凝膠組較空白對照組瘢痕增生明顯減輕，醫(yī)用硅酮凝膠可以抑制瘢痕中Ⅰ型膠原的形成。結(jié)論醫(yī)用硅酮凝膠可以顯著抑制Ⅰ型膠原的形成，從而改變細胞外基質(zhì)的構(gòu)成，緩解瘢痕增生情況。

關(guān)鍵詞：瘢痕；醫(yī)用硅酮凝膠；Ⅰ型膠原蛋白

皮膚病理性瘢痕是創(chuàng)傷愈合過程中形成的一種皮膚纖維組織增生性疾病，而增生性瘢痕是皮膚病理性瘢痕中的一種，其主要特點是成纖維細胞異常增殖和細胞外基質(zhì)的過度沉積[1,2]。目前防治增生性瘢痕的方法有很多，如藥物治療、細胞因子治療、放射治療和手術(shù)治療等，但任何一種治療病理性瘢痕的方法都不能達到良好的療效。我們采用建立小型豬增生性瘢痕模型，探討硅酮凝膠噴霧劑對增生性瘢痕作用機制及膠原表達的影響，為醫(yī)用硅酮凝膠的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗對象雌性健康的小型豬2只(廣西大學(xué)動物科學(xué)院提供)，4月齡，體質(zhì)量為(12±0.3)kg。動物飼養(yǎng)于干燥、通風(fēng)、安靜的環(huán)境中，單只分籠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d。

1.2實驗試劑醫(yī)用硅酮凝膠噴霧劑(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號：YZB/滬1761-64-2012)，Collagen Ⅰ鼠抗兔單克隆一抗(購買于武漢博士德公司)，通用型山羊抗鼠二抗、免疫組化試劑盒及DAB試劑盒(均購買于北京中杉金橋公司)，復(fù)合消化酶(購買于武漢博士德公司)。

1.3動物分組處理參照相關(guān)文獻[3,4]于小型豬背部建立豬背增生性瘢痕模型，豬背兩側(cè)分別建立瘢痕創(chuàng)面6塊，損傷面積大約為3cm×3cm，每組12個瘢痕模型，傷口止血后暴露，不做其他處理。術(shù)后分圈飼養(yǎng)，待其自然表皮化而瘢痕愈合。術(shù)后第28d隨機將動物分為兩組：空白對照組(不做任何處理)和醫(yī)用硅酮凝膠組(噴涂于小型豬豬背，2次/d，噴涂于瘢痕表面)。用藥期間實驗動物未見異?，F(xiàn)象。

1.4實驗動物標(biāo)本制備小豬連續(xù)用藥28d后，靜脈空氣栓塞處死動物，切取小型豬瘢痕標(biāo)本和正常小型豬豬背皮膚，4%多聚甲醛中固定24～72h后，石蠟包埋。

1.5SP法免疫組織化學(xué)染色將已包埋好的標(biāo)本，以5μm的厚度連續(xù)切片。常規(guī)石蠟切片脫蠟復(fù)水，3%過氧化氫孵育5~10min，蒸餾水沖洗，PBS浸泡2次，每次2min，進行間接法抗原熱修復(fù)，10%正常山羊血清封閉10min后，加入一抗(抗體濃度1∶100，陰性對照組以PBS代替一抗)，4℃過夜，PBS漂洗，每次2min，加入生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育 10~15min，PBS漂洗，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記，37℃溫箱孵育10~15min，PBS漂洗2次，每次2min，DAB溶液顯色，沖洗，再行蘇木精復(fù)染，1%鹽酸乙醇溶液分化10s，脫水，透明，中性樹膠常規(guī)封片觀察結(jié)果。

1.6圖像分析將所拍攝的免疫組化圖片依次輸入IPP圖像分析系統(tǒng)進行分析。隨機選取每個樣本中的10個視野，檢測每一個視野中的I型膠原蛋白的平均光密度。

2結(jié)果

2.1兩組瘢痕厚度比較空白對照組瘢痕較正常皮膚明顯高起，色紅，質(zhì)地硬；醫(yī)用硅酮凝膠組瘢痕變平滑，質(zhì)地變軟，顏色與周圍皮膚相近。

2.2Ⅰ型膠原蛋白表達皮膚組織中Ⅰ型膠原主要存在于真皮層的細胞間質(zhì)中。光鏡下可見膠原蛋白染色后在真皮層中呈棕黃色，呈陽性表達?？瞻讓φ战M與正常皮膚相比，Ⅰ型膠原蛋白增加明顯；醫(yī)用硅酮凝膠組Ⅰ型膠原蛋白含量接近正常皮膚。而以PBS代替一抗的陰性組中Ⅰ型膠原蛋白未見有陽性表達，見圖1(封二)。醫(yī)用硅酮凝膠組Ⅰ型膠原蛋白平均光密度(0.1465±0.111)與空白對照組(0.5591±0.499)相比較，明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

皮膚瘢痕是在創(chuàng)傷或者手術(shù)等各種因素的作用下，組織損傷達到一定程度后修復(fù)的結(jié)果，病理性瘢痕主要有增生性瘢痕及瘢痕疙瘩(keloid)兩種表現(xiàn)形式，是臨床上常見的一種纖維增生性疾病。病理性瘢痕的形成過程復(fù)雜，其成因及發(fā)病機制目前仍不十分清楚，而目前的研究表明，病理性瘢痕是由皮膚成纖維細胞增殖及凋亡平衡失調(diào)導(dǎo)致細胞外基質(zhì)尤其是膠原纖維異常沉積所致，其中又以Ⅰ型膠原纖維為主[5,6]。

目前臨床上治療增生性瘢痕方法有很多包括手術(shù)治療、藥物治療和加壓治療等，但治療效果都不甚理想。硅酮凝膠噴霧劑是治療增生性瘢痕的藥物之一，臨床上用于體表愈合后的小創(chuàng)面保護，以及輔助用于增生性瘢痕的抑制，但其作用機制尚不完全清楚。本實驗通過構(gòu)建小型豬瘢痕模型，外涂醫(yī)用硅酮凝膠噴霧劑，結(jié)果證明硅酮凝膠對增生性瘢痕有抑制作用，并可抑制Ⅰ型膠原蛋白的沉積，從而達到抑制瘢痕的作用，從而為更好的利用硅酮凝膠抗瘢痕提供了一定的依據(jù)。

參考文獻：

[1]姚東剛,張選奮.Ⅳ、Ⅵ、Ⅻ、ⅩⅣ、ⅩⅥ型膠原與皮膚創(chuàng)傷修復(fù)及瘢痕增生的關(guān)系.中國美容醫(yī)學(xué)，2014，23(6):507

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Effect of Silicone Gel on the Expression of Collagen of

Scar Model in Miniature Swine

GAO Yan-chen，NONG Xiao-lin，LI Zhan

(DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery，CollegeofStomatology，GuangxiMedicalUniversity，

NanningGuangxi530021，China)

ABSTRACT：Objective To study of the influence of silicone gel on collagen of scar model on the back of small Pig and itsmechanism. Methods Medical silicone gel spray was used 28 days after construction of hypertrophic scar model on the back of small pig.56 days later,the animals were sacrificedand the changes of collagen Ⅰin scar and normal skin was observed with immunohistochemistry staining.Results Compared with the control group，medical silicone scar gel significantly reduced the formation of collagenⅠscar.Conclusion Medical silicone gel can significantly inhibit the formation of collagenⅠ，change the composition of the extracellular matrix，and alleviate scar hyperplasia.

KEY WORDS：Scar；Silicone gel；CollagenⅠ

(收稿日期：2015-08-30)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2015.06.0466

中圖分類號：R965.2

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：2095-4646(2015)06-0466-02

*基金項目：廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃課題(2014ED37035)