臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎2例分析

張榮環(huán),趙 菊,楊華強(qiáng)

(1. 湖北省十堰市婦幼保健院, 湖北 十堰 442000；2. 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北 十堰 442000)

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎2例分析

張榮環(huán)1,趙 菊1,楊華強(qiáng)2

(1. 湖北省十堰市婦幼保健院, 湖北 十堰 442000；2. 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北 十堰 442000)

目的 觀察臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效和安全性。方法 將細(xì)胞總數(shù)為(5～7)×107個(gè)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)靜脈輸注途徑移植到自愿接受干細(xì)胞移植的2例難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)，4次為1個(gè)療程，每次間隔1周。治療后隨訪1年定期觀察患者臨床癥狀及各項(xiàng)生化和免疫學(xué)指標(biāo)的變化并進(jìn)行綜合分析。結(jié)果 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療后1個(gè)月，2例患者的臨床癥狀均明顯改善，28個(gè)關(guān)節(jié)的疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS-28)由3.6分和4.0分別降低為2.2分和2.6分，血沉、C反應(yīng)蛋白水平和類風(fēng)濕因子抗體滴度也較治療前明顯降低。隨訪1年未觀察到與治療有關(guān)的不良反應(yīng)，且癥狀持續(xù)緩解無(wú)復(fù)發(fā)。結(jié)論 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輔助治療難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎可緩解臨床癥狀，且未觀察到與治療有關(guān)的不良反應(yīng)，安全性好。

干細(xì)胞移植；難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以多系統(tǒng)損害為特征的慢性系統(tǒng)性自身免疫病，傳統(tǒng)治療藥物主要包括抗炎藥、糖皮質(zhì)激素和抗風(fēng)濕藥。近年來(lái)發(fā)展的針對(duì)細(xì)胞因子靶向治療的生物治療方法具有抗炎和防止骨破壞的作用，但生物制劑的使用容易導(dǎo)致注射部位局部的皮疹、感染，并且長(zhǎng)期使用可使淋巴系統(tǒng)腫瘤的患病率增加，限制了其在臨床上的廣泛使用。有研究表明來(lái)源于臍帶結(jié)締組織中的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSC)不僅具有造血支持作用，而且還具有免疫調(diào)節(jié)作用，在免疫性疾病的臨床治療中顯示出良好的前景[1-3]。我院采用UC-MSC移植輔助治療2例難治性RA患者取得較好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1病例資料

1.1.1例1 男，60歲，雙腕、掌指、近端指、踝關(guān)節(jié)腫痛16個(gè)月，四肢腫脹、疼痛、行動(dòng)困難3個(gè)月入住十堰市人民醫(yī)院。體格檢查：生命體征穩(wěn)定，心肺聽診未聞及異常，腹軟，肝脾各肋緣下未及，雙手、雙足呈輕度彌漫性腫脹，雙腕及掌指關(guān)節(jié)、手指近端關(guān)節(jié)、雙踝關(guān)節(jié)輕微腫脹伴壓痛。實(shí)驗(yàn)室檢查：血白細(xì)胞6.9×109L-1，血紅蛋白106 g/L，血小板291×109L-1；大小便常規(guī)無(wú)異常；血沉(ESR)為68 mm/h，類風(fēng)濕因子(RF)57.8 IU/mL，抗鏈球菌溶血素O(ASO)陰性，C反應(yīng)蛋白(CRP)14.6 mg/L，抗核抗體、ds-DNA和ENA多肽譜陰性，腎功能、肌酶學(xué)檢查正常，血清補(bǔ)體C3和C4升高。雙手和雙足X射線檢查：見關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹，關(guān)節(jié)間隙狹窄，未見關(guān)節(jié)面軟骨破壞，其他項(xiàng)目正常，28個(gè)關(guān)節(jié)的疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS-28)為3.6分。臨床診斷為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。入院以后給予美洛昔康、潑尼松及來(lái)氟米特口服及支持對(duì)癥治療1個(gè)月后癥狀逐漸減輕，但在激素減量過(guò)程中上述癥狀又加重，在征得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)和患者知情同意的基礎(chǔ)上給予每周1次，共4次UC-MSC移植治療。移植后1個(gè)月，患者臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀也有明顯改善，DAS-28評(píng)分降為2.2分，ESR降為15 mm/h末，RF 17.8 IU/mL，CRP 5.6 mg/L。出院后隨訪1年，未觀察與治療相關(guān)的不良反應(yīng)，并且癥狀持續(xù)緩解無(wú)復(fù)發(fā)。

1.1.2例2 女，53歲，以不規(guī)則低熱伴雙手及雙踝關(guān)節(jié)疼痛20 d，不能行走，逐漸加重5 d，于2005年7月22日來(lái)十堰市人民醫(yī)院就診。既往有雙手和雙腳關(guān)節(jié)及全身骨關(guān)節(jié)疼痛病史3年。查體：T 37.3 ℃，行走困難，雙手腕關(guān)節(jié)、掌指、近端指間和雙側(cè)踝關(guān)節(jié)輕度腫脹，未見肌肉萎縮和關(guān)節(jié)畸形，心肺聽診未聞及異常，腹軟，肝脾各肋緣下未觸及。血常規(guī)：血紅蛋白100 g/L，白細(xì)胞8.9×109L-1，血小板391×109L-1；骨髓細(xì)胞學(xué)無(wú)明顯異常；RF 60.9 IU/mL，CRP 17.4 mg/L，ASO 202.3 mmol/L，ESR 80 mm/h，抗核抗體、ds-DNA和ENA多肽譜陰性，腎功能、肌酶學(xué)檢查正常，心電圖正常，DAS-28評(píng)分4.0分。雙手和雙足X射線檢查：關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹，關(guān)節(jié)間隙狹窄，未見關(guān)節(jié)面軟骨破壞。入院以后給予美洛昔康、潑尼松及甲氨蝶呤口服及支持對(duì)癥治療2個(gè)月后癥狀有所減輕，但在激素減量和甲氨蝶呤停用后上述癥狀復(fù)又加重，在征得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)和患者知情同意的基礎(chǔ)上給予UC-MSC移植治療，每周1次，共4次。移植后1個(gè)月患者臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，DAS-28評(píng)分降為2.6分，ESR降為20 mm/h，RF 27.4 IU/mL，CRP 7.6 mg/L。出院后隨訪1年，未觀察到與治療相關(guān)的不良反應(yīng)，并且患者癥狀持續(xù)緩解無(wú)復(fù)發(fā)。

1.2UC-MSC來(lái)源和移植途徑 取足月妊娠剖宮產(chǎn)健康胎兒的臍帶，采用組織塊貼壁培養(yǎng)法于含有5%CO2、37 ℃飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞達(dá)80%匯合后，以0.2%的胰酶/EDTA消化并按1∶3的比例傳代。收集第3代細(xì)胞，細(xì)胞總數(shù)為(5～7)×107個(gè)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型并確定為UC-MSC。移植前由患者簽署干細(xì)胞知情同意書。間充質(zhì)干細(xì)胞治療次數(shù)：4次為1個(gè)療程，每次間隔1周，治療途徑采用靜脈輸注，治療后24 h內(nèi)嚴(yán)密觀察患者生命體征的變化。

2 討 論

RA的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，非甾體抗炎藥、改變病情的抗風(fēng)濕藥及糖皮質(zhì)激素治療RA已為人們所熟知，但這些藥物均具有不同的缺點(diǎn)和局限性。生物治療具有抗炎和防止骨破壞的作用，但容易導(dǎo)致注射部位局部的皮疹、感染，并且長(zhǎng)期使用使淋巴系統(tǒng)腫瘤患病率增加，限制了其在臨床上的廣泛使用。近年來(lái)，基礎(chǔ)和臨床實(shí)驗(yàn)研究表明間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)具有免疫調(diào)節(jié)和再生修復(fù)的生物學(xué)特性，為RA的治療提供了嶄新的前景。

李慧等[5]研究報(bào)道UC-MSC能明顯抑制CIA大鼠的炎癥因子釋放和抑制內(nèi)皮細(xì)胞的異?；罨?，有利于緩解RA的免疫炎性關(guān)節(jié)癥狀。蘇毅等[6]采用純化的自體外周血造血干細(xì)胞移植可使患者造血功能得到較快重建，近期臨床癥狀改善。毛飛等[7]研究提示骨髓MSC下調(diào)了RA小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)TLR8及TLR9的水平，但TLR8與TLR9的表達(dá)無(wú)相關(guān)性。王黎明等[8]應(yīng)用靜脈輸注UC-MSC的方式治療RA結(jié)果提示所有患者飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀均明顯改善，全部患者滿足ACR20標(biāo)準(zhǔn)，且治療前后血液各項(xiàng)生化指標(biāo)無(wú)明顯變化。Liang等[9]報(bào)道4例類風(fēng)濕持續(xù)活動(dòng)的患者接受了MSC的治療，結(jié)果4例患者中有3例ESR、DAS-28評(píng)分和疼痛VAS積分在移植后1個(gè)月和6個(gè)月明顯降低，2例患者在移植后6個(gè)月達(dá)到了歐洲風(fēng)濕病防治聯(lián)合會(huì)的中等緩解標(biāo)準(zhǔn)，但分別在7個(gè)月和23個(gè)月后復(fù)發(fā)。4例患者未達(dá)到DAS-28緩解標(biāo)準(zhǔn)?；颊咧委熯^(guò)程中沒(méi)有觀察到與治療有關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)。

本研究中，2例難治性RA患者在常規(guī)治療療效欠佳的情況下接受UC-MSC治療后飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀明顯改善，2例患者的28個(gè)關(guān)節(jié)的疾病活動(dòng)度評(píng)分明顯降低；治療后1個(gè)月后，ESR、CRP和RF抗體滴度也較治療前有明顯下降。隨訪1年，未觀察到與治療有關(guān)的不良反應(yīng)，且癥狀持續(xù)緩解無(wú)復(fù)發(fā)。這表明采用UC-MSC輔助治療對(duì)難治性RA安全、有效，值得臨床推廣應(yīng)用。結(jié)合國(guó)內(nèi)外學(xué)者的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究結(jié)果[10-15]，筆者分析UC-MSC治療RA的可能機(jī)制為：①M(fèi)SC具有獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)作用，能調(diào)節(jié)多種先天性或獲得性免疫功能，進(jìn)而調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答；②MSC具有自我更新和多向分化潛能，在一定的條件下能生成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和成肌細(xì)胞等非造血成體細(xì)胞，可能參與受損組織的再生修復(fù)；③MSC具有趨化作用，可以阻止炎性遞質(zhì)的釋放，減輕炎癥反應(yīng)，減輕組織損傷，可阻止病情進(jìn)展。由于本研究樣本量太小且隨訪時(shí)間較短，UC-MSC輔助治療難治性RA的臨床療效及不良反應(yīng)還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步觀察。

[1] Xu J,Wang D,Liu D,et al. Allogeneic mesenchymal stem cell treatment alleviates experimental and clinical Sjogren syndrome[J]. Blood,2012,120(15):3142-3151

[2] Dazzi F,Krampera M. Mesenchymal stem cells and autoimmune diseases[J]. Best Pract Res Clin Haematol,2011,24(1):49-57

[3] Scherer HU,Van-Pel M,Toes RE,et al. Mesenchymal stem cells in autoimmune diseases:hype or hope?[J]. Arthritis Res Ther, 2010, 12(3):126

[4] 張效北,李江濤,趙和泰,等. 間充質(zhì)干細(xì)胞治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者臨床分析[J]. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2011,49(34):139-140

[5] 李慧,顧健,林傳明,等. 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)CIA大鼠炎癥因子的干預(yù)[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(36):6701-6704

[6] 蘇毅,賴思含,易海,等. 純化的自體外周血造血干細(xì)胞移植治療難治性幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的初步研究[J]. 實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2011,8(4):33-34

[7] 毛飛,錢暉,朱偉,等. 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞下調(diào)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞TLR8 及TLR9的表達(dá)[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(45): 8371- 8375.

[8] 王黎明,周建軍,白雯,等. 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療17例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的臨床療效觀察[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志,2010,26(7)：659-662

[9] Liang J,Li X,Zhang H,et al. Allogeneic mesenchymal stem cells transplantation in patients with refractory RA[J]. Clin Rheumatol,2012,31(1):157-161

[10] De Miguel MP,Fuentes-Julián S,Blázquez-Martínez A,et al. Immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells:advances and applications[J]. Curr Mol Med,2012,12(5):574- 591

[11] Daikeler T,Tyndall A. Stem cell treatment of autoimmune disease[J]. Dtsch Med Wochenschr,2011,136(33):1684-1686

[12] Kraus KH，Kirker-Head C. Mesenchymal stem cells and bone regeneration[J]. Vet Surg,2006,35(3):232-242

[13] Bielby R,Jones E,McGonagle D. The role of mesenchymal stem cells in maintenance and repair of bone[J]. Injury,2007,38(Suppl 1):S26-S32

[14] Li X,Liu L,Meng D,et al. Enhanced apoptosis and senescence of bone-marrow-derived mesenchymal stem cells in patients with systemic lupus erythematosus[J]. Stem Cells Dev,2012,21(13):2387-2394

[15] Liang J,Zhang H,Hua B,et al. Allogenic mesenchymal stem cells transplantation in refractory systemic lupus erythematosus:a pilot clinical study[J]. Ann Rheum Dis,2010,69(8):1423-1429

楊華強(qiáng)，E-mail:yanghuaqiang2004@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.013

R593.21

B

1008-8849(2015)06-0609-02

2014-01-05