ELISA技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

張強(qiáng) （安徽科技學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，安徽 蚌埠233100）

食品安全問題不僅會(huì)影響廣大人民群眾的身體健康和生命安全，而且還制約著整個(gè)國家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。然而，當(dāng)下的食品安全問題形勢(shì)嚴(yán)峻，問題頻發(fā)，三聚氰胺、蘇丹紅、致癌毒米、阜陽大頭娃娃奶粉以及瘦肉精等數(shù)十起食品安全事件被曝光后，引起了人們的極大關(guān)注［1］。目前，應(yīng)用于食品安全檢測(cè)的技術(shù)有儀器檢測(cè)法、化學(xué)分析檢測(cè)法、免疫分析檢測(cè)法、定性、定量、在線監(jiān)測(cè)檢測(cè)法等［2］。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）作為一種免疫分析檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)便、有效、特異性強(qiáng)、靈敏度高、不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物殘留、重金屬污染、生物毒素、食品添加劑檢測(cè)等諸多方面［3，4］。筆者對(duì)ELISA技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述，并就其在應(yīng)用中存在的不足及發(fā)展趨勢(shì)和應(yīng)用前景進(jìn)行了探討，旨在進(jìn)一步促進(jìn)該技術(shù)在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用和推廣。

1 ELISA技術(shù)簡(jiǎn)介

ELISA技術(shù)是一種將抗原、抗體免疫反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性有機(jī)地結(jié)合起來的一種非放射性應(yīng)用型檢測(cè)方法。ELISA技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗體或抗原的酶標(biāo)記，其基本原理包括：抗體 （抗原）吸附在固相載體的外表面，并維持抗體 （抗原）的免疫活性；抗體 （抗原）能通過共價(jià)鍵來與酶連接而形成酶復(fù)合物，并維持原有的免疫學(xué)和酶學(xué)活性；酶復(fù)合物與對(duì)應(yīng)的抗體 （抗原）結(jié)合后，可根據(jù)加入底物后的顏色改變來判定試驗(yàn)結(jié)果［5］。

ELISA技術(shù)可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在測(cè)定過程中有3個(gè)必要的試劑，即固相的抗原或抗體 （免疫吸附劑）、酶標(biāo)記的抗原或抗體 （結(jié)合物）和酶反應(yīng)的底物。根據(jù)這些試劑結(jié)合方式的不同，ELISA技術(shù)主要分為直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法等幾種不同應(yīng)用類型［6］。

2 ELISA在食品安全性檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 生物毒素檢測(cè)

生物毒素也稱為天然毒素，是生物體分泌代謝或半生物合成產(chǎn)生的、不可自復(fù)制的有毒化學(xué)物質(zhì)。目前，已發(fā)現(xiàn)的的生物毒素有數(shù)千種，依據(jù)來源可以把生物毒素分為微生物毒素、植物毒素和動(dòng)物毒素［7］。存在于食物中的毒素往往會(huì)引起食物中毒、胃腸炎、溶血性貧血甚至癌癥等威脅人類健康的疾病，其在食品中的含量在每個(gè)國家都具有嚴(yán)格控制標(biāo)準(zhǔn)［8］。黃曲霉毒素B1是黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)、危害最大的一種［9］。劉蓉等［10］利用基因工程手段制備了黃曲霉毒素B1的單鏈抗體，將其用于ELISA檢測(cè)方法以檢測(cè)醬油中黃曲霉毒素B1的含量，其檢測(cè)限為0.10ng／mL，平均加標(biāo)回收率在84%～109%之間；肖智等［11］將黃曲霉毒素B1轉(zhuǎn)化為半縮醛B2a，再以B2a為半抗原通過雜交瘤技術(shù)制備了黃曲霉毒素B1高特異性單克隆抗體，通過ELISA技術(shù)對(duì)黃曲霉毒素B1的檢測(cè)限為 （0.6±0.078）ng／mL，抗體與其他黃曲霉毒素的交叉反應(yīng)率顯著降低；Wang等［12］建立了基于多克隆抗體檢測(cè)黃曲霉毒素M1的ELISA快速分析方法，該法檢測(cè)限為1.0ng／mL。目前，ELISA技術(shù)除了應(yīng)用于食品中黃曲霉毒素的檢測(cè)外，還在脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 （DON）、赤霉烯酮 （ZEN）等其他真菌毒素［13］及河豚毒素、蓖麻毒素和苦馬豆素等動(dòng)物和植物源毒素［14］檢測(cè)方面得到了廣泛的應(yīng)用，并均取得了較理想的效果，表明該法在食品毒素檢測(cè)方面大有潛力可挖，值得進(jìn)一步應(yīng)用。

2.2 致病微生物檢測(cè)

病原微生物可引起食源性疾病，是食品生物性污染的重要因素，也是影響食品安全的主要因素之一。傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)檢查以染色、培養(yǎng)、生化鑒定等為主，將標(biāo)本直接涂片染色鏡檢和接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)是對(duì)細(xì)菌或真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法［15］。這些常規(guī)方法需要大量的手工勞動(dòng)，檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，對(duì)特征菌落的判定受主觀因素影響較大，容易漏檢，無法滿足現(xiàn)代對(duì)微生物快速檢測(cè)的需要，而ELISA技術(shù)在這方面具有一定優(yōu)勢(shì)。目前，已有許多研究者借助ELISA技術(shù)建立了食品中有害菌的檢測(cè)方法。李建科等［16］建立了果汁中耐熱菌的間接性ELISA檢測(cè)方法，檢測(cè)限為5×104CFU／mL，檢測(cè)時(shí)間比目前國內(nèi)外普遍采用的美國庫克食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)法縮短3～4d；張顯昱等［17］建立了能夠快速檢測(cè)樣品中鮰愛德華菌的競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，該方法對(duì)鮰愛德華菌的最低檢測(cè)量為1×106cells／mL，具有良好的靈敏性和特異性；伍燕華等［18］建立了快速檢測(cè)食品中沙門氏菌的雙抗夾心ELISA方法，該法最低檢測(cè)量為1×104CFU／mL，與其他雜菌不存在交叉反應(yīng)，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中的沙門氏菌。目前，ELISA法可用于檢測(cè)食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌、彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌、軍團(tuán)菌、假單胞菌屬、大腸桿菌O－157、致賀氏菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌和臘樣芽抱桿菌等多種致病微生物，在病原微生物檢測(cè)方面具有很大的發(fā)展空間。

2.3 重金屬污染檢測(cè)

隨著環(huán)境污染的日益加劇，食品原料或成品的重金屬污染也日趨嚴(yán)重，如何快速、有效地檢測(cè)出受重金屬污染的食品迫在眉捷。傳統(tǒng)的重金屬檢測(cè)方法有原子吸收光譜法、X射線熒光光譜法、電感耦合等離子發(fā)射光譜法 （ICP－AES）等，該類方法準(zhǔn)確、敏感，但儀器較昂貴，操作復(fù)雜，需要專業(yè)的工作人員，不適于大規(guī)?？焖倨詹椤＝陙?，ELISA技術(shù)在食品中重金屬檢測(cè)方面得到了迅速發(fā)展。郭常偉等［19］建立了樣品中銅離子的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法。該法最低檢測(cè)限為2.0ng／mL，與ICPAES法檢測(cè)結(jié)果的總符合率超過94%；方淑兵等［20］建立了重金屬汞離子的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA分析方法，該法檢測(cè)限為0.45μg／L，靈敏度為4.10μg／L，與其他金屬均無明顯交叉反應(yīng)，與電感耦合等離子體質(zhì)譜 （ICP－MS）法檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性 （相關(guān)系數(shù)為0.988）；楊依錦等［21］建立了重金屬鉛的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，最低檢出限為0.32ng／mL，與ICP－MS法檢測(cè)結(jié)果的總符合率超97%；王津等［22］建立了樣品中鎘離子的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)法，其檢測(cè)限為0.76μg／L，與其他金屬螯合物的交叉反應(yīng)率均低于1.32%。上述研究結(jié)果表明，ELISA法具有較高的準(zhǔn)確性，適用于樣品中重金屬的快速篩選和檢測(cè)。

2.4 農(nóng)藥殘留檢測(cè)

自1983年以來，ELISA技術(shù)已成為國際上分析農(nóng)藥殘留的首選方法，目前已廣泛用于有機(jī)磷類、有機(jī)氯類、除蟲菊酯、磺胺類等農(nóng)藥殘留的檢測(cè)［23］。方松等［24］建立了基于多克隆抗體的氯噻啉間接競(jìng)爭(zhēng)酶性ELISA分析方法，該方法的最低檢測(cè)限為1.8μg／L，所得多克隆抗體除與吡蟲啉有較大的交叉反應(yīng)外，與其他結(jié)構(gòu)相似的化合物無明顯交叉反應(yīng)；余鵬敏等［25］建立了樣品中乙草胺含量的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)法，該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，檢測(cè)限為24.4μg／L，與結(jié)構(gòu)相似的其他農(nóng)藥無明顯交叉反應(yīng)，適合環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品中乙草胺的檢測(cè)；韋倩妮等［26］建立了有機(jī)磷農(nóng)藥三唑磷的間接性ELISA檢測(cè)法，該方法最低檢測(cè)限為1.0μg／L，定量檢測(cè)線性范圍為2.5～100.0μg／L，具有高度的特異性，與其他有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)類似物無明顯交叉反應(yīng)。目前，許多國家已開發(fā)出相應(yīng)的ELISA檢測(cè)試劑盒，可用于直接檢測(cè)果蔬等植物性食品中的農(nóng)藥殘留。

2.5 獸藥殘留檢測(cè)

食品中獸藥殘留是影響世界各國食品安全的主要因素。食品中獸藥殘留主要包括抗生素類、激素藥類、抗球蟲類、呋喃藥類、磺胺藥類和驅(qū)蟲藥類藥物。目前，關(guān)于動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測(cè)中ELISA法的應(yīng)用已取得顯著成效。楊君宏等［27］建立了一種檢測(cè)牛組織中阿維菌素類藥物 （Avermectins，AVMs）殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法，該法可同時(shí)檢測(cè)牛肝臟和肌肉中阿維菌素、伊維菌素和埃普里諾菌素殘留，檢測(cè)限為1.1ng／mL；姜金慶等［28］建立了樣品中氟喹諾酮類藥物殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，檢測(cè)限為0.1ng／mL，該法對(duì)恩諾沙星、諾氟沙星和培氟沙星均能特異性識(shí)別；王鶴佳等［29］建立雞肉中尼卡巴嗪殘留的競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，在雞肉中檢測(cè)限為9.2μg／kg，在精密度、靈敏度和準(zhǔn)確度方面均能滿足獸藥殘留篩選檢測(cè)要求。上述研究結(jié)果表明，隨著ELISA技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，其在動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用前景將十分廣闊。

2.6 轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)

隨著轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類和數(shù)量的不斷增多，轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品的安全性也越來越受到人們關(guān)注，越來越多的國家要求對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品實(shí)行標(biāo)簽制度，這就對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)提出了更高的要求。目前，ELISA技術(shù)已廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)。顧煒煒等［30］研制了用于檢測(cè)轉(zhuǎn)Btcry2Ab／2Ac殺蟲蛋白基因食品的直接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA試劑盒，最低檢測(cè)限為40ng／mL，可用于轉(zhuǎn)基因食品的快速、批量檢測(cè)；朱振營(yíng)等［31］建立了轉(zhuǎn)基因牛奶及奶制品中人乳鐵蛋白的夾心ELISA檢測(cè)方法，檢測(cè)限為0.25×10－3g／L；劉志浩等［32］建立了檢測(cè)轉(zhuǎn)膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因玉米的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，并與傳統(tǒng)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （PCR）檢測(cè)法進(jìn)行比較，2種檢測(cè)方法的符合率為100%，確定了該方法的準(zhǔn)確性和可靠性；Guerler等［33］建立了轉(zhuǎn)CryAb蛋白基因食品的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法，對(duì)CrylAb蛋白的分析檢測(cè)限為0.4ng／mL，檢測(cè)特異性優(yōu)于實(shí)時(shí)熒光PCR，證實(shí)了ELISA技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)中具有可利用性。

2.7 過敏原的檢測(cè)

食品的過敏反應(yīng)已成為人類生活中普遍存在的一個(gè)嚴(yán)重問題，引起了人們的廣泛關(guān)注。建立有效的食品過敏原檢測(cè)方法是過敏原安全管理的技術(shù)保障。目前ELISA技術(shù)是除PCR反應(yīng)以外的另一種非常重要的檢測(cè)方法。張潔瓊等［34］建立了杏仁過敏原苦杏仁球蛋白的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，該法對(duì)甜杏仁中苦杏仁球蛋白的檢測(cè)限為 （6.36±1.02）μg／L，與常見的14種植物性蛋白沒有交叉反應(yīng)；談超等［35］建立了綠豆過敏原蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，該法檢出限為 （0.72±0.035）μg／mL；吉坤美等［36］建立了食物中花生過敏原蛋白的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法，該法特異性強(qiáng)，其最低檢出限為8ng／mL。上述研究表明ELISA技術(shù)是一種實(shí)用、靈敏、特異性強(qiáng)的食品中過敏原的檢測(cè)方法。

2.8 食品中違法添加的非食用物質(zhì)的檢測(cè)

違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑是導(dǎo)致食品質(zhì)量安全問題的重要原因之一。近年來出現(xiàn)的如瘦肉精、三聚氰胺以及蘇丹紅等食品安全事件，反映出當(dāng)前在食品生產(chǎn)和加工過程中濫用食品添加劑和違法添加非食用物質(zhì)的問題十分嚴(yán)重。因此，ELISA技術(shù)作為一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)以及快速的檢測(cè)方法對(duì)于食品中違法添加劑的分析檢測(cè)尤為重要。王黎麗等［37］建立了基于單克隆抗體的三聚氰胺間接和直接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，2種檢測(cè)法的檢測(cè)限分為0.079μg／L和0.12μg／L；郭杰標(biāo)等［38］建立了保健酒中非法添加雙氯芬酸的競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，其最低檢出限為2.0ng／mL，與8種相關(guān)藥物交叉反應(yīng)率都小于0.1%。范祚舟［39］建立了一種能夠快速檢測(cè)食品中蘇丹紅的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)法，對(duì)于蘇丹紅I檢測(cè)的IC50為0.34ng／mL；汪惠澤［40］建立了樣品中鹽酸克倫特羅的間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法，該法檢測(cè)限低于0.5ng／mL，交叉實(shí)驗(yàn)表明，該法具有高度的特異性，與其他一些P－腎上腺素激動(dòng)劑藥物無交叉反應(yīng)。

3 ELISA技術(shù)存在的主要問題

與其他分析檢測(cè)技術(shù)相比，ELISA技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于特異性強(qiáng)、靈敏度高、測(cè)定成本低、樣品處理量大、對(duì)儀器設(shè)備要求不高、方法快速簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高、無放射性同位素污染等，但其在食品安全檢測(cè)的應(yīng)用過程中也存在著一些問題。首先，該方法需要較多的儀器設(shè)備，如酶標(biāo)儀、冰箱及恒溫箱等，不適宜基層現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。其次抗體制備較困難。一方面，一些單克隆抗體制備的時(shí)間較長(zhǎng) （至少2個(gè)月），另一方面有些被檢測(cè)樣品分子量小，必須與BSA等大分子蛋白質(zhì)偶聯(lián)后才具備免疫原性，而且并非所有的小分子被檢樣品都能制備出用于免疫分析的抗體，因?yàn)槠涫茉撐镔|(zhì)的結(jié)構(gòu)和載體蛋白的連接位置等多種因素的影響。再次，對(duì)與待檢樣品結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)，容易出現(xiàn)假陽性，將導(dǎo)致定量檢測(cè)準(zhǔn)確度降低。此外，由于食品的樣本類型復(fù)雜，基質(zhì)效應(yīng)可能抑制免疫結(jié)合反應(yīng)。不同待測(cè)樣品性質(zhì)各異，處理方法存在許多不確定性，同時(shí)抗體特異性和穩(wěn)定性對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響機(jī)制尚不清楚，影響其特異性和穩(wěn)定性的因素還不是很明確，使得不確定因素增多且不易控制，難以實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。

4 ELISA技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)與應(yīng)用前景

目前，ELISA技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用越來越廣泛，伴隨科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，該技術(shù)必將產(chǎn)生新的發(fā)展趨勢(shì)，具體內(nèi)容如下：開發(fā)具有高度免疫性的重組抗原來代替無法分離的原始抗原物質(zhì)以提高其免疫原性；將酶體外定向進(jìn)化應(yīng)用到檢測(cè)中 （一種同時(shí)具有催化底物顯色反應(yīng)的酶活性和特異性抗體或抗原性質(zhì)的融合蛋白），避免酶與特異性抗體或抗原的化學(xué)交聯(lián)過程，從而大大地提高檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性；加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)化，促進(jìn)商品化的應(yīng)用；與其他檢測(cè)方法如PCR、色譜技術(shù)等相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，擴(kuò)大其優(yōu)勢(shì)、改善弊端。隨著研究的不斷深入，相信ELISA技術(shù)的應(yīng)用范圍會(huì)越來越廣，檢測(cè)限會(huì)越來越低，穩(wěn)定性越來越強(qiáng)，檢測(cè)時(shí)間越來越短，費(fèi)用越來越低，ELISA技術(shù)在未來食品安全的快速檢測(cè)中將發(fā)揮更加突出和重要的作用，從而使食品安全檢測(cè)技術(shù)愈加精確、簡(jiǎn)單、方便。

［1］ 宣偉，王軍，汪秀月，等.食品安全檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展 ［J］.肉類研究，2011，（9）：47～51.

［2］ 隋廣文.食品安全檢測(cè)技術(shù)綜述 ［J］.科技傳播，2013，（14）：81～82.

［3］ 于振，周雪林，陳娟，等.食品安全檢測(cè)中的酶聯(lián)免疫技術(shù)應(yīng)用 ［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工，2014，（9）：58～61.

［4］ 孔濤，郝貴增，郝雪琴，等.ELISA在飼料及食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用 ［J］.飼料研究，2012，（7）：73～75.

［5］ 方禮祿，王朝軍，徐利，等.應(yīng)用ELISA檢測(cè)我國豬病的研究進(jìn)展 ［J］.飼料博覽，2013，（9）：38～42.

［6］ 丁曉燕，盧平，胡德禹.酶聯(lián)免疫分析方法在有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展 ［J］.山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2011，30（6）：547～553.

［7］ 許艷麗，鮑蕾，靜平，等.生物傳感器在生物毒素檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展 ［J］.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2012，（5）：432～436.

［8］ 何紫薇，郭琦.酶聯(lián)免疫吸附 （ELISA）技術(shù)在食品檢驗(yàn)的發(fā)展應(yīng)用 ［J］.科協(xié)論壇，2012，（11）：71～72.

［9］ 王桂才.黃曲霉毒素B1檢測(cè)方法的研究分析 ［J］.食品研究與開發(fā)，2012，33（4）：239～240.

［10］ 劉蓉，楊煉，孫秀蘭，等.應(yīng)用抗黃曲霉毒素單鏈抗體檢測(cè)醬油中黃曲霉毒素B1［J］.食品工業(yè)科技，2011，（1）：281～283.

［11］ 肖智，李培武，張奇，等.高特異性黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備及特性研究 ［J］.中國油料作物學(xué)報(bào)，2011，（1）：66～70.

［12］ Wang J J，Liu B H，Hsu Y T，et al.Sensitive competitive direct enzyme－linked immunosorbent assay and gold nanoparticle immunochromatographic strip for detecting aflatoxin M1in milk ［J］.Food Control，2011，22：964～969.

［13］ 戚紅卷，榮釗，岳麗君，等.一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)系統(tǒng)用于米面中真菌毒素檢測(cè)的效果評(píng)價(jià) ［J］.醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2014，35（8）：75～78.

［14］ 林壯森，張焜，趙肅清，等.食品中生物毒素的ELISA分析方法研究進(jìn)展 ［J］.食品科學(xué)，2009，（3）：281～283.

［15］ 云云，汪長(zhǎng)中，吳璇.病原微生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展 ［J］.安徽醫(yī)藥，2013，（3）：501～503.

［16］ 李建科，王峰，夏凱.蘋果濃縮汁中耐熱菌的間接ELISA快速檢測(cè)方法 ［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，44（22）：4669～4677.

［17］ 張顯昱，李強(qiáng)，李明，等.兩種鮰愛德華菌ELISA快速檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用 ［J］.中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2013，15（3）：175～182.

［18］ 伍燕華，牛瑞江，賴衛(wèi)華，等.雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)沙門氏菌 ［J］.食品工業(yè)科技，2014，35（10）：62～65.

［19］ 郭常偉，唐勇，向軍儉，等.重金屬銅離子單克隆抗體的制備及其間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立 ［J］.中國生物制品學(xué)雜志，2011，24 （6）：720～723.

［20］ 方淑兵，王俊平，王碩，等.重金屬汞酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立 ［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（16）：86～88.

［21］ 楊依錦，王俊平，王津，等.重金屬鉛酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究 ［J］.食品與機(jī)械，2012，（3）：80～83.

［22］ 王津，生威，王俊平，等.間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)水樣中的重金屬鎘 ［J］.食品與機(jī)械，2012，（3）：84～86.

［23］ 于偉.酶聯(lián)免疫技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用 ［J］.黑龍江科技信息，2012，（11）：73～74.

［24］ 方松，張斌，施海燕，等.氯噻啉酶聯(lián)免疫分析方法研究 ［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（3）：287～292.

［25］ 余鵬敏，施海燕，王鳴華.乙草胺的酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù) ［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，27（2）：420～425.

［26］ 韋倩妮，黃魁英，雷紅濤，等.有機(jī)磷農(nóng)藥三唑磷單克隆抗體制備及鑒定 ［J］.食品科學(xué)，2011，32（1）：154～157.

［27］ 楊君宏，何繼紅，侯曉林，等.ELISA方法檢測(cè)牛組織中的阿維菌素類藥物殘留 ［J］.中國獸醫(yī)雜志，2014，（9）：70～72.

［28］ 姜金慶，楊雪峰，王自良，等.氟喹諾酮類藥物多殘留間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立 ［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33（11）：887～892.

［29］ 王鶴佳，劉智宏，汪霞，等.酶聯(lián)免疫法測(cè)定雞肉中尼卡巴嗪殘留 ［J］.中國獸藥雜志，2014，48（3）：59～61.

［30］ 顧煒煒，潘家榮.轉(zhuǎn)基因食品中Btcry2Ab／2Ac殺蟲蛋白直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的研制 ［J］.食品科技，2007，（6）：203～206.

［31］ 朱振營(yíng)，劉建，林祥梅，等.轉(zhuǎn)基因牛奶及奶制品中人乳鐵蛋白夾心ELISA檢測(cè)方法的建立 ［A］.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì).中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十六屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集 ［C］.哈爾濱：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2012.

［32］ 劉志浩，高麗麗，王新桐，等.轉(zhuǎn)基因玉米中膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立 ［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào) （自然科學(xué)版），2013，（11）：45～50.

［33］ Guertler P，Paul V，Albrecht C，et al.Sensitive and highly specific quantitative real－time PCR and ELISA for recording apotential transfer of novel DNA and Cry1Ab protein from feed into bovine milk ［J］.Analytical and bioanalytical chemistry，2009，393：1629～1638.

［34］ 張潔瓊，高淑霞，生威，等.雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)杏仁過敏原苦杏仁球蛋白 ［J］.食品科學(xué)，2013，34（16）：173～177.

［35］ 談超，高愛華，張燕，等.綠豆過敏原多克隆抗體制備及間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立 ［J］.中國食品學(xué)報(bào)，2013， （7）：170～174.

［36］ 吉坤美，陳家杰，湯慕瑾，等.雙抗體夾心ELISA法測(cè)定食物中花生過敏原蛋白成分 ［J］.食品研究與開發(fā)，2009，（6）：110～114.

［37］ 王黎麗，陳芳芳，吳超，等.基于單克隆抗體的三聚氰胺ELISA檢測(cè)方法的建立 ［J］.食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2012，30（6）：962～966.

［38］ 郭杰標(biāo)，李杏娉，郝卿辰，等.保健酒違法添加雙氯芬酸免疫檢測(cè)方法的建立 ［J］.食品與機(jī)械，2013，29（4）：59～62.

［39］ 范祚舟.蘇丹紅Ⅰ半抗原的改造及其抗體制備 ［D］.南京：南京大學(xué)，2012.

［40］ 汪惠澤.鹽酸克倫特羅單克隆抗體的制備及其CiELISA檢測(cè)方法的建立 ［D］.揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2012.