HPLC法檢測減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明

李 靜，李倚云，聞琍毓

(揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，揚(yáng)州 225009)

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HPLC法檢測減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明

李 靜，李倚云，聞琍毓

(揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，揚(yáng)州 225009)

目的：建立高效液相色譜法檢測減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為0.02 mol/L乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0)-甲醇(45∶55)，流速為1.0 ml/min，柱溫為35 ℃，檢測波長為225 nm。結(jié)果：酚酞和鹽酸西布曲明分別在10.77～107.70 μg/ml(r=0.999 9)和11.15 ～ 111.50 μg/ml (r=0.999 9)范圍內(nèi)，濃度與其峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率分別為99.37% (RSD為0.73%)和98.97%(RSD為0.60%)。結(jié)論：本方法簡便易行、準(zhǔn)確可靠，可用于檢測減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明。

酚酞，鹽酸西布曲明，減肥類保健食品，高效液相色譜法

目前市場上減肥類保健食品種類繁多，良莠不齊。一些不法商家為追求功效，牟取暴利，不惜向保健食品中非法添加化學(xué)藥品，給廣大消費(fèi)者的身體健康造成嚴(yán)重危害。其中，最常見的添加藥物是酚酞和鹽酸西布曲明。為有效地監(jiān)督減肥類保健食品的質(zhì)量，本文參照有關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，采用HPLC法對減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明進(jìn)行定性定量檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜儀(配Waters 2996二極管陣列檢測器和Empower 化學(xué)工作站)；瑞士METTLER公司AG135型電子分析天平。

1.2 試藥 酚酞對照品(中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號100091-199601，供含量測定用，使用前不需干燥處理)；鹽酸西布曲明對照品(中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號100624-200401，供含量測定用，使用前不需干燥處理)；減肥膠囊(編號為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，批號為20121113、130409、W201308161)；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.02 mol/L乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0)-甲醇(45∶55)；檢測波長：225 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 混合對照品儲備溶液的制備 精密稱取酚酞和鹽酸西布曲明對照品各約10 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇超聲處理30 min使溶解，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備溶液。

2.2.2 供試品儲備溶液的制備 分別取供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10粒，傾出內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉約0.2 g，置100 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ儲備溶液。

2.3 定性鑒別 分別取混合對照品溶液和供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ儲備溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的色譜圖中，檢出與酚酞和鹽酸西布曲明對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。采用二極管陣列檢測器采集各點(diǎn)光譜，供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ色譜圖中的兩個色譜峰分別與酚酞和鹽酸西布曲明對照品色譜峰的紫外吸收光譜一致，可證實(shí)這三批樣品中均添加了酚酞和鹽酸西布曲明?；旌蠈φ掌啡芤汉偷湫蜆悠稨PLC色譜圖見圖1。

1.酚酞 2.鹽酸西布曲明

2.4 定量測定

2.4.1 線性關(guān)系考查 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的酚酞和鹽酸西布曲明混合對照品儲備溶液1.0、2.0、3.0和5.0 ml，分別置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成酚酞和鹽酸西布曲明的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合對照品儲備溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以酚酞和鹽酸西布曲明的峰面積(Y)對其濃度(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為酚酞Y=5×107X+45 486(r=0.999 9，n=5)；鹽酸西布曲明Y=2×107X-11 046(r=0.999 9，n=5)。結(jié)果表明，酚酞和鹽酸西布曲明分別在10.77～107.70 μg/ml和11.15～111.50 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取酚酞和鹽酸西布曲明混合對照品儲備溶液10 μl，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，酚酞和鹽酸西布曲明峰面積的RSD分別為0.93%和0.92%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品Ⅰ，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測定，酚酞和鹽酸西布曲明峰面積的RSD分別為1.50%和0.90%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品Ⅰ溶液，在0、2、4、6和8 h分別進(jìn)樣，記錄峰面積。酚酞和鹽酸西布曲明色譜峰峰面積的RSD分別為0.68%和1.12%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品Ⅰ，共9份，每份約0.2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中。精密稱取酚酞對照品28.30 mg與鹽酸西布曲明對照品33.40 mg，置同一25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取2、2.5和3 ml各三份，分別加入上述9個100 ml量瓶，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密量取10 μl注入液相色譜儀測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示酚酞和鹽酸西布曲明的平均回收率分別為99.37%和98.97%，RSD分別為0.73%和0.60%，見表1和表2。

2.4.6 含量測定 取樣品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品儲備液。樣品Ⅰ：取儲備液即得。樣品Ⅱ：取儲備液測定鹽酸西布曲明含量。另精密量取儲備液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，測定酚酞含量。樣品Ⅲ：取儲備液測定鹽酸西布曲明含量。另精密量取儲備液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，測定酚酞含量。在上述色譜條件下，分別注入高效液相色譜儀測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中酚酞和鹽酸西布曲明的含量，結(jié)果見表3。

表1 樣品中酚酞的回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品中鹽酸西布曲明的回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 酚酞屬于接觸性輕瀉藥，可促進(jìn)腸蠕動而起到減肥的作用，但也可引起過敏性反應(yīng)，誘發(fā)腸炎、皮炎及大出血等，過量或長期濫用可造成電解質(zhì)紊亂、心律失常，發(fā)生神智不清、 肌痙攣以及倦怠無力等癥狀[4]。鹽酸西布曲明是一種有中樞神經(jīng)抑制作用的減肥藥物，長期服用會產(chǎn)生肢體痙攣、思維異常、癲癇等危害嚴(yán)重的副作用[4]。上述兩種化學(xué)藥物只能作為藥品使用，而在保健食品中均不得添加。若消費(fèi)者片面追求減肥效果，盲目地長期、大量服用這類保健食品，必將對自身的健康和生命造成嚴(yán)重威脅。

3.2 實(shí)驗(yàn)中采用二極管陣列檢測器對兩種物質(zhì)進(jìn)行波長掃描，酚酞在228 nm有最大吸收峰，鹽酸西布曲明在222 nm有最大吸收峰。經(jīng)比較，選擇225 nm作為檢測波長，兩種物質(zhì)在此波長處均有較好的吸收，且干擾峰較少，峰形良好。

3.3 由于違法添加化學(xué)藥物的保健食品不會標(biāo)示添加物的含量，在實(shí)際測定中，應(yīng)先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)初步探索樣品中添加物的含量，再根據(jù)需要采用不同的稀釋比例，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.4 本文建立了HPLC法檢測減肥類保健食品中非法添加酚酞和鹽酸西布曲明的方法。操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為檢測非法添加酚酞和鹽酸西布曲明有效方法。

1 姚莉，陳景國，陳冬.減肥類保健品中非法添加化學(xué)藥品的快速篩查[J].淮海醫(yī)藥，2012, 30(6): 547

2 黃奕濱，黃諾嘉，楊文紅.HPLC法測定減肥類保健食品中非法添加酚酞的研究[J].齊魯藥事, 2011, 30(1): 12

3 曹文丁，余佳文，官柳，等.高效液相色譜法測定曲美膠囊中鹽酸西布曲明的含量[J].中國藥房，2004，15(4): 240

4 曾濤.常用減肥藥物的不良反應(yīng)[J]. 中國藥師, 2007, 10(6): 599

2014-10-23

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