組氨酸三聯(lián)體及肺癌抑制因子1基因表達(dá)與宮頸癌發(fā)生及人乳頭瘤病毒感染的相關(guān)性

李　菲

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院, 湖北 武漢, 430060)

組氨酸三聯(lián)體及肺癌抑制因子1基因表達(dá)與宮頸癌發(fā)生及人乳頭瘤病毒感染的相關(guān)性

李菲

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院, 湖北 武漢, 430060)

摘要:目的探討肺癌抑制因子1(TSLC1)及組氨酸三聯(lián)體(FHIT)在正常宮頸組織、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌組織中的表達(dá)及其與人乳頭瘤病毒(HPV)的關(guān)系。方法采用細(xì)胞免疫組化法測(cè)定35例正常子宮組織、40例低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、38例高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)及35例子宮癌組織中TSLC1及FHIT的表達(dá)情況。采用HC2基因雜交捕獲儀(HC-Ⅱ)檢測(cè)各組HPV感染情況。結(jié)果HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常宮頸組織及LSIL，而HPV陽(yáng)性率則高于正常宮頸組織及LSIL(P<0.05)。FHIT表達(dá)與病理分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。TSLC1表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。在正常宮頸組織、LSIL、HSIL及宮頸癌組織中, FHIT、TSLC1表達(dá)與HPV感染呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論FHIT、TSLC1表達(dá)缺失發(fā)生在HSIL階段, FHIT、TSLC1表達(dá)缺失與HPV感染參與宮頸鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變、宮頸癌發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移具有密切的關(guān)系。

關(guān)鍵詞:肺癌抑制因子1; 組氨酸三聯(lián)體; 宮頸癌; 人乳頭瘤病毒

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅中國(guó)女性生命健康。目前普遍認(rèn)為人乳頭瘤病毒(HPV)感染是引起宮頸癌變的重要因素，但HPV感染并非是宮頸癌發(fā)生的唯一因素[1]。近年相關(guān)研究[2]指出，除了HPV感染外，原癌基因的激活及抑癌基因的失活在癌癥發(fā)生及進(jìn)展中也起到關(guān)鍵的作用，因此通過(guò)檢測(cè)相關(guān)癌癥基因表達(dá)情況將有助于臨床盡早識(shí)別HPV感染者宮頸病變進(jìn)展情況，可為宮頸癌早期診斷提供指導(dǎo)。肺癌抑制因子1(TSLC1)及組氨酸三聯(lián)體(FHIT)是近年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其表達(dá)情況與宮頸癌病情進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸具有密切的關(guān)系[3]。本研究探討FHIT與TSLC1基因表達(dá)與宮頸癌發(fā)生及HPV感染的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1　臨床資料

選取2012年6月—2014年6月本院病理科石蠟包埋宮頸組織標(biāo)本進(jìn)行研究，其中低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)40例、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)38例及子宮頸癌35例。另選取35例正常子宮組織標(biāo)本為對(duì)照組，所有標(biāo)本均來(lái)自于慢性宮頸炎或子宮肌瘤組織。宮頸癌組年齡22～68歲，平均年齡(45.3±2.2)歲，<60歲20例，≥60歲15例；病理分級(jí)：中低分化癌 17例，高分化癌18例。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期: Ⅰ期 10例，Ⅱ期 8例，Ⅲ期 10例，Ⅳ 7例。腫瘤大小: >5 cm者14例，≤5 cm者21例。淋巴轉(zhuǎn)移 18例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移17例。所有病例術(shù)前均未接受放化療治療。

1.2　方法

1.2.1細(xì)胞免疫組化法(SABC)測(cè)定FHIT與TSLC1表達(dá)：將上述各樣本組織剪碎后采用D-Hank′s試劑液(美國(guó)Gibco公司)進(jìn)行沖洗，并加入1 mg/mL的DNASeI以及2.5 g/L胰蛋白酶(由美國(guó)Gibco公司提供)混合液，并在37 ℃中孵化60 min, 并在含有小牛血清的DMEM(由美國(guó)Gibco公司提供)培養(yǎng)基中終止消化。樣液反復(fù)吹打后過(guò)濾棄上清液，并用D-Hank′s試劑洗滌2次，再次離心5 min, 棄掉上清液，留置沉淀物，采用SABC法測(cè)定FHIT、TSLC1，兔抗人FHIT多克隆抗體、兔抗人TSLC1多克隆抗體及SABC試劑盒均由美國(guó)Sgima公司提供，操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2HPV檢測(cè):采用HC2基因雜交捕獲儀進(jìn)行檢測(cè)，HC2基因雜交捕獲儀以及HPVDNA檢測(cè)試劑盒均由美國(guó)Digene公司提供，陰道內(nèi)窺鏡由德國(guó)Leica公司提供。

1.3　結(jié)果判斷

① FHIT、TSLC1陽(yáng)性判斷：在倍數(shù)為100的顯微鏡下觀察細(xì)胞著色情況，根據(jù)著色程度由輕至重可分別記為0、1、2、3分。隨機(jī)選取5個(gè)視野點(diǎn)，采用倍數(shù)為400的顯微鏡進(jìn)行觀察，每個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以500個(gè)細(xì)胞作為一組計(jì)算單位，細(xì)胞陽(yáng)性百分率：1分為小于10%, 2分為10%～50%, 3分為大于50%。兩項(xiàng)評(píng)分乘積為綜合得分，綜合得分>3分為陽(yáng)性，≤3分為陰性; ② HPV陽(yáng)性判斷：標(biāo)本中檢出HPV含量≥1.0 pg/mL為陽(yáng)性, HPV含量<1.0則判斷為陰性。

2結(jié)果

2.1　不同宮頸組織中FHIT與TSLC1陽(yáng)性表達(dá)及HPV感染情況

HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常宮頸組織及LSIL, 而HPV陽(yáng)性率則高于正常宮頸組織及LSIL, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表1。

表1　不同宮頸組織中FHIT與TSLC1陽(yáng)性表達(dá)及HPV感染情況[n(%)]

與正常組織相比，*P<0.05; 與LSIL組相比，#P<0.05; 與HSIL組相比，△P<0.05。

2.2　FHIT與TSLC1與宮頸癌臨床特征的關(guān)系

FHIT表達(dá)與病理分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。TSLC1表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05), 見(jiàn)表2。

表2　FHIT與TSLC1與宮頸癌臨床特征的關(guān)系[n(%)]

2.3　不同病理組織中FHIT與TSLC1與HPV感染的關(guān)系研究

正常宮頸組織、LSIL、HSIL及宮頸癌組織中FHIT、TSLC1表達(dá)與HPV感染呈負(fù)相關(guān)(P<0.05), 見(jiàn)表3。

表3　不同病理組織中FHIT與TSLC1與HPV感染的關(guān)系研究[n(%)]

3討論

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，其病死率位居女性惡性腫瘤病死率的第2位[4]。目前普遍認(rèn)為高危型HPV感染與宮頸癌的發(fā)生具有密切的關(guān)系，在幾乎所有的宮頸癌組織中均可檢測(cè)到高危HPV DNA，但宮頸癌患者從感染HPV至最終發(fā)展成為宮頸癌需要數(shù)年甚至數(shù)十年的時(shí)間，且大多數(shù)HPV感染為一過(guò)性，患者可自行消退，僅有小部分患者最終進(jìn)展為浸潤(rùn)性宮頸癌，可以推測(cè)宮頸癌的發(fā)生及進(jìn)展是多階段多因素共同作用引起的[5-6]。本研究中HSIL、宮頸癌組織中HPV陽(yáng)性率則高于正常宮頸組織及LSIL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，從而提示HPV感染與宮頸癌癌前病變具有密切的關(guān)系。隨著宮頸組織病變程度的增加，患者HPV感染率顯著增加，從而提示宮頸病變的發(fā)生與HPV感染具有密切的關(guān)系，結(jié)果與既往研究[8]一致。

近年隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，人們發(fā)現(xiàn)抑癌基因失活及原癌基因激活與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)具有密切的關(guān)系。肺癌抑制因子1(TSLC1)最早是從非小細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其屬于免疫球蛋白超家族細(xì)胞黏附分子(IgCAMs)，與神經(jīng)細(xì)胞黏附分子NCAM1及NCAM2具有高度同源性，可參與細(xì)胞黏附及轉(zhuǎn)移[9]。FHIT基因可由阿非迪霉素誘發(fā)機(jī)體脆性位點(diǎn)HPV16及FRA3B位點(diǎn)獲得，它可參與細(xì)胞周期調(diào)控，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞株中存在FHIT表達(dá)異常、缺失或甲基化[10]。王偉等[11]研究發(fā)現(xiàn)不典型增生細(xì)胞中FHIT蛋白表達(dá)呈減弱或缺失，而在正常上皮細(xì)胞中則表達(dá)正常。Liu等[12]以腺病毒載體作為T(mén)HIT基因?qū)雽m頸癌細(xì)胞中，結(jié)果顯示FHIT蛋白陰性細(xì)胞株中發(fā)生Caspases 8介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，從而表明FHIT可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)。Huang等[13]通過(guò)動(dòng)物體外實(shí)驗(yàn)表明TSLC1突變可引起腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移。Liang等[14]研究指出，TSLC1抑制惡性腫瘤的作用機(jī)制可能與其能有效促使半胱天冬酶凋亡，激活多聚酶底物裂解有關(guān)。本研究中HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常宮頸組織及LSIL，從而表明FHIT、TSLC1表達(dá)缺陷是引起宮頸病變的重要因素，研究結(jié)果與既往文獻(xiàn)一致。這提示臨床工作者可通過(guò)檢測(cè)宮頸組織中FHIT、TSLC1表達(dá)情況，從而判斷患者宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，將有助于宮頸癌的早期篩查及預(yù)防。

參考文獻(xiàn)

[1]張連民, 邊愛(ài)平, 趙旭, 等. Fhit、Survivin基因在宮頸病變中的表達(dá)與高危型HPV感染的相關(guān)性研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2010, 7(2): 60.

[2]唐振華, 李柱南, 黃勇, 等.FHIT和TSLC1基因在宮頸組織中的表達(dá)及其與HPV感染的關(guān)系[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2012, 27(2): 91.

[3]宋春麗, 王惠蘭.宮頸病變中FHIT基因遺傳不穩(wěn)定性與錯(cuò)配修復(fù)基因[J].河北醫(yī)藥, 2013, 35(1): 121.

[4]朱莉, 曹萍, 葛松梅, 等. 宮頸鱗癌人乳頭狀瘤病毒16/18E6感染與脆性組氨酸三聯(lián)體表達(dá)狀態(tài)的研究[J].中國(guó)臨床保健雜志, 2011, 14(2): 182.

[5]Younes S F, Aiad H A, Asaad N Y, et al. FHIT, EGFR, and MSH2: Possible Etiopathologic, Prognostic, and Predictive Role in Non-Small Cell Lung Carcinoma in Egyptian Patients[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2013, 5(8): 226.

[6]Neyaz M K, Hussain S, Hassan M I, et al.Novel missense mutation in FHIT gene: interpreting the effect in HPV-mediated cervical cancer in Indian women[J]. Mol Cell Biochem, 2010, 335(2): 53.

[7]Samir R, Asplund A, Tot T, et al. High-risk HPV infection and CIN grade correlates to the expression of c-myc, CD4+, FHIT, E-cadherin, Ki-67, and p16INK4a[J]. J Low Genit Tract Dis, 2011, 15(4): 280.

[8]李杰, 崔麗峰, 姜賽琳, 等. 宮頸病變中HPV感染與FHIT蛋白表達(dá)的相關(guān)性[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2011, 26(36): 5789.

[9]于嘯. HPV陽(yáng)性和陰性宮頸癌細(xì)胞系基因表達(dá)譜的研究[D].青島大學(xué), 2013.

[10]楊作凱. FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化、MeCP2表達(dá)異常在宮頸癌變過(guò)程中的作用[D].山西醫(yī)科大學(xué), 2011.

[11]王偉, 殷紅梅. 宮頸癌組織中Fhit、survivin和Bcl-2的表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥, 2011, 51(30): 42.

[12]Liu D, Feng X, Wu X, et al. Tumor suppressor in lung cancer 1 (TSLC1), a novel tumor suppressor gene, is implicated in the regulation of proliferation, invasion, cell cycle, apoptosis, and tumorigenicity in cutaneous squamous cell carcinoma[J]. Tumour Biol, 2013, 5(8): 337.

[13]Huang Y, Song H, Hu H, et al. Trichosanthin inhibits DNA methyltransferase and restores methylation-silenced gene expression in human cervical cancer cells[J]. Mol Med Rep, 2012, 6(4): 872.

[14]Liang Q L, Wang B R, Li Z Y, et al. Effect of TSLC1 gene on growth and apoptosis in human esophageal carcinoma Eca109 cells[J]. Arch Med Sci, 2012, 8(6): 987.

Correlation between histidine triad, inhibitory factor in lung cancer 1 gene expressions and occurrences of cervical cancer and human papillomavirus infection

LI Fei

(ThePeople′sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,Hubei, 430060)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expressions of inhibitory factor in lung cancer 1 (TSLC1) and histidine triad (FHIT) in normal cervical tissue, cervical squamous intraepithelial lesions and cervical cancer and their correlation with human papillomavirus (HPV). MethodsThe expressions of TSLC1 and FHIT in 35 cases of normal uterine tissue cells, 40 cases of low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 38 cases of high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) and 35 cases of uterine carcinoma were detected by immunohistochemical method. The HPV infection in each group was detected by Hybrid Capture (HC-Ⅱ). ResultsThe positive expression rates of the FHIT and TSLC1 expression in HSIL, cervical carcinoma were significantly lower than those in normal cervical tissue and LSIL, and positive rate of HPV was significantly higher than normal cervical tissue and LSIL (P<0.05). FHIT expression was correlated with tumor grade, clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). TSLC1 expression was correlated with clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). In normal cervical tissue, LSIL, HSIL and cervical cancer, expressions of FHIT and TSLC1 were negatively correlated with HPV infection (P<0.05). ConclusionLoss of FHIT and TSLC1 expressions occurs in the HSIL stage, and loss of FHIT and TSLC1 expressions were closely correlated with HPV infection involved in cervical squamous cells, the occurrence of cervical cancer, invasion and metastasis.

KEYWORDS:lung cancer inhibitory factor 1; histidine triad; cervical cancer; human papillomavirus

收稿日期:2014-08-23

中圖分類(lèi)號(hào):R 737.33

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)07-097-04DOI: 10.7619/jcmp.201507028