高效液相色譜法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷含量的研究

蔡麗青，鄢連和，林綠冬，陳忠偉

1.青田縣人民醫(yī)院，浙江 青田323900；2.麗水市人民醫(yī)院，浙江 麗水323000

高效液相色譜法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷含量的研究

蔡麗青1，鄢連和2，林綠冬2，陳忠偉1

1.青田縣人民醫(yī)院，浙江 青田323900；2.麗水市人民醫(yī)院，浙江 麗水323000

目的：采用高效液相色譜法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量，為控制玉屏風(fēng)口服液的質(zhì)量提供參考依據(jù)。方法：采用HypersilODS2C18色譜柱，以乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，流速：1mL/min；以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：氣體流速：2.4 L/min；漂移管溫度：108℃。對(duì)3批玉屏風(fēng)口服液中的主要活性成分黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：黃芪甲苷在0.002～0.2mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；回收率為99.1%，RSD值為2.08%；3批玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量分別為0.136mg/mL、0.142mg/mL、0.137mg/mL。結(jié)論：采用高效液相-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量，具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠等優(yōu)點(diǎn)，能夠用于玉屏風(fēng)口服液的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；玉屏風(fēng)口服液；黃芪甲苷；含量檢測(cè)

玉屏風(fēng)口服液是較為常用的非處方藥，該方系由黃芪、防風(fēng)和白術(shù)3味中藥組成，具有良好的斂汗固表、預(yù)防感冒、調(diào)節(jié)人體免疫功能的功效，在中成藥中有“丙種球蛋白”的美譽(yù)，故在日常防治疾病的過(guò)程中具有較為廣泛的用途。黃芪是玉屏風(fēng)口服液的重要成分之一，其含有的活性成分黃芪甲苷具有十分重要的藥理活性，故常將其作為質(zhì)量控制的重要指標(biāo)［1～5］。筆者采用高效液相-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）法對(duì)玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定，建立測(cè)定黃芪甲苷含量的基本方法，為控制玉屏風(fēng)口服液的質(zhì)量提供參考。

1 材料與儀器

1.1 材料 黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110708-201224）；玉屏風(fēng)口服液（江蘇某中藥廠生產(chǎn)，批號(hào)分別為：20131112001，20131112002，20131112003），乙腈（山東禹王試液有限公司禹成化工廠，色譜純，批號(hào)：201310001），甲醇（上海振興化工一廠，色譜純，批號(hào)：2013111007）。試驗(yàn)中使用的其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀（Agilent 1200色譜泵，Agilent 1200自動(dòng)進(jìn)樣器紫外檢測(cè)器，Agilent 1200色譜工作站）；ELSD2000檢測(cè)器；AL104/01電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［6］色譜柱為迪馬公司生產(chǎn)的HypersilODS2 C18色譜柱；黃芪甲苷的色譜條件為：以乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，流速：1 mL/min；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：氣體流速：2.4 L/min；漂移管溫度：108℃，進(jìn)樣量：20μL。

2.2 黃芪甲苷對(duì)照品溶液的制備 精密稱定黃芪甲苷對(duì)照品適量，置于10m L量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得黃芪甲苷對(duì)照品溶液，濃度為0.400m g/m L，備用。

2.3 陰性樣品的制備［7］取防風(fēng)200 g，加10倍量的純化水浸泡2 h，置于揮發(fā)油提取器中提取揮發(fā)油，收集蒸餾后所得的水溶液，剩余的防風(fēng)藥渣與炒白術(shù)200 g，同置于提取容器中，加入8倍量的水，回流提取2次，第一次為1.5 h，第二次為1 h，合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量，加適量的乙醇，醇沉12 h，將上清液濃縮至適量即可。另取400 g蔗糖制成糖漿，與揮發(fā)油共同加入濃縮液中，加適量的純化水調(diào)節(jié)至1000m L，攪拌均勻，過(guò)濾，灌裝，滅菌即得。精密量取玉屏風(fēng)空白口服液20m L，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次25m L，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20m L，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收正丁醇提取液至溶劑揮干，殘?jiān)舆m量的甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10m L的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻、離心、取上清液，即得玉屏風(fēng)陰性樣品，備用。

2.4 供試品溶液的制備 精密量取玉屏風(fēng)口服液20m L，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次25m L，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20m L，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收正丁醇提取液至溶劑揮干，殘?jiān)舆m量的甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10m L的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻、離心、取上清液，即得，備用。

2.5 空白試驗(yàn) 精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液、玉屏風(fēng)口服液樣品溶液和陰性樣品溶液各20μL，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定。由結(jié)果可知，玉屏風(fēng)口服液陰性樣品溶液對(duì)樣品溶液的含量測(cè)定無(wú)任何干擾。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系的考察 精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.05、0.5、1、2、5m L置于10m L量瓶中，定容，吸取對(duì)照品溶液20μL，按照色譜條件測(cè)定，以濃度）的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制黃芪甲苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸得到黃芪甲苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=1.943 2X+5.568 6，r=0.999 6。結(jié)果表明，黃芪甲苷在0.002～0.2m g/m L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.6.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，在色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μL，測(cè)定黃芪甲苷的峰面積。測(cè)定結(jié)果顯示：RSD值為1.22%，表明該方法的精密度良好。

2.6.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，在色譜條件下，每隔2 h精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣7次，測(cè)定峰面積。測(cè)定結(jié)果顯示：RSD值為0.89%，表明供試品溶液中黃芪甲苷在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液，精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，按照黃芪甲苷的色譜條件測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果顯示，RSD值為1.84%，表明采用該方法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量，重現(xiàn)性良好。

2.6.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取玉屏風(fēng)口服液20 mL，按比例加入黃芪甲苷對(duì)照品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備溶液，溶液制備好之后，分別精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，計(jì)算回收率。測(cè)定結(jié)果顯示：黃芪甲苷的回收率為99.1%，RSD值為2.08%，表明該方法的回收率符合相關(guān)規(guī)定。

2.6.6 含量測(cè)定 精密吸取玉屏風(fēng)口服液（批號(hào)分別為：20131112001，20131112002，20131112003）各20 mL，每個(gè)批號(hào)的樣品平行制備6份，按照“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品，精密吸取20μL玉屏風(fēng)口服液樣品溶液注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，計(jì)算樣品中黃芪甲苷的含量。結(jié)果顯示，3批樣品中黃芪甲苷的含量分別為0.136 mg/m L、0.142m g/m L、0.137m g/m L，RSD值分別為1.64%、1.33%、1.96%。

3 討論

玉屏風(fēng)出自元代著名醫(yī)家危亦林所著的《世醫(yī)得效方》，該方由防風(fēng)、黃芪、白術(shù)3味中藥材合理配伍而成，具有益氣、固表、止汗等功效，臨床主要用于表虛不固、自汗惡風(fēng)、體虛易感風(fēng)邪等的治療?，F(xiàn)代藥理研究表明，玉屏風(fēng)中的活性成分黃芪甲苷可增強(qiáng)機(jī)體免疫、提高抗氧化能力及促進(jìn)生長(zhǎng)等，為玉屏風(fēng)方中的重要活性物質(zhì)。為提高患者的順應(yīng)性，采用現(xiàn)代制劑工藝將原方改為口服液，具有服用簡(jiǎn)單、口感較好、攜帶方便的優(yōu)點(diǎn)，受到了廣大患者的青睞。因黃芪為方中的重要成分，故現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中主要考察黃芪中黃芪甲苷的含量，將其作為評(píng)價(jià)玉屏風(fēng)口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要指標(biāo)。

黃芪甲苷的結(jié)構(gòu)比較特殊，為四環(huán)三萜皂苷化合物，在紫外吸收的末端比較弱，如采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)檢測(cè)的準(zhǔn)確性有比較大的影響，故常采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定［8］。筆者采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行了方法學(xué)方面的考察，結(jié)果顯示，采用該方法測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中活性成分黃芪甲苷的含量，具有良好的線性關(guān)系，可快速、準(zhǔn)確測(cè)定黃芪甲苷的含量，適用性較好。由此可見(jiàn)，建立的黃芪甲苷含量的測(cè)定方法可比較準(zhǔn)確地測(cè)定玉屏風(fēng)口服液中黃芪甲苷的含量，為控制玉屏風(fēng)口服液的質(zhì)量提供了一定的依據(jù)。

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［2］王宗權(quán)，賈繼明，裴彩云.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2013，22（19）：10-12.

［3］聶穎蘭，范斌，郭娜，等.HPLC-ELSD法測(cè)定健脾益腎膠囊中黃芪甲苷的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（17）：130-132.

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（責(zé)任編輯：劉淑婷，吳凌）

Determination of Astragaloside in Yupingfeng Oral Liquid by HPLC

CAI Liqing，YAN Lianhe，LIN Lvdong，et al

Objective：To establish a method for detecting the content of astragaloside in Yupingfeng oral liquid by high performance liquid chromatography（HPLC），so as to provide

for controlling the quality of Yupingfeng oral liquid. Methods：HPLCw as perform ed on Hypersil ODS2 C18 column with acetonitrile-water（30∶70）as the mobile phase，flow rate of 1m L/min，evaporative light scattering detector with gas flow rate of 2.4 L/min，and drift tube temperature at 108℃. Astragaloside content of three batches of Yupingfeng oral liquid was determined.Results：Astragaloside within the range of 0.002～0.2 mg/m L show ed good linear relationship with the recovery of 99.1%and RSD of 2.08%.Astragaloside content of the three batches was 0.136 mg/m L，0.142 mg/m L，0.137 mg/m L，respectively.Conclusion：HPLC-evaporative light scattering detection（HPLC-ELSD）is quick，simple，accurate，and reliable for detecting Astragaloside content in Yupingfeng oral liquid，and can be used for the quality control of Yupingfeng oral liquid.

High performance liquid chromatography（HPLC）；Yupingfeng oralliquid；Astragaloside；Content determination

R284

A

0256-7415（2015）02-0225-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.02.105

2014-10-06

蔡麗青（1964-），女，主管（中）藥師，研究方向：中藥。