偏頭痛患者血漿中過氧化物酶體增殖物激活受體水平的研究

張賀敏， 何　秋*，林　湘，劉蘇麗，陳曉虹

(1.遼寧省人民醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)四科，遼寧 沈陽 110016； 2.大連醫(yī)科大學(xué)； 3 駐馬店市中心醫(yī)院)

偏頭痛患者血漿中過氧化物酶體增殖物激活受體水平的研究

張賀敏1， 何秋1*，林湘2，劉蘇麗3，陳曉虹1

(1.遼寧省人民醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)四科，遼寧 沈陽 110016； 2.大連醫(yī)科大學(xué)； 3 駐馬店市中心醫(yī)院)

(ChinJLabDiagn,2015,19:0382)

關(guān)于偏頭痛發(fā)病機(jī)制的研究目前仍然是神經(jīng)科的一個(gè)熱點(diǎn)問題，其中腦干-三叉神經(jīng)-血管炎性學(xué)說作為主要發(fā)病機(jī)制越來越受到關(guān)注，而腦和腦膜的炎癥反應(yīng)是偏頭痛的主要病理生理機(jī)制[1,2]。過氧化物酶體增殖物激活受體家族(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)由Issemann等于1990年首次發(fā)現(xiàn)，是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，均屬于核激素受體超家族[3]，PPARs與卒中、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系已有研究[4-6]。我們前期的基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)性大鼠偏頭痛模型中三叉神經(jīng)頸復(fù)合體處過氧化物酶體增殖物激活受體PPARα、PPARβ/δ、PPARγ均呈強(qiáng)陽性表達(dá)[7]，臨床研究顯示偏頭痛發(fā)作期血漿PPARγ水平下調(diào)[8]，提示PPARs可能參與偏頭痛的發(fā)病過程。本研究檢測(cè)偏頭痛患者不同時(shí)期血漿中PPARs水平的變化，進(jìn)一步推測(cè)PPARs與偏頭痛發(fā)作之間的關(guān)系，為偏頭痛的防治提供理論基礎(chǔ)。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

入選病例：在遼寧省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科及神經(jīng)外科門診、住院的偏頭痛患者227例。 其中發(fā)作期98例，發(fā)作間期129例；有先兆偏頭痛患者62例， 無先兆偏頭痛患者165例。診斷標(biāo)準(zhǔn):符合2011版《中國偏頭痛診斷治療指南》的患者入選為偏頭痛患者，研究期間患者可進(jìn)行發(fā)作期止痛治療，但均不可予預(yù)防期治療?；颊咧驹竻⒓?在知情同意書上簽字。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡<15歲或>65歲；(2)體質(zhì)量指數(shù)(BMI)<18 kg/m2或>30 kg/m2；(3)有腦動(dòng)脈瘤、顱內(nèi)感染、腦梗死、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦血管畸形、腦腫瘤等神經(jīng)系統(tǒng)疾病者(經(jīng)TCD、頭CT 或頭MRI、頭MRA等檢查證實(shí));(4)血常規(guī)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、抗“O”(ASO)、RF(類風(fēng)濕因子)、心電圖等檢查異常；(5)同時(shí)合并高血壓病、糖尿病、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病者；(6)患有炎癥及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、橋本氏甲狀腺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病等全身性風(fēng)濕免疫性疾病者；(7)口服避孕藥、懷孕或哺乳期；(8)吸煙。

連續(xù)入選同期健康體檢者100例為健康對(duì)照組。對(duì)照組年齡、性別、民族、地域等與病例組相匹配而無血緣關(guān)系，并且無偏頭痛病史及家族史者。

1.2病人分組

A組：發(fā)作期患者(n=98)；其中A1組—無先兆的發(fā)作期患者(n=71)，A2組—有先兆的發(fā)作期患者(n=27)。

B組：發(fā)作間期患者(n=129)；其中B1組—無先兆的發(fā)作間期患者(n=94)，B2組—有先兆的發(fā)作間期患者(n=35)。

C組為健康對(duì)照組(n=100)。

1.3研究方法

標(biāo)本收集與處理：入院24 h內(nèi)抽取清晨空腹外周肘靜脈血2 ml，收集至EDTA抗凝管中。患者血漿中PPARα、β/δ、γ的水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)。臨床數(shù)據(jù)收集：詳細(xì)收錄一般臨床信息資料(包括性別,年齡、BMI、血壓、血脂等)。

檢測(cè)方法：所取標(biāo)本進(jìn)行3 000 r/min離心10 min后吸取上層清液，分裝置于EP管中，操作步驟嚴(yán)格按照說明書的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。PPARα、β/δ、γ試劑盒由北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1一般資料比較A組、B組、C組各組之間患者的一般資料比較，各方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1　偏頭痛患者各組一般情況比較

注：A：發(fā)作期；A1：無先兆發(fā)作期；A2：有先兆發(fā)作期；B：發(fā)作間期；B1：無先兆發(fā)作間期；B2：有先兆發(fā)作間期。C：對(duì)照組；各組之間年齡、性別、BMI、血壓、血脂(低密度脂蛋白、甘油三酯)等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.2血漿PPARα、β/δ、γ水平比較A組患者血漿PPARα、β/δ水平高于B組及C組者(P<0.05)，PPARγ水平低于B組及C組患者(P<0.05)；亞組分析發(fā)現(xiàn)有無先兆偏頭痛患者發(fā)作期血漿PPARs 水平與發(fā)作間期相比均有顯著差異(P<0.05)。有先兆偏頭痛患者發(fā)作期、發(fā)作間期血清PPARα、β/δ、γ水平與無先兆偏頭痛患者相比無顯著性差異(P>0.05)。B組患者血漿PPARα、β/δ、γ 水平與C組相比無顯著性差異(P>0.05)(表2)。

組別例數(shù)PPARαPPARβ/δ濃度PPARγ濃度A組98572.3±68.1*#591.1±72.2*#157.2±104.4*#A1組71574.9±68.5◆588.5±70.5◆159.8±101.6◆A227565.3±67.6▲597.9±77.6▲150.1±113.2▲B組129306.3±69.2233.1±105.6230.3±97.2B1組94308.8±70.2242.7±109.7233.2±96.4B2組35299.6±66.8207.4±90.0222.6±100.4C組100301.49±74.3245.68±101.7221.86±95.9

*A組與B組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),#A組與C組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)?！鬉1與B1組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);▲A2組與B2組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

3討論

偏頭痛是一種神經(jīng)系統(tǒng)功能性疾患，其機(jī)制至今尚未完全闡明。被公認(rèn)為偏頭痛發(fā)病機(jī)制主流學(xué)說的腦干-三叉神經(jīng)-血管炎性學(xué)說認(rèn)為神經(jīng)源性炎癥的產(chǎn)生使三叉神經(jīng)的刺激逆行或順行傳導(dǎo)傳至大腦皮層引起疼痛[9]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nucleartranscription factor-κB，NF-κB)、IL家族(IL-6、IL-1、IL-10)、TNF-α及TNF-β等因子在偏頭痛的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著作用[10]。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，5-HT、NF-κB及細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)等通過不同途徑參與了偏頭痛的發(fā)病過程[11，12]，同時(shí)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中就PPARs與偏頭痛的關(guān)系進(jìn)行了探討[7]；前期臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)過氧化物酶體增殖物激活受體亞型γ可能也影響偏頭痛的發(fā)生。

PPARs是一種配體激活型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子核受體超家族成員，目前己知的PPARs有3種亞型:PPARα、PPARβ/δ、PPARγ，它們的功能各不相同。PPARα可調(diào)控炎癥、細(xì)胞增殖和分化、氧化應(yīng)激反應(yīng)等非代謝過程的表達(dá)[13-15]。 PPARβ/δ在血管炎癥、腫瘤、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所致炎癥及胰島素抵抗等的發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用[16-18]。PPARγ參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急慢性損傷及炎癥反應(yīng)，在糖脂代謝、腦缺血及中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫性疾病中均具有保護(hù)作用。

本研究檢測(cè)偏頭痛患者血漿中PPARs(PPARα、β/δ、PPARγ)的水平，并分別對(duì)不同時(shí)期的PPARs水平進(jìn)行了比較。我們前期的基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)硝酸甘油實(shí)驗(yàn)性大鼠偏頭痛模型中三叉神經(jīng)頸復(fù)合體處過氧化物酶體增殖物激活受體PPARα、PPARβ/δ、PPARγ均呈強(qiáng)陽性表達(dá)[7]。分析結(jié)果無論動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還是臨床研究中PPARα、PPARβ/δ在血漿均增加。PPARγ水平仍降低，與我們前期臨床試驗(yàn)結(jié)果相符[8]，表明增加樣本量后結(jié)果仍有意義，結(jié)果穩(wěn)定，可信性高；而PPARγ在大鼠三叉神經(jīng)頸復(fù)合體處表達(dá)增強(qiáng)卻在人血漿中水平下降，分析結(jié)果可能與物種不同、組織分布不同或?qū)嶒?yàn)方法等不同有關(guān)，將在未來的實(shí)驗(yàn)研究中做進(jìn)一步探討。

本研究結(jié)果提示PPARs的水平與偏頭痛的發(fā)作密切相關(guān)而PPAR不同亞型間存在差異。分析結(jié)果考慮PPARs對(duì)偏頭痛的發(fā)生產(chǎn)生不同的作用。偏頭痛發(fā)作期血清PPARα水平升高，PPARα激活后，通過抑制P38絲裂原活化蛋白激酶和核因子-κB活化而發(fā)揮抗炎的作用[19]；PPARβ/δ可能通過抑制ERK1/2磷酸化途徑,阻斷LPS誘導(dǎo)的NF-κB激活,并達(dá)到控制炎癥因子的表達(dá)及炎癥反應(yīng)的目的[20]。而偏頭痛發(fā)作時(shí)的血漿PPARγ水平降低，考慮對(duì)偏頭痛的發(fā)生發(fā)作起到了促進(jìn)作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)無先兆的偏頭痛患者與有先兆的偏頭痛患者血漿PPARs水平的比較均無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(無論在發(fā)作期，亦或是發(fā)作間期)，結(jié)果提示偏頭痛患者是否發(fā)生先兆與血漿中的PPARs水平高低可能無關(guān)。偏頭痛先兆的發(fā)生可能是由于偏頭痛患者腦內(nèi)神經(jīng)元的興奮性較枕葉皮層的神經(jīng)元興奮高，容易發(fā)生皮層擴(kuò)散性抑制，最終出現(xiàn)先兆癥狀[21]。

本研究結(jié)果進(jìn)一步說明PPARs參與偏頭痛的發(fā)作主要是由于其參與了炎性反應(yīng)，而非神經(jīng)元的興奮，故有先兆組與無先兆組相比PPARs水平無顯著性差異。

總之，本研究結(jié)果表明PPARs 參與偏頭痛的發(fā)病過程，結(jié)合前期研究結(jié)果考慮發(fā)作期血清PPARα、β/δ水平升高可能是偏頭痛的保護(hù)機(jī)制之一，而PPARγ對(duì)偏頭痛的發(fā)作起到了促進(jìn)作用。本研究的結(jié)論將為完善偏頭痛的發(fā)病機(jī)制研究提供新的思路，為防治偏頭痛的藥物研發(fā)提供理論依據(jù)。展望未來可在基礎(chǔ)研究及臨床研究中進(jìn)一步將作用于PPARs受體的藥物引入偏頭痛的治療中，為偏頭痛的治療打開了新的通道。

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摘要：目的觀察不同時(shí)期、不同亞型偏頭痛患者血漿中過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)的變化，探討偏頭痛的發(fā)病機(jī)制。方法將227例偏頭痛患者分成偏頭痛發(fā)作期組(A組，n=98)和發(fā)作間期組(B組，n=129)；同時(shí)根據(jù)患者先兆癥狀的不同又分為四個(gè)亞組，即A1組-無先兆的偏頭痛發(fā)作期患者(n=71)，A2組-有先兆的偏頭痛發(fā)作期患者(n=27)；B1組-無先兆的偏頭痛發(fā)作間期患者(n=94)，B2組-有先兆的偏頭痛發(fā)作間期患者(n=35)；以年齡、性別相匹配的100例健康者作為對(duì)照組。搜集患者的臨床資料(性別、年齡、BMI、血壓、血脂)，并采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)受試者血漿PPARs水平，采用SPSS系統(tǒng)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果偏頭痛發(fā)作期患者血漿中PPARα、PPARβ/δ水平明顯高于發(fā)作間期及健康對(duì)照者的水平(572.3±68.1 VS 306.3±69.2 VS 301.49±74.3、591.1±72.2 VS 233.1±105.6 VS 245.68±101.7，P<0.05 )，而PPARγ水平發(fā)作期組低于發(fā)作間期組及健康對(duì)照組(157.2±104.4 VS 230.3±97.2 VS 221.86±95.9，P<0.05) ；有先兆和無先兆偏頭痛發(fā)作期PPARα、PPARβ/δ、PPARγ水平與發(fā)作間期比較均有明顯差異( 574.9±68.5 VS 308.8±70.2，588.5±70.5 VS 242.7±109.7，159.8±101.6 VS 233.2±96.4，P<0.05)。PPARs水平在發(fā)作間期患者組與健康對(duì)照者組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P>0.05)；無論是偏頭痛發(fā)作期或發(fā)作間期，有先兆與無先兆患者血漿PPARs水平組內(nèi)比較均無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論P(yáng)PARs參與偏頭痛發(fā)作的病理生理過程，與有無偏頭痛先兆發(fā)生無關(guān)。

關(guān)鍵詞：偏頭痛； 過氧化物酶體增殖物激活受體； 發(fā)病機(jī)制； 炎癥

Changes of serum PPARs levels in migraine patientsZHANGHe-min,HEQiu，LINXiang，etal.(DepartmentofNeurology,LiaoningProvinceHospital,Shenyang110016,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the clinical features of patients with migraine ， and analyze the plasma level of PPARs(peroxisome proliferator-activated receptors) during different periods and different subtypes in migraine patients.To explore the relationship between PPARs and migraine attacks.Methods227 patients with migraine were divided into two main groups:attack period group (n=98) and attack free period group (n=129).According to the patients with or without aura symptoms patients were further divided into four subgroups.100 cases of healthy were taken as control group.Collect the clinical data of patients(Gender,age,BMI,blood pressure,blood lipid.The serum levels of PPARs were measured using enzyme-linked immunoassay (ELISA).Using SPSS software for statistical analysis.ResultsNo significant difference about age,BMI,blood pressure,blood lipid level among migraine during headache attack period、headache free period and the control group..The PPARα、PPARβ/δ levels in patients with migraine during headache attack period were significantly higher than headache free period and healthy control group.The PPARγlevels in patients with migraine during headache attack period were significantly lower than those during headache free period and healthy control group.The PPAR α、β/δ、γlevels in patients with migraine during headache attack period have significant differences compared with those during headache free period no matter with or without aura.The PPARs levels in headache free period have no significant difference to healthy control group (P>0.05).The level of PPARs in plasma of migraine was no significant difference between migraine with aura group and without aura group，regardless of whether during headache attack period or headache free period(P>0.05).ConclusionPPARα、β/δ,and PPARγ involved in the pathogenesis of migraine.With or without aura had no obvious effect to PPARs level.

Key words:Migraine；Peroxisome proliferator-activated receptors(PPARs)；Pathogenesis；Inflammation

收稿日期：(2013-10-13)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：R747.2

文章編號(hào)：1007-4287(2015)03-0382-04

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