骨肉瘤相關(guān)細(xì)胞因子水平的診斷與測定

謝興文，徐世紅，李 晶，許 偉，李鼎鵬

1甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅省中醫(yī)院

骨肉瘤相關(guān)細(xì)胞因子水平的診斷與測定

謝興文1，2，徐世紅2，李 晶1，2，許 偉2，李鼎鵬1，2

1甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅省中醫(yī)院

通過分析近年來骨肉瘤診治相關(guān)文獻(xiàn)，就骨肉瘤相關(guān)細(xì)胞因子診療進(jìn)展進(jìn)行綜述，旨在為臨床及相關(guān)科學(xué)研究提供一定的借鑒和指導(dǎo)作用。

骨肉瘤；細(xì)胞因子；診療；綜述

骨肉瘤占原發(fā)惡性骨腫瘤的20%，是青少年最常見的原發(fā)惡性骨腫瘤，70%～80%的患者發(fā)病年齡在10～25歲，年發(fā)病率約為(1～3)/100萬人［1］。腫瘤壞死率的診斷與測定是目前判定該類患者預(yù)后的一個(gè)最直接也最科學(xué)的指標(biāo)，但是腫瘤壞死率的測定過程相對(duì)比較復(fù)雜，部分患者對(duì)新輔助化療反應(yīng)差，在接受新輔助化療階段早已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，如何在早期有效的預(yù)測骨肉瘤患者的預(yù)后成為一個(gè)亟待解決的問題，骨肉瘤分子標(biāo)志物的檢測是預(yù)測骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移及預(yù)后的一個(gè)潛在的有效方法。

1 C D基因

相關(guān)研究［2-4］已證實(shí)CD133作為一種腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志，存在于神經(jīng)腫瘤、結(jié)腸癌、肝癌、黑色素瘤等腫瘤組織中。CD44與腫瘤的相關(guān)性于1991年由德國研究人員確認(rèn)，它的表達(dá)具有組織特異性，不同的CD44分子在腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移過程中的作用是不同的，正常組織細(xì)胞或非轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞主要表達(dá)CD44s，而具有轉(zhuǎn)移能力的癌細(xì)胞主要表達(dá)CD44v［5］。何愛娜等［6］通過免疫組化方法檢測79例骨肉瘤患者的石蠟切片標(biāo)本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者其CD133和CD44的表達(dá)明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.00014和0.0008)。多因素分析顯示CD133和CD44表達(dá)水平是影響患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。因此我們可以確定CD133和CD44表達(dá)水平與骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時(shí)檢測CD133和CD44的表達(dá)可以作為骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移及預(yù)后預(yù)測的指標(biāo)。

2 受體基因

惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多步驟的復(fù)雜過程，受許多基因的共同調(diào)控［7］。目前趨化因子的受體在腫瘤疾病過程中的作用得到了廣泛的關(guān)注和研究。近年來，相關(guān)研究［8］表明，腫瘤細(xì)胞表面亦可表達(dá)趨化因子受體。這類受體和靶器官表達(dá)的趨化因子則決定了腫瘤的發(fā)病、侵襲及轉(zhuǎn)移等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其中則包括CXCR4。有研究結(jié)果表明，CXCR4與骨肉瘤的發(fā)生可能也具有密切關(guān)系［9］。呂南千等［10］通過Real-time PCR檢測人骨肉瘤細(xì)胞株HOS-8603、U2OS和MG-63中CXCR4 mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果表明，在不同分化程度的骨肉瘤細(xì)胞中，CXCR4 mRNA均有所表達(dá)，但表達(dá)水平存在較大差異，其中在低分化骨肉瘤細(xì)胞MG-63中表達(dá)量相對(duì)較高，在中分化骨肉瘤細(xì)胞U2OS中表達(dá)量相對(duì)較低，而在高分化的骨肉瘤細(xì)

3 microRNA基因

microRNA是內(nèi)源性的、進(jìn)化上高度保守的、長約為18～25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA小分子，廣泛存在于真核細(xì)胞中，是基因表達(dá)的重要調(diào)節(jié)分子，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，其中則包括著腫瘤的發(fā)生與演進(jìn)。Murakami等［11］首次研究發(fā)現(xiàn)miR-93在肝癌組織中呈過高表達(dá)。同時(shí)最近又有研究發(fā)現(xiàn)miR-93通過調(diào)控integrin-β8而參與調(diào)節(jié)腫瘤的生長［12］。何敏等［13］通過TagManMGB探針法定量分析38例骨肉瘤組織及對(duì)應(yīng)的骨組織中的miR-93的表達(dá)，結(jié)果表明在所有的骨肉瘤組織標(biāo)本中65.8%的骨肉瘤組織中miR-93表達(dá)明顯的高于對(duì)應(yīng)的軟骨組織(P＜0.05)。人類miR-143在結(jié)構(gòu)上與其他miR一樣，均不編碼蛋白，不含開放閱讀框。位于人類第5號(hào)染色體。該基因在骨肉瘤中表達(dá)反成明顯降低趨勢［14］，但相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)在不同細(xì)胞株中具有并不完全一致的作用，在MG63和U2OS細(xì)胞中，通過靶基因Bcl-2促進(jìn)凋亡、抑制增殖和腫瘤形成；而在143B骨肉瘤細(xì)胞中，miR-143僅可抑制細(xì)胞遷移但不影響其增殖［15］。通過上述研究則不難發(fā)現(xiàn)，miR-143與骨肉瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

4 Runx基因

Runx3是一種抑癌基因，基因序列高度保守，對(duì)細(xì)胞的生長發(fā)育過程發(fā)揮重要調(diào)控作用［16］。與腫瘤的發(fā)展也有著緊密聯(lián)系，作為一個(gè)抑癌基因，其抑癌的機(jī)制尚不十分清楚［17］。相關(guān)研究［18］則表明Runx3對(duì)消化道上皮細(xì)胞的生長具有重要的調(diào)控作用，能抵抗TGF-β誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制和細(xì)胞凋亡，從而調(diào)控上皮細(xì)胞的分化過程。而當(dāng)Runx3失活時(shí)，影響TGF-β凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)，阻滯正常的凋亡過程，正常細(xì)胞的增殖不受限制，出現(xiàn)細(xì)胞惡變。吳同申等［19］通過流式細(xì)胞術(shù)檢測86例骨肉瘤組織(觀察組)及40例良性腫瘤組織(對(duì)照組)中Runx3的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Runx3觀察組明顯低于對(duì)照組，這就提示了Runx3表達(dá)丟失在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中起著重要的作用。近年來骨肉瘤的治療采用了手術(shù)聯(lián)合化療的多手段綜合治療，患者的預(yù)后有了明顯的改善，但5年總生存率仍只有60%［20］。近半數(shù)的骨肉瘤患者最終死于腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移［21］。Runx2是在骨母細(xì)胞分化和骨形成中起重要作用的基因，為骨母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，在骨母細(xì)胞的發(fā)育、分化和骨形成過程中起著關(guān)鍵的作用［22］。閔大六等［23］通過免疫組化方法檢測82例骨肉瘤活檢樣本石蠟組織中Runx2基因的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示其陽性表達(dá)率為65.9%，且陽性表達(dá)與患者的性別、部位、年齡等均無相關(guān)性，但與肺轉(zhuǎn)移相關(guān)，表現(xiàn)為肺轉(zhuǎn)移患者Runx2陽性表達(dá)率為100.0%，明顯高于無肺轉(zhuǎn)移患者(P＜0.05)，其陽性表達(dá)者的中位生存時(shí)間顯著短于陰性表達(dá)者。同時(shí)Won等的研究在一組48例骨肉瘤樣本中也顯示Runx2的高表達(dá)和骨肉瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)［24］。因此我們可以將Runx2蛋白表達(dá)水平作為骨肉瘤的預(yù)后因子，從而起到指導(dǎo)臨床預(yù)后的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)。

5 VEGF因子

腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移與其新生血管的生成緊密相關(guān)，同時(shí)也為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲提供了豐富的渠道。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前公認(rèn)的一種特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能細(xì)胞因子，主要具備誘導(dǎo)血管生成，是目前已知促血管生成作用最強(qiáng)的因子。張黎明［25］通過RT-PCR和免疫組織化學(xué)法SP法檢測58例骨肉瘤患者組織中的VEGF含量，與35例骨軟骨瘤組織進(jìn)行對(duì)比研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VEGF因子在骨肉瘤組織中的陽性率和表達(dá)水平顯著高于骨軟骨瘤組織，而且與腫瘤組織浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，同時(shí)VEGF表達(dá)陽性的骨肉瘤患者與表達(dá)陰性者相比生存率明顯降低，平均生存時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)。李廣偉［26］采用免疫組織化學(xué)SABC檢測102例骨肉瘤組織和50例正常骨組織中VEGF的表達(dá)水平，并結(jié)合臨床與病理特征進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示該因子在病理組織中的表達(dá)明顯高于正常組織(P＜0.05)，VEGF的高表達(dá)與該類患者的肺轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性(P＜0.05)。通過上述研究不難發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮生長因子以其調(diào)控新生血管的豐富和調(diào)控相關(guān)基因編碼的基因功能，促使骨肉瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移。

6 小結(jié)

骨肉瘤多發(fā)生于兒童和青少年，嚴(yán)重威脅患者的健康和生命，是家庭和社會(huì)的災(zāi)難。因此盡快提高骨肉瘤診療水平，是一項(xiàng)迫切的任務(wù)。該疾病起病時(shí)常無典型的臨床癥狀，所以有極大可能發(fā)生轉(zhuǎn)移，使得患者的生存率大大降低，所以早期診斷，將極大地提高患者的生存質(zhì)量并延長其壽命。上述各類蛋白基因在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展過程中均

Progress in the Treatment and Diagnosis of Related Cytokines of Osteosarcoma

XIE Xingwen1，2,XU Shihong2,LI Jing1，2,XU Wei2,LI Dingpeng1，2
1 Department of Bone Tumor and Bone Fracture Institute of Gansu Provincial Hospital of Chinese Medicine, Lanzhou 730050,China；2 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

By analyzing the related literature in recent years,the progress of the diagnosis and treatment of related cytokines of osteosarcoma are reviewed,in order to provide reference and guidance for clinical and scientific studies.

osteosarcoma;cytokines;diagnosis and treatment;review

胞HOS-8603中的表達(dá)量最低。

R730.4

A

1004-6852(2015)10-0147-03