高校病原生物學(xué)實驗室生物安全體系建設(shè)與實施

黃錦桃，梁翠莎，陳劍煌，周 紅，朱兆玲，胡黎平，李美玉

（中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心，廣東廣州510080）

高校病原生物學(xué)實驗室生物安全體系建設(shè)與實施

黃錦桃，梁翠莎，陳劍煌，周 紅，朱兆玲，胡黎平，李美玉

（中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心，廣東廣州510080）

高校病原生物學(xué)實驗室不可避免地存在生物安全隱患，對師生生命財產(chǎn)安全和教學(xué)、科研工作造成嚴(yán)重威脅。本文通過介紹中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心病原生物學(xué)實驗室在生物安全管理、生物安全體系建設(shè)過程中的成效與經(jīng)驗，指出實驗室可能存在的生物安全風(fēng)險與隱患；并結(jié)合國家、省、學(xué)校實驗室生物安全三級管理規(guī)章制度，提出防范隱患、進(jìn)一步完善實驗室生物安全體系建設(shè)的建議。

病原生物學(xué)； 實驗室； 安全； 感染

高校病原生物學(xué)實驗室不可避免存在生物安全隱患，對師生生命財產(chǎn)安全和教學(xué)、科研工作造成嚴(yán)重威脅。因此，實驗室生物安全問題已越來越受關(guān)注，并已成為世界共同關(guān)注的問題[1-2]。2011年，中國東北農(nóng)業(yè)大學(xué)發(fā)生28名師生動物實驗感染“布魯氏菌病”事件，再次為高校實驗室生物安全敲響警鐘。

中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心病原生物學(xué)實驗室，主要承擔(dān)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和人體寄生蟲學(xué)2門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程的實驗教學(xué)工作。進(jìn)入實驗室的教師和學(xué)生，都會不同程度地接觸到病原體。為了有效預(yù)防、及時控制和消除可能發(fā)生在實驗室的生物安全隱患，指導(dǎo)和規(guī)范實驗室的生物安全工作，保障教職員工和學(xué)生的身體健康和生命安全，維護(hù)正常教學(xué)秩序，實驗教學(xué)中心根據(jù)國家、省、學(xué)校的相關(guān)規(guī)定和預(yù)案，結(jié)合病原生物學(xué)實驗室實際，制訂一系列具有針對性的安全規(guī)章制度，并取得了一定成效。

1 實驗室的安全制度與管理

1.1 建立實驗教學(xué)中心管理組織 醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心根據(jù)各實驗室和平臺的特點，建立了完善的生物安全規(guī)章制度，自上而下明確生物安全管理責(zé)任人。成立中心生物安全領(lǐng)導(dǎo)小組，中心主任擔(dān)任生物安全管理責(zé)任人，各實驗室副主任為小組成員；指定中心1名工作人員作為生物安全事務(wù)聯(lián)系人。各實驗室相應(yīng)指定管理責(zé)任人，由實驗室或平臺副主任擔(dān)任責(zé)任人，與另一名實驗人員共同負(fù)責(zé)本實驗室或平臺的生物安全相關(guān)工作，監(jiān)督檢查實驗室技術(shù)規(guī)范和操作規(guī)程的落實情況。

1.2 建立病原生物學(xué)實驗室管理組織 病原生物學(xué)實驗室成立了實驗室生物安全管理小組，制訂學(xué)生實驗室管理責(zé)任人，分別負(fù)責(zé)一間學(xué)生實驗室的教學(xué)實驗工作。明確菌種保管室、細(xì)菌接種培養(yǎng)室、真菌接種培養(yǎng)室、實驗室使用病原體交接室、病原體銷毀室、實驗動物與病原體交接等生物安全相關(guān)場所的安全管理責(zé)任人，做到層層把關(guān)，確保實驗室生物安全。

1.3 建立安全培訓(xùn)制度，樹立普遍防護(hù)意識 制度建設(shè)是實驗室生物安全管理工作的最基本的環(huán)節(jié)，對開展工作具有指導(dǎo)意義和約束力[3]。根據(jù)生物安全相關(guān)規(guī)定和實驗教學(xué)特點，將實驗室安全防護(hù)列入對實驗人員的培訓(xùn)內(nèi)容，使實驗人員掌握必要的防范技能和措施，定期對實驗人員進(jìn)行安全教育，不斷提高安全防護(hù)意識。建立了生物安全實驗技術(shù)培訓(xùn)三級管理制度，由高職稱實驗技術(shù)人員培訓(xùn)中級實驗技術(shù)人員，中級人員培訓(xùn)初級人員，初級人員培訓(xùn)新入職工作人員。

1.4 嚴(yán)格執(zhí)行規(guī)章制度，規(guī)范管理病原體

1.4.1 菌種室的管理 對菌種保管室實行出入登記、使用記錄、雙人雙鎖管理制度，備有《菌種室出入登記冊》、《常用菌種使用登記冊》、《新入菌種登記冊》、《菌種注銷登記冊》、《菌種移交登記冊》等記錄。

1.4.2 學(xué)生實驗室使用菌種的管理 對實驗教學(xué)過程中學(xué)生使用的菌種，在實驗前和實驗后，技術(shù)人員與授課教師之間均有明確的交接記錄，填寫《實驗室使用病原體交接記錄冊》，在流程上確保實驗前后病原體數(shù)量和種類的一致。

1.4.3 病原體及其相關(guān)污染物的清潔銷毀管理 學(xué)生實驗結(jié)束后，實驗技術(shù)人員接收學(xué)生使用過的淘汰實驗物品后，與清潔人員之間進(jìn)行病原體交接記錄，填寫《移交、銷毀病原體交接記錄冊》，對病原體及其污染物品進(jìn)行銷毀。

1.5 明確實驗課病原體使用責(zé)任人

1.5.1 實驗課項目 病原生物學(xué)實驗室開設(shè)的實驗項目中，有47項實驗需接觸活體標(biāo)本，其中醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗接觸的活體項目41項，人體寄生蟲學(xué)實驗6項。實驗技術(shù)人員依據(jù)實驗指導(dǎo)的要求，明確實驗操作責(zé)任人，分別接種、培養(yǎng)各種病原體、感染實驗動物、解剖實驗動物、制作標(biāo)本、清潔、銷毀相關(guān)污染物品等。學(xué)生上實驗課操作的病原體項目有16項，帶教教師作為實驗責(zé)任人指導(dǎo)學(xué)生按照實驗指導(dǎo)要求完成各項實驗。

1.5.2 實驗教學(xué)生物安全確認(rèn)表 制訂實驗教學(xué)病原體生物安全確認(rèn)表格，要求參加實驗的人員填寫此表格。表中記錄了主持該課程的負(fù)責(zé)人、帶教教師、實驗操作的學(xué)生和實驗技術(shù)人員；病原體名稱、實驗時間、地點；實驗?zāi)康摹嶒灱夹g(shù)人員操作的內(nèi)容、學(xué)生操作的內(nèi)容；實驗中可能存在的生物安全風(fēng)險，包括病原體的危害性與應(yīng)急處理措施等。

2 實驗室儀器設(shè)備與實驗物品的安全操作

制定與病原體相關(guān)的實驗儀器操作規(guī)范和實驗技術(shù)操作規(guī)范，要求實驗相關(guān)人員在日常工作中嚴(yán)格執(zhí)行正確的操作程序和方法。

2.1 病原體相關(guān)儀器設(shè)備的安全操作 在實驗室和儀器放置相應(yīng)位置，備有《離心機(jī)與離心物品的安全操作》、《超凈工作臺使用規(guī)范與注意事項》、《生物安全柜與病原體的安全操作規(guī)程》等相關(guān)操作規(guī)范。

2.1.1 《離心機(jī)與離心物品的安全操作》 其中包括離心機(jī)的放置位置與安全操作步驟、離心病原體注意事項、異?，F(xiàn)象處理原則、離心病原體操作步驟、離心用具的清潔、消毒、銷毀等。

2.1.2 《超凈工作臺使用規(guī)范與注意事項》 超凈工作臺主要是保護(hù)操作標(biāo)本不受外界環(huán)境污染。本實驗室主要用于培養(yǎng)基的制作和培養(yǎng)自由生活的阿米巴原蟲或?qū)嶒炇壹兓膭游锇⒚装驮x。

2.1.3 《生物安全柜與病原體的安全操作規(guī)程》 生物安全柜用于操作實驗教學(xué)中的細(xì)菌、真菌、病毒、臨床采集的標(biāo)本等病原體，利于保護(hù)病原體操作人員、實驗教學(xué)環(huán)境和實驗材料，同時也是為避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的氣溶膠和濺出物而設(shè)立。其操作規(guī)程包括操作原理、柜內(nèi)物品放置、操作步驟、安全使用紫外燈、禁止使用明火、妥善處理溢出物、避免氣溶膠產(chǎn)生、操作病原體注意事項、異常現(xiàn)象處理原則、常見病原體操作步驟、實驗物品的清潔、消毒、銷毀等內(nèi)容，以及安全柜的維護(hù)保養(yǎng)等。

3 實驗動物的安全管理

3.1 實驗動物種類與來源 病原生物學(xué)實驗室用于感染病原體的實驗動物主要有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、家兔、家貓、家犬等；流行區(qū)采集或購買的實驗動物主要有淡水螺類、魚類、蝦類、溪蟹、虎紋蛙等寄生蟲的中間宿主或轉(zhuǎn)續(xù)宿主。

實驗動物主要來源于學(xué)校動物中心、社會有資質(zhì)的動物供應(yīng)商、某些疾病的流行區(qū)、或在自由市場購買，其中來源于外購的實驗動物可能存在某些生物安全風(fēng)險。因此，制訂了《實驗動物的安全管理規(guī)范》，積極防護(hù)，規(guī)范操作，將實驗室生物安全風(fēng)險控制在最小范圍內(nèi)，保證實驗教學(xué)的圓滿完成。

3.2 實驗動物生物安全風(fēng)險與防護(hù)

3.2.1 校內(nèi)領(lǐng)取的動物 在校內(nèi)領(lǐng)取的3種實驗動物昆明小鼠，Wistar大鼠，家兔，一般情況下不存在突出的生物安全隱患，但存在被動物抓傷、咬傷的可能性。

3.2.2 社會供應(yīng)商提供的動物 由社會供應(yīng)商提供的5種實驗動物，豚鼠、家貓、家犬、虎紋蛙、家雞，可能存在不同程度的生物安全風(fēng)險，使用前做好應(yīng)急處理預(yù)案，避免事故發(fā)生。

3.2.3 流行區(qū)采集的動物 對于來自寄生蟲病流行區(qū)采集的實驗動物、淡水魚類、陽性釘螺、溪蟹等。從實驗開始至實驗結(jié)束，均存在不同程度的生物安全風(fēng)險。因此，需采取措施，規(guī)避風(fēng)險。

3.2.4 制定規(guī)范，安全操作實驗動物 制定《病原生物學(xué)實驗室實驗動物安全管理規(guī)范》，指導(dǎo)師生順利進(jìn)行實驗?！耙?guī)范”內(nèi)容包括操作者的自身防護(hù)知識；實驗動物的抓取與固定、麻醉與病原體感染、血液采集與動物解剖；實驗動物的倫理與福利、安死術(shù)與尸體銷毀等。

4 討 論

病原生物學(xué)實驗室高度重視實驗室生物安全體系建設(shè)工作，多年來未出現(xiàn)過嚴(yán)重事故，保證了實驗教學(xué)的有序進(jìn)行，圓滿完成實驗教學(xué)任務(wù)。盡管如此，實驗室仍然存在一些生物安全隱患，如：個人防護(hù)意識薄弱、對本科生缺乏系統(tǒng)的生物安全教育及實驗動物的管理不足等。為此，必須采取相應(yīng)措施，防患于未然。

4.1 強(qiáng)化個人防護(hù)意識 資料顯示，90%以上的安全事故與人的防范意識不足有關(guān)[4]。必須嚴(yán)格落實實驗室的各項規(guī)章制度，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理制度及操作規(guī)程，養(yǎng)成良好的安全習(xí)慣。人的不安全行為是事故的直接原因[5-6]，因此，要定期對實驗室人員進(jìn)行培訓(xùn)，以提高工作人員的安全意識及操作技能。對于進(jìn)入病原生物學(xué)實驗室的學(xué)生，應(yīng)根據(jù)每一個實驗項目，對學(xué)生進(jìn)行一次具體而有針對性的安全知識和技能方面的培訓(xùn)。將生物安全滲入到每一個實驗環(huán)節(jié)，形成更規(guī)范的防護(hù)意識。同時強(qiáng)調(diào)個人防護(hù)用品的使用、安全設(shè)備設(shè)施使用方法、清潔及消毒技術(shù)、意外事故處理程序等。使從事病原微生物實驗室的工作人員高度重視生物安全防護(hù)，從根本上減少或盡可能杜絕自身感染、環(huán)境污染、實驗室泄漏等事件發(fā)生。

4.2 加強(qiáng)本科生的系統(tǒng)的生物安全教育 中山大學(xué)自2008年開始，將“實驗室與生物安全”列為醫(yī)學(xué)研究生的必修課程，選用顏光美和余新炳教授主編的“實驗室生物安全”作為教學(xué)參考材料，考試通過學(xué)生可獲得學(xué)位[7]。對本科生則無此要求，導(dǎo)致本科生對生物安全不夠重視，埋下一定的安全隱患。生物安全教育應(yīng)從本科生抓起，建立嚴(yán)格的實驗室準(zhǔn)入制度，生物安全培訓(xùn)合格，才能進(jìn)入實驗室。加強(qiáng)對本科生生物安全教育，有助于為將來從事病原生物學(xué)的相關(guān)研究或臨床工作打下堅實的基礎(chǔ)，也為今后在實際工作中樹立求真務(wù)實的科學(xué)態(tài)度奠定基石[8]。

4.3 加強(qiáng)實驗動物的管理 防范源自實驗動物的感染是實驗室生物安全體系建設(shè)的重要工作。必須按生物安全規(guī)范建立動物房，各種感染動物模型分開飼養(yǎng)，對于自購的實驗動物，感染病原體的實驗動物，以及寄生蟲病流行區(qū)采集的實驗動物，做到嚴(yán)密觀察，獨立飼養(yǎng)，實驗結(jié)束后及時銷毀處理。宣傳動物倫理福利知識，提倡實驗動物使用“3R”原則[9]。在實驗中遵行“3R”原則，不但是重視實驗動物福利和動物倫理，善待實驗動物的表現(xiàn)，也是防范生物安全風(fēng)險和隱患的需要。

綜上所述，如何將病原微生物實驗室各種風(fēng)險減低到可接受的范圍內(nèi)，使醫(yī)學(xué)實驗室成為真正意義上的生物安全實驗室，仍有待于不斷探索和實踐?！鞍踩珶o小事”，實驗室生物安全體系建設(shè)是一項持續(xù)、嚴(yán)肅的重要工作，要時時刻刻“如履薄冰”，嚴(yán)加防范。

[1]李殿鵬.加強(qiáng)高校實驗室安全管理確保實驗室安全運行[J].實驗室研究與探索，2010，29（7）：345-346.

[2]于敏，皮之軍，李建海，等.實驗室生物安全隱患及事故預(yù)防[J].實驗技術(shù)與管理，2012，29（10）：207-209.

[3]張潔，朱昌平，馬文哲，等.高校實驗室生物安全管理工作的思考[J].實驗室科學(xué)，2012，15（1）：195-197.

[4]徐建斌，趙濤濤.高校實驗室安全管理工作現(xiàn)狀與對策研究[J].實驗室科學(xué)，2009（4）：164-165.

[5]齊龍.淺談高校生物實驗室環(huán)保與安全管理[J].實驗室研究與探索，2011，30（4）：176-178.

[6]呂岫華，劉偉，劉巧麗，等.病原生物學(xué)實驗室生物安全[J].實驗室研究與探索，2012，31（10）：189-192.

[7]彭實.關(guān)于一些高校實驗室廢液管理現(xiàn)狀的調(diào)研報告[J].實驗技術(shù)與管理，2010，27（2）：153-157.

[8]李嫄淵，吳淑燕，黃瑞.病原生物學(xué)實驗室的生物安全管理探索[J].實驗室研究與探索，2014，33（5）：275-277.

[9]胡小敏，陳怡，楊東旭，等.機(jī)能實驗教學(xué)中對實驗動物實行“3R”原則的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學(xué)裝備，2011，8（12）：84-86.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.062

:B

:1009-5519（2015）12-1899-03

2015-02-05）

中山大學(xué)教改基金項目（YJ201337）。

黃錦桃（1973-），女，廣東廣州人，實驗師，主要從事病原生物學(xué)實驗教學(xué)工作；E-mail：huangjt@mail.sysu.edu.cn。

李美玉（E-mail：pyt0602@21cn.com）。