云芝葡聚糖對煙草馬鈴薯Y病毒的抗性研究

張 鑫,段軍娜,翟 楓,羅 晶,成巨龍,安天賜,安德榮

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室 植物保護(hù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100;2 陜西省煙草研究所，陜西 西安 710002)

云芝葡聚糖對煙草馬鈴薯Y病毒的抗性研究

張 鑫1,段軍娜1,翟 楓1,羅 晶1,成巨龍2,安天賜1,安德榮1

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室 植物保護(hù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100;2 陜西省煙草研究所，陜西 西安 710002)

【目的】 研究云芝葡聚糖對煙草馬鈴薯Y病毒(PVY)的抑制作用，為新型殺菌劑云芝葡聚糖水劑的開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)?！痉椒ā?以PVY枯斑寄主莧色藜(Chenopodiumamaranticolor)、系統(tǒng)寄主心葉煙(Nicotianaglutinosa)為材料，采用枯斑法、葉圓片法及室內(nèi)盆栽試驗，測定云芝葡聚糖的抗PVY活性及其誘導(dǎo)抗病性，同時測定其對煙草防御酶POD、PAL活性的影響?！窘Y(jié)果】 云芝葡聚糖對PVY具有很強的預(yù)防作用和誘導(dǎo)抗性，700 μg/mL 云芝葡聚糖的預(yù)防效果達(dá)73.98%，誘導(dǎo)抗性達(dá)59.84%；對PVY有一定的鈍化和抑制增殖作用，其中700 μg/mL云芝葡聚糖對PVY的鈍化效果為28.79%，對PVY的增殖抑制率達(dá)40.25%；云芝葡聚糖處理能提高煙草葉片POD和PAL活性；室內(nèi)盆栽試驗結(jié)果表明，云芝葡聚糖對PVY寄主表現(xiàn)出很強的保護(hù)活性，保護(hù)效果優(yōu)于治療效果，接種病毒14 d后1.1%云芝葡聚糖水劑300倍液的保護(hù)、治療效果分別為73.33%和38.46%?！窘Y(jié)論】 云芝葡聚糖是一種很強的免疫增強劑，對PVY的抑制作用顯著，提前施用對寄主可起到很好的保護(hù)作用。

云芝葡聚糖；煙草馬鈴薯Y病毒；抑制作用；防御酶活性

馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)是Y病毒科(Potyviridae)Y病毒屬(Potyvirus)的代表種，主要侵染包括煙草在內(nèi)的多種茄科植物，是重要的世界性植物病毒[1]，可嚴(yán)重危害煙草(Nicotianatabacum)、馬鈴薯(Solanumtuberosum)、辣椒(Capsicumspp.)、番茄(S.lycopersicum)等作物，引起植株花葉、斑駁、畸形、矮化、壞死[2]。煙草馬鈴薯Y病毒病是由PVY侵染煙草引起的一種系統(tǒng)性侵染病害，又稱煙草脈壞死病、煙草脈帶病[3]，是世界煙草產(chǎn)區(qū)的重要病害之一，該病防治困難，對煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量有很大影響。

云芝葡聚糖(Trametesversicolorpolysaccharides)是從擔(dān)子菌綱多孔菌科(Polyporaceae)云芝屬(Polystictus)真菌云芝或培養(yǎng)菌絲中提取的具有多種生物活性的葡聚糖物質(zhì)。作為一種免疫增強因子，云芝葡聚糖具有的抗病毒、抗腫瘤以及免疫增強作用，在醫(yī)學(xué)上已被普遍接受[4]，但有關(guān)云芝葡聚糖對植物病毒的抑制作用研究報道很少。近年來，國內(nèi)外大量研究表明，真菌葡聚糖對煙草花葉病毒(TMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)等植物病毒的侵染和增殖有抑制作用[5-9]，能誘導(dǎo)煙草防御酶活性，顯著提高煙草葉片多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)的活性[10-12]，同時真菌葡聚糖能誘導(dǎo)煙草體內(nèi)水楊酸(Salicylic acid，SA)含量提高[13]，對植物抗病基因介導(dǎo)的抗性產(chǎn)生有重要作用，能激活防御反應(yīng)和調(diào)控植物生長抑制病害的形成[14-15]，這些發(fā)現(xiàn)開辟了防治植物病毒病的新途徑。云芝葡聚糖作為一種真菌源葡聚糖，將其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)病毒病防治具有重要的研究價值。

西北農(nóng)林科技大學(xué)旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室前期對12種真菌葡聚糖的抗病毒作用進(jìn)行系統(tǒng)篩選[9]，發(fā)現(xiàn)云芝葡聚糖對TMV、CMV具有很強的預(yù)防作用，且經(jīng)葡聚糖處理后能提高煙草產(chǎn)量和質(zhì)量。為此，本研究采用酶、超聲波聯(lián)用方法提取云芝葡聚糖，以PVY枯斑寄主莧色藜(Chenopodiumamaranticolor)、系統(tǒng)寄主心葉煙(Nicotianaglutinosa)為材料，測定云芝葡聚糖的抗PVY活性及其誘導(dǎo)抗病性，同時測定其對煙草防御酶POD、PAL活性的影響，旨在為新型殺菌劑 1.1% 云芝葡聚糖水劑的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試菌株：云芝(Trametesversicolor)YZ-3，由西北農(nóng)林科技大學(xué)旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室保存。

供試植物：莧色藜、心葉煙，其種子由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所提供。

供試病毒：提純的PVY病毒，由西北農(nóng)林科技大學(xué)旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室分離保存，于接種前30 d左右在健康的心葉煙上繁殖備用。制備病毒接種液時，取1 g PVY感病葉片，加少量石英砂，于10 mL PBS 溶液中研磨成勻漿，紗布過濾，無菌水稀釋至100 mL備用。

供試藥劑：1.1%云芝葡聚糖水劑，西北農(nóng)林科技大學(xué)旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室制備；0.5%香菇多糖水劑，北京燕化永樂農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)；5.5%氨基寡糖素水劑，由西大華特科技實業(yè)公司生產(chǎn)。

1.2 方 法

1.2.1 云芝葡聚糖的提取 用6 mm打孔器取已培養(yǎng)7 d的云芝菌餅，放入裝有100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基[16]的三角瓶中，每瓶放入3個菌餅，于28 ℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)7～10 d，待外觀菌球多、菌液厚時停止培養(yǎng)，于10 000 r/min離心8 min，獲得菌絲體和上清液；將菌絲體洗滌2次，采用酶、超聲波聯(lián)用方法[17]提取胞內(nèi)糖肽,過濾得濾液；再將濾液與上清液合并，減壓濃縮至原體積的1/5，加入4倍體積體積分?jǐn)?shù)95%乙醇，4 ℃下靜置12 h，離心獲沉淀物，干燥得云芝葡聚糖[18]。向蒸餾水中加入云芝葡聚糖、表面活性劑烷基糖苷，攪拌至原藥完全溶解后加入防分解劑1，2-丁二醇、防凍劑甘油，再次攪拌混合均勻，即得1.1%云芝葡聚糖水劑，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2 云芝葡聚糖對PVY的預(yù)防作用 采用枯斑法測定云芝葡聚糖對PVY的預(yù)防作用。選取長勢一致的莧色藜，將配制好的100，200，300，500和700 μg/mL云芝葡聚糖溶液先涂抹在葉片上，24 h后立即將禁食4 h的煙蚜轉(zhuǎn)移到PVY的毒源植物心葉煙上飼毒3～5 min，然后轉(zhuǎn)移至涂抹過云芝葡聚糖的莧色藜葉片上進(jìn)行2 h傳毒試驗，每植株接蟲10頭，以噴清水為對照。于溫室中培養(yǎng)，每處理5株，重復(fù)3次。接毒3～4 d后統(tǒng)計枯斑數(shù)，計算抑制率。抑制率=(對照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù))/對照枯斑數(shù)×100%。

1.2.3 云芝葡聚糖對PVY的鈍化作用 采用半葉枯斑法[19]測定云芝葡聚糖對PVY的體外鈍化作用。選取長勢一致的莧色藜，將配制好的100，200，300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖溶液分別與PVY接種液等體積混合鈍化15 min[20]，然后用半葉法[19]摩擦接種到莧色藜的左半葉上，右半葉接種PVY接種液作為對照。于溫室中培養(yǎng)，每處理5片葉，重復(fù)3次。接毒3～4 d后統(tǒng)計枯斑數(shù)，計算抑制率。抑制率=(對照半葉枯斑數(shù)-處理半葉枯斑數(shù))/對照半葉枯斑數(shù)×100%。

1.2.4 云芝葡聚糖對PVY的誘導(dǎo)抗性 采用枯斑法[19]測定云芝葡聚糖的誘導(dǎo)抗性。選取長勢一致的莧色藜，將配制好的300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖溶液先涂抹在植株下部葉片上，48 h后于上部葉片摩擦接種PVY，對照株下部葉清水處理48 h后于上部葉片接種PVY。于溫室中培養(yǎng)，每處理5株，重復(fù)3次，接毒3～4 d后統(tǒng)計枯斑數(shù)，計算枯斑抑制率，以觀察云芝葡聚糖的誘導(dǎo)抗性。抑制率=(對照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù))/對照枯斑數(shù)×100%。

1.2.5 云芝葡聚糖對PVY的抑制增殖作用 采用葉圓片法[21]測定云芝葡聚糖對PVY的抑制增殖作用。選取長勢一致的心葉煙接種PVY，6 h后從接種葉上打孔取直徑12 mm的圓片，分別漂浮于300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖溶液、0.5%香菇多糖水劑200倍液、5.5%氨基寡糖素水劑500倍液中，以漂浮于蒸餾水中的葉圓片為陽性對照(CK1)，以不接種PVY的葉圓片為陰性對照(CK2)。每處理10個圓片，重復(fù)3次[21]。48 h后將葉圓片用0.1 g/mL 磷酸鹽緩沖液研磨后離心，上清液采用間接ELISA法檢測其OD405值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到PVY質(zhì)量濃度(x)與OD405值(y)的回歸方程為：y=0.882 4x-1.527 4，根據(jù)PVY質(zhì)量濃度計算抑制率,抑制率=(陽性對照PVY質(zhì)量濃度-處理PVY質(zhì)量濃度)/陽性對照PVY質(zhì)量濃度×100%。

1.2.6 云芝葡聚糖處理后煙草防御酶活性的變化 (1)處理、取樣。選取6～7葉期的健康心葉煙作以下4種處理：①于植株葉片上涂抹500 μg/mL的云芝葡聚糖，24 h后不接種病毒；②植株葉片上涂抹500 μg/mL云芝葡聚糖，24 h后接種PVY；③植株葉片上噴清水，24 h后接種PVY；④僅清水噴霧(對照)。處理后將煙草置于室溫25～28 ℃下生長。每處理在接種后每隔24 h取樣1次，共取5次，用于各項生理指標(biāo)測定。3次重復(fù)。

(2)酶活力測定。取各處理葉圓片2 g冰浴研磨至勻漿，4 ℃、5 000 r/min離心20 min，上清液即為 POD、PAL的提取液,其中POD用10 mL 4 ℃預(yù)冷的0.05 mol/L pH 7.0的磷酸緩沖液提取，PAL用2 mL 4 ℃預(yù)冷的0.05 mol/L pH 8.8的硼酸緩沖液提取[11]。POD活性測定采用愈創(chuàng)木酚法[22]， PAL活性測定采用Koukol等[23]的方法。

1.2.7 室內(nèi)盆栽防效試驗 試驗設(shè)1.1%云芝葡聚糖水劑300倍液、500倍液、700倍液3個梯度，以5.5%氨基寡糖素水劑500倍液、0.5%香菇多糖水劑200倍液為對照藥劑。選取長勢一致的心葉煙，分別進(jìn)行預(yù)防處理(最后一次施藥后24 h接毒)、治療處理(接毒24 h后施藥3次)，以只接種不施藥為對照[24]。每4 d施藥1次，連續(xù)施藥3次，每處理10株煙苗，重復(fù)3次，采用蚜蟲接毒。于接種后14 d以株為單位進(jìn)行病情調(diào)查，計算病情指數(shù)及相對防效。

病情指數(shù)=∑(各級病株數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總株數(shù)×最高分級數(shù))×100。

防治效果=(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/ 對照病情指數(shù)×100%。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行處理，采用Duncan’s多重比較法進(jìn)行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 云芝葡聚糖對PVY的預(yù)防作用

由表1可以看出，100，200，300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖對PVY的預(yù)防效果分別為 61.78%，60.16%，69.11%，72.36%，73.98%，處理后莧色藜葉片枯斑數(shù)較對照大幅度減少。說明提前施用云芝葡聚糖對PVY有很強的預(yù)防作用，且預(yù)防效果與葡聚糖溶液質(zhì)量濃度呈明顯的正相關(guān)性。

2.2 云芝葡聚糖對PVY的體外鈍化作用

表1表明，100，200，300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖對PVY進(jìn)行鈍化處理后，抑制率分別為0，7.25%，5.56%，26.98%，28.79%。鈍化作用差異顯著性分析結(jié)果顯示，云芝葡聚糖的鈍化處理對PVY的抑制效果不顯著，但隨著云芝葡聚糖質(zhì)量濃度的增加，鈍化效果逐漸提高。

注：枯斑數(shù)、半葉枯斑數(shù)試驗數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的平均值。表2,3同。

Note:Data of the leaf and the semi-leaf blight spots are the mean of three replicates.The same for table 2 and table 3.

2.3 云芝葡聚糖對PVY的誘導(dǎo)抗性

不同質(zhì)量濃度云芝葡聚糖對PVY的誘導(dǎo)抗性見表2。

表2表明，300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖處理對PVY的抑制率分別為45.90%，56.56%，59.84%。說明云芝葡聚糖能誘導(dǎo)莧色藜植株對PVY產(chǎn)生抗性，效果非常顯著，且隨云芝葡聚糖質(zhì)量濃度的增加，對PVY抗性明顯提高。

2.4 云芝葡聚糖對PVY的抑制增殖作用

表3表明，300，500，700 μg/mL云芝葡聚糖對PVY增殖的抑制率分別為34.00%，32.47%，40.25%，高于對照藥劑0.5%香菇多糖水劑200倍液、5.5%氨基寡糖素水劑500倍液。說明云芝葡聚糖對PVY的增殖有一定的抑制作用，低質(zhì)量濃度云芝葡聚糖的抑制效果并不明顯，增殖抑制率與葡聚糖質(zhì)量濃度呈明顯的正相關(guān)性。

2.5 云芝葡聚糖對煙草防御酶活性的影響

2.5.1 煙草葉片POD活性 由圖1可以看出，云芝葡聚糖誘導(dǎo)處理后，激發(fā)和誘導(dǎo)煙草體內(nèi)POD活性升高，而對照POD活性變化不明顯。云芝葡聚糖處理后接種PVY的葉片POD活性在接種后第3天達(dá)到最高值，是此時對照的2.67倍，且高于其他處理。涂抹云芝葡聚糖處理以及噴清水后接種PVY處理的葉片POD活性在接種后第3天達(dá)到最高值，且云芝葡聚糖處理>噴清水后接種PVY處理，分別為第3天對照的2.41倍和1.62倍，隨后POD活性有不同程度的下降。至接種后第5天各處理葉片的POD活性仍高于對照。

2.5.2 煙草葉片PAL活性 由圖2可以看出，除了對照，其余處理煙葉PAL活性變化顯著，均呈先上升后下降的趨勢，且明顯高于對照。涂抹云芝葡聚糖后接種PVY處理的PAL活性上升速度最快，其次是涂抹云芝葡聚糖處理，分別于處理后第4天、第3天達(dá)到最高值；噴清水后接種PVY處理的PAL活性變化相對較小，其峰值明顯低于涂抹云芝葡聚糖處理和涂抹葡聚糖后接種PVY處理。表明云芝葡聚糖可誘導(dǎo)煙草葉片PAL活性的提高。

圖1 云芝葡聚糖處理后煙草葉片POD活性的變化
-◆-.云芝葡聚糖處理；-■-.對照處理；-▲-.云芝葡聚糖處理后接種PVY；-●-.清水處理后接種PVY
Fig.1 Change of POD activity afterTrametesversicolorpolysaccharides treatment
-◆-.Trametes versicolor polysaccharides treatment;-■-.Contrast;-▲-.Inoculating PVY after smearing polysaccharides;-●-.Inoculating PVY after spraying fresh water

圖2 云芝葡聚糖處理后煙草葉片PAL活性的變化
-◆-.云芝葡聚糖處理；-■-.對照處理；
-▲-.云芝葡聚糖處理后接種PVY；-●-.清水處理后接種PVY
Fig.2 Change of PAL activity afterTrametesversicolorpolysaccharides treatment
-◆-.Trametes versicolor polysaccharides treatment;-■-.Contrast;-▲-.Inoculating PVY after smearing polysaccharides;-●-.Inoculating PVY after spraying fresh water

2.6 云芝葡聚糖對PVY的室內(nèi)盆栽防治效果

表4表明，1.1%云芝葡聚糖水劑300倍液、500倍液、700倍液的保護(hù)效果分別為73.33%，62.85%，44.12%，治療效果分別為38.46%，36.53%，26.70%。在保護(hù)作用中，云芝葡聚糖300倍液的防治效果最高，顯著高于2種對照藥劑，云芝葡聚糖500倍液防治效果與2種對照藥劑差異不顯著，云芝葡聚糧700倍液防治效果顯著低于2種對照藥劑。經(jīng)云芝葡聚糖處理后的植株煙葉濃綠光滑，長勢健壯，株高、葉片面積、莖圍都明顯高于對照。說明云芝葡聚糖不僅對寄主有很好的保護(hù)、治療作用，保護(hù)效果較治療效果好，而且能促進(jìn)植株生長。

注:表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母者表示各處理差異顯著(P<0.05)。

Note 4:Data are the “mean±SD” of three replicates.Different lowercase letters mean significantly difference (P<0.05).

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，云芝葡聚糖對PVY具有很好的預(yù)防作用，700 μg/mL云芝葡聚糖的預(yù)防效果可達(dá)73.98%；云芝葡聚糖能誘導(dǎo)植株對PVY產(chǎn)生很高的誘導(dǎo)抗性，700 μg/mL云芝葡聚糖處理的誘導(dǎo)抗性效果可達(dá)59.84%；云芝葡聚糖也有一定的鈍化和增殖抑制作用，但作用相對較低；云芝葡聚糖處理能提高煙草葉片防御酶活性；室內(nèi)盆栽試驗結(jié)果表明，1.1%云芝葡聚糖水劑對PVY寄主表現(xiàn)出很強的保護(hù)作用，其300倍液的保護(hù)效果可達(dá) 73.33%，且經(jīng)云芝葡聚糖處理后的煙苗生長健壯整齊，表現(xiàn)出較強的促生作用。因此，云芝葡聚糖作為一種免疫增強劑，在植物病毒病防治上具有較好的研究價值和應(yīng)用前景。

在植株接種病毒前經(jīng)云芝葡聚糖處理，可以封鎖植物病毒的侵染位點，使病毒失去與細(xì)胞微傷口感受點結(jié)合的能力，因而使病毒的侵入能力被降低或過程被阻止[25]。多糖對病毒在寄主體內(nèi)的增殖有一定的抑制作用。Grasso等[26]研究認(rèn)為，噴灑天然抑制劑后，使寄主核糖體上的病毒蛋白合成受阻，病毒不能復(fù)制。同時，葡聚糖可以作為激發(fā)子誘導(dǎo)活性氧的釋放和植保素的合成，活性氧的誘導(dǎo)產(chǎn)生是一類早期的抗病反應(yīng)，它們能直接攻擊病原，從而達(dá)到抑制病毒作用[7]。因此推測認(rèn)為，云芝葡聚糖通過激活植株免疫防御反應(yīng)調(diào)控植物生長，使寄主植株產(chǎn)生誘導(dǎo)抗性，以提高防御酶的活性，在激活主動防御反應(yīng)中起著重要的作用。

由于云芝葡聚糖具有抗病毒活性、免疫增強作用，高效、沒有細(xì)胞毒性，應(yīng)用于生物體毒副作用小，提取也較容易，將其開發(fā)為生物農(nóng)藥產(chǎn)品具有重要的市場價值。但目前有關(guān)云芝葡聚糖對農(nóng)業(yè)病害防治研究甚少，積累的資料也很貧乏，還有待于對植物病毒病防治研究的加強，并更深一步地了解其抗病毒機理。

[1] 張俊祺，代昌明，楊 軍，等.馬鈴薯Y病毒貴州黔西煙草分離物P1基因序列分析 [J].植物病理學(xué)報，2012,42(1):88-92.

Zhang J Q,Dai C M,Yang J,et al.Sequence analysis ofP1 gene of PVY tobacco isolate from Qianxi,Guizhou [J].Acta Phytopathologica Sinica,2012,42(1):88-92.(in Chinese)

[2] 高正良.煙草馬鈴薯Y病毒病(PVY)的研究現(xiàn)狀與防治對策 [J].安徽農(nóng)學(xué)通報，2003,9(5):75-77.

Gao Z L.The present research situation and control measures of tobacco potato Y virus disease (PVY) [J].Anhui Agricultural Science Bulletin,2003,9(5):75-77.(in Chinese)

[3] 余春英，張西仲，王定福，等.黔南煙區(qū)煙草馬鈴薯Y病毒病發(fā)病原因及防治措施 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010,38(10):5110-5112.

Yu C Y,Zhang X Z,Wang D F,et al.Causes and prevention measures of tobacco potato Y virus disease in Qiannan tobacco-growing areas [J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2010,38(10):5110-5112.(in Chinese)

[4] 鄭 炯，張甫生，黃明發(fā).云芝多糖生物活性及其提取純化研究進(jìn)展 [J].糧食與油脂，2007(2):44-46.

Zheng J,Zhang F S,Huang M F.Research advances in bioactivities and extraction,purification of coriolus versicolor polysaccharides [J].Cereals & Oils,2007(2):44-46.(in Chinese)

[5] 王先彬，王啟燕.香菇培養(yǎng)物水浸液對煙草花葉病毒(TMV)浸染心葉煙的抑制作用 [J].微生物學(xué)報，1986,26(4):363-365.

Wang X B,Wang Q Y.The inhibition of tobacco mosaic virus (TMY) by Xianggu mushroom culture infution [J].Acta Microbiologica Sinica,1986,26(4):363-365.(in Chinese)

[6] 陳 順，席海生，馮 華，等.香菇菌多糖防治由病毒引起馬鈴薯退化的試驗研究 [J].微生物學(xué)雜志，1998,18(2):39-40.

Chen S,Xi H S,Feng H,et al.The prevention research ofLentinulaedodespolysaccharide on potato degeneration caused by virus [J].Journal of Microbiology,1998,18(2):39-40.(in Chinese)

[7] 張 超，操海群，陳 莉，等.食用菌多糖對植物病毒抑制作用的初步研究 [J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005,32(1):15-18.

Zhang C,Cao H Q,Chen L,et al.Preliminary study on the inhibition of polysaccharide of edible fungi to plant virus [J].Journal of Anhui Agricultural University,2005,32(1):15-18.(in Chinese)

[8] 李 丹，趙文紅，孔寶華，等.云南大型真菌提取物及其多糖組分對TMV的抑制作用 [J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009,24(2):175-180.

Li D,Zhao W H,Kong B H,et al.Inhibition effect of Yunnan macrofungi extracts and its polysaccharides on TMV [J].Journal of Yunnan Agricultural University,2009,24(2):175-180.(in Chinese)

[9] 沈小英，牛小義，段軍娜，等.多糖對煙草花葉病毒(TMV)的抑制作用研究 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2012,40(12):115-120,126.

Shen X Y,Niu X Y,Duan J N,et al.Inhibition of polysaccharides on tobacco mosaic virus [J].Journal of Northwest A&F University：Natural Science Edition,2012,40(12):115-120,126.(in Chinese)

[10] Burkhanova G F,Yarullina L G,Maksimov I.The control of wheat defense responses during infection withBipolarissorokinianaby chitooli go-saccharides [J].Russion Journal of Plant Physiology,2007,54(1):104-110.

[11] 許玉娟，范素素，齊文靜，等.蒼耳多糖對煙草花葉病毒的抑制作用及對煙草幾種防御酶活性的影響 [J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2010,41(4):485-488.

Xu Y J,Fan S S,Qi W J,et al.The inhibition effect of polysaccharides ofXanthiumsibiricumon tobacco mosaic virus and the influence on the defense enzymes activities of tobacco [J].Journal of Shandong Agricultural University：Natural Science Edition,2010,41(4):485-488.(in Chinese)

[12] Chakraborty M，Karun A，Mitra A.Accumulation of phenylpropanoid derivatives in chitosan-induced cell suspension culture of cocosnucifera [J].Journal of Plant Physiology,2009,166(1):63-71.

[13] 吳艷兵，謝荔巖，謝聯(lián)輝，等.毛頭鬼傘多糖抗煙草花葉病毒(TMV)活性研究初報 [J].中國農(nóng)學(xué)通報，2007,23(5):338-341.

Wu Y B,Xie L Y,Xie L H,et al.A preliminary study on anti-TMV activity of polysaccharide fromCoprinuscomatus[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2007,23(5):338-341.(in Chinese)

[14] 黃金光，李懷方，宋愛榮.樹舌MP-01菌株提取液抑制TMV生物活性研究 [J].中國煙草科學(xué)，2007,28(2):47-48.

Huang J G,Li H F,Song A R.Studies on the TMV biological activity of the MP-01 extracts [J].Chinese Tobacco Science,2007,28(2):47-48.(in Chinese)

[15] 王 杰，王開運，張 騫，等.海帶多糖對煙草花葉病毒的抑制作用及其對煙草酶活性的影響 [J].植物保護(hù)學(xué)報，2011,38(6):532-538.

Wang J,Wang K Y,Zhang Q,et al.Inhibition of laminarin against TMV and effect on protective enzymes in tobacco [J].Acta Phytophylacica Sinica,2011,38(6):532-538.(in Chinese)

[16] 馬海燕，郭成金.云芝菌絲體液體培養(yǎng)基的篩選 [J].中國食用菌，2007,26(4):34-36.

Ma H Y,Guo C J.Selection of liquid culture medium on mycelium ofCoriolusversicolor[J].Edible Fungi of China,2007,26(4):34-36.(in Chinese)

[17] 汪 潔，全衛(wèi)豐，劉廣建，等.云芝多糖提取工藝的研究比較 [J].食用菌，2010(3):69-71.

Wang J,Quan W F,Liu G J,et al.Research in comparing various extraction processes ofTrametesversicolorpolysaccharide [J].Edible Fungi,2010(3):69-71.(in Chinese)

[18] 李巧云，居紅芳，翟 春.五味子粗多糖提取工藝的研究 [J].食品科學(xué)，2004,25(5):105-109.

Li Q Y,Ju H F,Zhai C.Study on the extraction technology of polysaccharide fromSchisandra[J].Food Science，2004,25(5):105-109.(in Chinese)

[19] 田 波，裴美云.植物病毒研究方法:上冊 [M].北京：科學(xué)出版社,1987：281-285.

Tian B,Pei M Y.Research techniche of plant virus [M].Beijing:Science Press，1987：281-285.(in Chinese)

[20] 張 興，韓立榮，周大偉，等.放線菌ZX01菌株發(fā)酵產(chǎn)物抗TMV活性的初步研究 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2012,40(1):66-70.

Zhang X,Han L R,Zhou D W,et al.Anti TMV activity of the fermentation product of actinomycetes strain ZX01 [J].Journal of Northwest A&F University：Natural Science Edition,2012,40(1):66-70.(in Chinese)

[21] 沈建國，張正坤，吳祖建，等.臭椿和鴉膽子抗煙草花葉病毒作用研究 [J].中國中藥雜志，2007,32(1):27-29.

Shen J G,Zhang Z K,Wu Z J,et al.Antiviral effect ofAilanthusaltissimaandBruceajavanicaon tobacco mosaic virus [J].China Journal of Chinese Materia Medica,2007,32(1):27-29.(in Chinese)

[22] Lamb C J,Rubery P H.Phenylalanine armmonia-lyase and cinnamic acid 4-hydroxylase:Produce repression of the level of enzyme activity in potato tuber discs [J].Planta,1976,130:283-290.

[23] Koukol J，Conn E E. The metabolism of aromatic compounds in higher plans.Ⅳ:Purification and properties of the phenylalanine deaminase ofHordeumvulgare[J].The Journal of Biological Chemistry,1961,236(10):2692-2698.

[24] 王海鵬，馬志卿，何 軍，等.植物源農(nóng)藥VFB抗煙草花葉病毒(TMV)活性初步研究 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2008,36(3):176-180,186.

Wang H P,Ma Z Q,He J,et al.Primary study on anti-TMV activity of botanical-derivated VFB [J].Journal of Northwest A&F University：Natural Science Edition,2008,36(3):176-180,186.(in Chinese)

[25] 王 杰，王開運.香菇多糖對植物真菌和病毒病害的抗病機理 [J].農(nóng)藥，2011,50(1):16-19.

Wang J,Wang K Y. Disccusion on the mechnism of resistance of the polysaccharide ofLentinusedodesagainst pathogenic bacteria and virus of plant [J].Agrochemicals,2011,50(1):16-19.(in Chinese)

[26] Grasso S,Sheperd R J.Isolation and partial characterization of virus inhibitors from plant species taxonomically related to phytolacca,phytopathology [J].Phytopath,1978,93:199-205.

Resistance ofTrametesversicolorpolysaccharides against potato virus Y

ZHANG Xin1,DUAN Jun-na1,ZHAI Feng1,LUO Jing1, CHENG Ju-long2,AN Tian-ci1,AN De-rong1

(1StateKeyLaboratoryofCropStressBiologyforAridAreas,CollegeofPlantProtection,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China;2ShaanxiTobaccoResearchInstituteofChinaNationalTobaccoCorp,Xi’an,Shaanxi710002,China)

【Objective】 To provide basis for development and application of new fungicide-Trametesversicolorpolysaccharides AS,the inhibition ofTrametesversicolorpolysaccharides against PVY was studied.【Method】 Using Chenopodium amaranticolor andNicotianaglutinosaas materials,the anti-PVY activity ofTrametesversicolorpolysaccharides was detected by half-leaf method,leaf-discs method,and potted plant method,and the inducible resistance and effects on activity of defensive enzymes POD and PAL were determined.【Result】 It was confirmed that polysaccharides had strong preventive effect and induced resistance against PVY,and the preventive effect and induced resistance of 700 μg/mLTrametesversicolorpolysaccharides were 73.98% and 59.84%,respectively.Polysaccharides also had inactivating and multiplication inhibiting effects against PVY,and the inactivation effect and multiplication inhibition rate of 700 μg/mLTrametesversicolorpolysaccharides were 28.79% and 40.25%,respectively.Treated by polysaccharides also increased the activity of tobacco POD and PAL.The potted experiment showed thatTrametesversicolorpolysaccharides had strong protective activity to PVY host,which was better than treatment effect.14 days after inoculating PVY,the protective effect and therapeutic effect of 300 times diluent of polysaccharides were 73.33%,and 38.46%,respectively.【Conclusion】 Trametes versicolor polysaccharides were an type of immunopotentiator.They had a strong inhibitory action against PVY and application in advance could achieve better protection effect.

Trametesversicolorpolysaccharides;potato virus Y;inhibitory effect;the activity of defensive enzyme

2013-11-01

教育部高等學(xué)校學(xué)科創(chuàng)新引智計劃項目(B07049)；國家煙草專賣局項目“新型生物殺菌劑真菌多糖在煙草病害防治中的研究和應(yīng)用”(110201002024)；國家煙草專賣局煙草有害生物調(diào)查和防治研究項目(KJ-2010-14)

張 鑫(1988-)，女，山東菏澤人，在讀碩士，主要從事微生物資源利用研究。E-mail:zhangxin.fendou@163.com

安德榮(1963-)，男，陜西大荔人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事微生物資源利用和植物病理學(xué)研究。 E-mail：anderong323@163.com

時間:2015-01-05 08:59

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.02.025

S435.32

A

1671-9387(2015)02-0191-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150105.0859.025.html