豬丹毒的實驗室診斷方法

馬建山

（遼寧省動物疫病預(yù)防與控制中心，遼寧沈陽 110000）

豬丹毒的實驗室診斷方法

馬建山

（遼寧省動物疫病預(yù)防與控制中心，遼寧沈陽 110000）

豬丹毒是由豬丹毒桿菌引起的急性敗血型，或在皮膚發(fā)生特異性紅疹的熱性傳染性疾病，是豬的主要疫病之一。該病可根據(jù)流行病學(xué)資料、癥狀和病理解剖進行判斷，但因急性豬丹毒往往不易與其他急性的豬病區(qū)別，所以較為可靠的診斷方法是細菌檢查和動物接種，至于血清學(xué)的檢驗也有一定的診斷意義。

1 細菌檢查

細菌檢查是診斷豬丹毒較為可靠的方法，可用于病豬生前和死后的檢查。

1.1 顯微鏡檢查在診斷豬病時，可從耳靜脈采血或切開疹塊擠出血液和滲出液作涂片。對急性病例的尸體，可從血液、脾、肝、腎及淋巴結(jié)采取材料作涂片，用革蘭氏或瑞氏法染色后作顯微鏡檢查。豬丹毒菌多是散在于紅細胞之間，也有成堆地存在，并常發(fā)現(xiàn)許多菌被白細胞吞噬的現(xiàn)象。慢性豬丹毒容易從心內(nèi)膜炎的瓣膜增生的纖維組織中找到細菌，并可見由長絲狀菌體構(gòu)成的叢狀物。此外，在顯微鏡檢查時，因豬丹毒桿菌在血液中數(shù)目較少，至少要看10個以上的視野再作判斷。

1.2 細菌培養(yǎng)如經(jīng)顯微鏡檢查找不到細菌或不能確定判定時，就要采用培養(yǎng)檢查法。即以無菌手續(xù)采取病豬的耳血或劃破疹塊部的皮膚取組織液，死豬尸體則從心血或肝、脾、腎及淋巴結(jié)中采取材料，接種于pH7.6～7.8的血液瓊脂斜面及馬丁肉湯中，置35℃培養(yǎng)24h后，按照豬丹毒桿菌的培養(yǎng)特性進行觀察，判斷結(jié)果。慢性病例應(yīng)從心瓣膜的纖維性增生組織中或有病變的關(guān)節(jié)囊內(nèi)采取材料作培養(yǎng)。

1.3 對死亡后時間已久的尸體作細菌培養(yǎng)由于這種材料容易被腐生菌污染，所以培養(yǎng)方法時用含有10%血清的馬丁瓊脂平面劃線接種，或者取管狀的骨髓作培養(yǎng)。但有的學(xué)者認為用骨髓不如用腎臟培養(yǎng)準確。但在交通不便的地區(qū)運送材料或遇尸體已經(jīng)腐敗時，應(yīng)采用骨髓作培養(yǎng)。被檢的材料可放在30%～40%的甘油或食鹽溶液內(nèi)，以防腐敗。

此外，用細菌培養(yǎng)法診斷豬丹毒時，常會遇到混感情況，除丹毒菌外，還可分離出大腸桿菌、巴氏桿菌等，因此應(yīng)注意觀察，分清主次。

2 動物接種

當被檢材料中含菌量極少，或已被污染，僅做細菌分離診斷有困難的，可以接種小動物作為補助診斷。接種材料可取疹塊部組織或血液，或脾、肝、腎等臟器，加少量生理鹽水作成乳劑直接注射，也可用病豬材料的24h肉湯培養(yǎng)物注射，劑量一般為小鼠皮下注射0.2mL，同時還注射豚鼠。如被檢材料是豬丹毒，則小鼠在接種后3～5d死亡，并可以從死亡動物的心血及脾、肝、腎等臟器內(nèi)分離到豬丹毒桿菌。

3 血清學(xué)檢查

3.1 凝集反應(yīng)主要檢測慢性豬丹毒病豬血清中的凝集點。有顯微鏡下檢查法、試管凝集反應(yīng)與全血平板凝集反應(yīng)三種，其中以全血平板凝集反應(yīng)檢查方法最簡便。

（1）全血平板凝集反應(yīng)法：將選出的豬丹毒桿菌接種于10%馬血清的馬丁肉湯中，在37℃培養(yǎng)24h，加0.4%福爾馬林殺菌24h，再離心沉淀洗出菌體，懸浮于1%福爾馬林生理鹽水中，作為本試驗的抗原。為便于觀察反應(yīng)，可在抗原中加入20%甘油及0.001%結(jié)晶紫。取被檢豬的血液1滴放于清潔的玻片上，加抗原1滴混合后在1min左右出現(xiàn)凝集的為陽性反應(yīng)?；技毙载i丹毒的病例在發(fā)病2～5d檢查，即可得出陽性結(jié)果，但應(yīng)注意凡經(jīng)豬丹毒菌苗免疫的或注射抗丹毒血清的豬，在一定時期內(nèi)亦呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，健康豬有時也有輕度凝集或可凝反應(yīng)，不過出現(xiàn)反應(yīng)的時間多在1.5～2.0min以后。

（2）顯微鏡下凝集反應(yīng)法：此法與全血平板凝集反應(yīng)檢查相似，只是將血清與抗原各一滴混合于蓋玻片，作成懸滴標本，在鏡下檢查。細菌凝集成團塊的為陽性，而細菌仍均勻分布為陰性。

3.2 試管凝集反應(yīng)法取被檢血清以生理鹽水作不同倍數(shù)的稀釋，加入抗原混合后置于37℃溫箱4h，取出用低速離心沉淀數(shù)分鐘，陽性反應(yīng)時上液透明，陰性的仍為混濁狀。按照這種方法檢查，陽性反應(yīng)豬的凝集價，有的可達1:200以上。有人曾用血清生長凝集試驗診斷急性豬丹毒獲得成功。方法是將病豬耳部或死亡豬只實質(zhì)性臟器接種于馬丁肉湯中，內(nèi)含1:40抗豬丹毒高免血清與1mL有1000U的卡那霉素，36℃培養(yǎng)12h觀察結(jié)果觀察結(jié)果，如系豬丹毒病豬，在試驗管底部可見明顯的凝集反應(yīng)。

3.3 沉淀反應(yīng)這種反應(yīng)用于死豬尸體診斷，其方法與診斷炭疽的沉淀反應(yīng)方法相同。沉淀素血清用兔制造的比一般抗丹毒血清的效力好?？乖捎貌∷镭i的疹塊部組織，或肝、脾、腎等臟器加5倍生理鹽水磨成乳劑，煮沸5～10min后用石棉濾過至透明即可。檢驗時，取適量沉淀素血清，裝入小試管中，斜持試管，沿管壁加入抗原，重迭于血清上，經(jīng)15～30min后，如在兩液接觸面上有白環(huán)出現(xiàn)的為陽性反應(yīng)。

3.4 熒光抗體法也可以直接的熒光抗體法鑒別豬丹毒培養(yǎng)物和病理組織切片標本，均能在1～2h內(nèi)做出判定。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．12.064