不同藥劑對蘋果霉心病和心腐病菌室內抑菌效果評價

黨繼玲，馬志超，張 榮，郭云忠，朱明旗，孫廣宇

(西北農林科技大學 旱區(qū)作物逆境生物學國家重點實驗室 植物保護學院，陜西 楊凌712100)

不同藥劑對蘋果霉心病和心腐病菌室內抑菌效果評價

黨繼玲，馬志超，張 榮，郭云忠，朱明旗，孫廣宇

(西北農林科技大學 旱區(qū)作物逆境生物學國家重點實驗室 植物保護學院，陜西 楊凌712100)

【目的】 篩選防治蘋果果實主要病害的蘋果霉心病和心腐病的有效藥劑。【方法】 選擇3%多抗霉素、1.5%噻霉酮、4%農抗120和25%氰烯菊酯4種藥劑，采用菌絲生長速率法，對引起蘋果果實霉心病和心腐病的主要病原菌進行室內抑菌活性測定?！窘Y果】 120 μg/mL 3%多抗霉素對鏈格孢、樹狀鏈格孢、細極鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢的抑制效果較好，抑制率均達到90%以上，而對復合侵染致病的細極枝孢、層出鐮刀菌和團聚莖點霉的抑制效果不佳。300 μg/mL 1.5%噻霉酮對鏈格孢、樹狀鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢的抑制效果較明顯，抑制率均可達90%以上，而對細極鏈格孢、細極枝孢、層出鐮刀菌和團聚莖點霉的抑制效果不佳。400 μg/mL 4%農抗120僅對粉紅聚端孢表現(xiàn)出較高的抑制活性，抑制率為94.2%。多抗霉素在推薦使用質量濃度30 μg/mL時對鏈格孢、樹狀鏈格孢、細極鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢的抑制率可達80%以上，對層出鐮刀菌幾乎無抑制效果。在推薦使用質量濃度37.5 μg/mL時，噻霉酮對枝狀枝孢和粉紅聚端孢菌絲生長的抑制率在70%以上。在田間推薦使用質量濃度200 μg/mL時，農抗120僅對粉紅聚端孢表現(xiàn)較好的抑制效果，抑制率為88.2%。氰烯菊酯對木賊鐮刀菌、層出鐮刀菌、禾谷鐮刀菌和三線鐮刀菌均有良好的抑制效果，對前3種病原菌的EC50均小于0.1 μg/mL，對三線鐮刀菌的EC50為0.227 7 μg/mL?！窘Y論】 多抗霉素、農抗120、噻霉酮及氰烯菊酯對蘋果霉心病與心腐病的主要病原菌分別有不同的抑制效果，可通過混合或間隔施用對該類病害進行有效防治。

蘋果霉心病；蘋果心腐??；病原多樣性；室內抑菌活性

蘋果心室的發(fā)霉和腐爛為蘋果果實的常見病害，國外分別稱為蘋果霉心病(moldy core)和心腐病(core rot)，在我國通常統(tǒng)稱為蘋果霉心病[1-4]。蘋果霉心病與心腐病由多種病原引起[5]。劉開啟等[6]在我國山東地區(qū)對蘋果霉心病病原進行研究，鑒定出11屬的12種及8個類型的致病真菌，其中以鏈格孢(Alternariaalternata)、鐮刀菌(Fusariumspp.)和粉紅聚端孢(Trichotheciumroseum(Bull.) Link)所占比例較大。呼麗萍等[7]對甘肅霉心病病原初步鑒定認為，紅星蘋果的健果88.4%果心帶菌，其中60.7%帶有鏈格孢；在霉心病果中鏈格孢出現(xiàn)率為79.9%,到后期粉紅聚端孢、棒盤孢(Coryneumsp.)、狹截盤多毛孢(Truncatellaangustata(Pers.ex lk) Hughes)、鐮刀菌等增多。蘋果霉心病與心腐病病原多樣，因此導致該類病害的病原鑒定困難。Gao等[8]利用分子生物學結合形態(tài)學特征，對采自陜西省蘋果主產區(qū)的蘋果霉心病和心腐病病原進行系統(tǒng)鑒定，發(fā)現(xiàn)蘋果霉心病和心腐病的主要病原菌涉及20屬的33種。依據(jù)蘋果霉心病和心腐病病害癥狀特征，將該類病害癥狀歸納為褐變型、霉心型和腐爛型3種類型，其中，褐變型和霉心型癥狀主要由鏈格孢、樹狀鏈格孢(A.arborescens)、細極鏈格孢(A.tenuissima)、枝狀枝孢(Cladosporiumcladosprioides)和細極枝孢(C.tenuissimum)引起；腐爛型癥狀主要由粉紅聚端孢(Trichotheciumroseum)、鐮刀菌(Fusariumspp.)、青霉屬(Penicilliumspp.)、莖點霉(Phomaspp.)引起[8]。引起蘋果霉心病與心腐病的優(yōu)勢種類包括鏈格孢、樹狀鏈格孢、細極鏈格孢、枝狀枝孢、細極枝孢、粉紅聚端孢、層出鐮刀菌(Fusariumproliferatum)和團聚莖點霉(Phomaglomerata)等8種病原菌[8]。

目前，國內對蘋果霉心病和心腐病化學藥劑防治的系統(tǒng)研究較少。冷懷瓊等[9]研究發(fā)現(xiàn),多菌靈在蘋果霉心病和心腐病防治過程中效果不穩(wěn)定。氰烯菌酯(2-氰基-3-氨基-3-苯基丙烯酸乙酯,試驗號:JS 399-19)是由國家南方農藥創(chuàng)制中心江蘇基地篩選并合成的，對禾谷鐮刀菌(F.graminearum)和串珠鐮刀菌(F.moniliforme)的菌絲生長發(fā)育有很強的抑制作用[10]。在國外，Reuveni等[11-12]從花期到坐果期間分別葉面噴施4次多氧霉素、苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯，可使蘋果霉心病的病果率分別降低54%～70%，61%～70%和50%～65%；在花期分別葉面噴施3次糠菌唑和吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)+啶酰菌胺混劑，對鏈格孢(A.alternata)有一定抑制效果，可使蘋果霉心病的病果率分別降低55%～70% 和45%～80%。也有研究者嘗試用苯菌靈、克菌丹、多果定、咪唑霉、代森錳鋅等藥劑防治由鏈格孢(Alternaria)引起的蘋果霉心病[13-14]，但均未得到較好的防效。為此，本研究選用目前蘋果生產中防治霉心病和心腐病常用藥劑，對蘋果霉心病和心腐病多種主要病原菌室內抑菌效果進行評價，以期為蘋果霉心病和心腐病的有效控制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試病原菌 鏈格孢(Alternariaalternata(Fr.) Keissl) GL09715、樹狀鏈格孢(A.arborescens) GL09614、細極鏈格孢(A.tenuissima(Fr.) Wiltsh) ZQ111521、粉紅聚端孢(Trichotheciumroseum(Bull.) Link) ZQ111311、枝狀枝孢(CladosporiumcladosproioidesLink) ZQ241422、細極枝孢(C.tenuissimumCook) ZQ150821、團聚莖點霉(Phomaglomerata(corda)Wollena Hochapf) GL09409、層出鐮刀菌(FusariumproliferatumNirenberg) GU222、禾谷鐮刀菌(F.graminearumSchwabe)ZQHY2、木賊鐮刀菌(F.equiseti(Corda)Sacc.)ZQ160621、三線鐮刀菌(F.tricinctumPoae (PK) Synder et Hansen)ZQ608A3，均由西北農林科技大學植物保護學院真菌研究室提供。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 常規(guī)馬鈴薯瓊膠培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g，瓊脂粉10 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL。

1.1.3 供試藥劑 4%農抗120水劑(TF 120 AS)、3%多抗霉素可濕性粉劑(Polyoxin WP)，均由陜西綠盾生物制品有限責任公司提供；1.5%噻霉酮水乳劑(Benziothiazolinone EW)由陜西西大華特科技實業(yè)有限公司提供；25%氰烯菊酯懸浮劑(JS 399-19 SC)由江蘇省農藥研究所股份有限公司生產。

1.2 試驗方法

根據(jù)農藥的規(guī)格、使用質量濃度及用藥量的要求配制，供試藥劑的相應使用質量濃度見表1。

菌絲生長速率法：將直徑5 mm的供試病原菌菌餅接種于不同質量濃度梯度的含藥PDA培養(yǎng)基上，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基為空白對照，每處理3次重復。置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于144 h后用十字交叉法測量菌落直徑，取平均值，計算抑制率[15]。

抑制率=[(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-菌餅直徑)]×100%。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用DPS 7.05版軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 3種殺菌劑對蘋果霉心病與心腐病菌菌絲生長的抑制效果

由表2可以看出，1.5%噻霉酮在300 μg/mL時，對樹狀鏈格孢、枝狀枝孢、粉紅聚端孢3種供試菌菌絲生長的抑制率均達到100.0%，對鏈格孢和細極鏈格孢的抑制率分別為91.9%和82.2%；1.5%噻霉酮在150 μg/mL時，對枝狀枝孢和粉紅聚端孢的抑制率分別為100.0%和86.7%，對細極鏈格孢和鏈格孢的抑制率均在75.0%以上。在推薦質量濃度為37.5 μg/mL時，1.5%噻霉酮對枝狀枝孢和粉紅聚端孢菌絲生長的抑制率分別為75.0%和71.4%，對其他供試菌的抑制率不足60.0%。

注：同列數(shù)據(jù)后標不同大寫字母表示在P=0.05水平差異顯著。表3～5同。

Note:Different uppercase letters indicate significant difference atP=0.05 level.The same table 3-5.

由表3可以看出，3%多抗霉素在120 μg/mL時，對枝狀枝孢、粉紅聚端孢和樹狀鏈格孢菌絲生長的抑制率均達到100.0%，對細極鏈格孢和鏈格孢也有較好的抑制效果，抑制率均在90.0%以上。3%多抗霉素在田間使用質量濃度30 μg/mL時，對樹狀鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢的抑制效果較好，抑制率分別達到92.7%，95.6%和94.9%，對細極鏈格孢和鏈格孢的抑制率均為80.0%以上。

由表4可以看出，4%農抗120在質量濃度為400，200和100 μg/mL時，對粉紅聚端孢的抑制效果均較好，抑制率分別為94.2%，88.2%和80.8%；在400 μg/mL時對細極枝孢的抑制率為80.5%；對其他供試菌的抑制效果較差。在推薦的使用質量濃度200 μg/mL時，4%農抗120對粉紅聚端孢的抑制效果良好，抑制率為88.2%，對細極枝孢和枝狀枝孢的抑制率分別為69.1%和68.4%，對樹狀鏈格孢和細極鏈格孢的抑制率分別為64.3%和65.4%，對其余供試菌的抑制率均不足60.0%。

綜上所述，在推薦質量濃度下，1.5% 噻霉酮、3% 多抗霉素和4% 農抗120 3種藥劑對層出鐮刀菌抑制效果不佳，抑制率僅為20.0%，6.6%和40.3%，因而進行了氰烯菊酯對鐮刀菌抑制效果的測定。

2.2 25%氰烯菊酯對4種鐮刀菌菌絲生長的抑制效果

由表5可以看出，25%氰烯菊酯在5～500 μg/mL時，除層出鐮刀菌略低(抑制率>89%)外，對木賊鐮刀菌、禾谷鐮刀菌和三線鐮刀菌菌絲生長均有良好的抑制效果，抑制率均達90.0%以上；在0.5 μg/mL時，對木賊鐮刀菌、層出鐮刀菌和禾谷鐮刀菌菌絲生長的抑制率均為85.0%以上。

2.3 25%氰烯菊酯對4種鐮刀菌菌絲生長的毒力測定結果

由表6可以看出，25%氰烯菊酯對木賊鐮刀菌、層出鐮刀菌和禾谷鐮刀菌的EC50均小于0.1 μg/mL，對三線鐮刀菌的EC50為0.227 7 μg/mL，可見25%氰烯菊酯對供試的4種鐮刀菌均有很好的抑制效果。

3 討 論

蘋果霉心病與心腐病由多種病原真菌引起。本研究針對引起蘋果霉心病和心腐病病原多樣性的特點，利用3種殺菌劑對引起該類病害的8種主要病原菌進行室內抑菌活性測定，發(fā)現(xiàn)3%多抗霉素在120 μg/mL時對供試的5種病原菌(鏈格孢、樹狀鏈格孢、細極鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢)的抑制效果較好，抑制率均達到90%以上，對供試的3種病原菌(細極枝孢、層出鐮刀菌和團聚莖點霉)的抑制效果不佳。1.5%噻霉酮在300 μg/mL時對4種病原菌(鏈格孢、樹狀鏈格孢、枝狀枝孢和粉紅聚端孢)的抑制效果較明顯，抑制率均可達到90%以上，而對4種病原菌(細極鏈格孢、細極枝孢、層出鐮刀菌和團聚莖點霉)的抑制效果一般或不佳。4%農抗120僅在400 μg/mL時對粉紅聚端孢表現(xiàn)出較高的抑制活性(抑制率為94.2%)，對其他真菌的抑制效果一般或不佳。綜合來看，供試的殺菌劑多抗霉素、噻霉酮和農抗120對蘋果霉心病和心腐病的多種病原菌的部分效果好，但部分病原菌效果一般或沒有效果，因此這一結果可以解釋在生產上，一些藥劑在不同年份、不同地區(qū)、不同果園防治效果不穩(wěn)定的現(xiàn)象。

氰烯菊酯對禾谷鐮刀菌敏感菌株的菌絲生長具有很強的抑制作用，對小麥赤霉病具有良好防效[16-18]。本研究中氰烯菊酯對層出鐮刀菌、禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌和木賊鐮刀菌菌絲生長均具有良好的抑制效果。因此，在生產上，如果與其他殺菌劑，如多抗霉素、噻霉酮等混合使用，對防治蘋果霉心病與心腐病有望取得較好的效果，這有待進一步深入研究。

[1] 陳延熙,梅汝鴻,赫玉強.蘋果霉心病的發(fā)生及防治 [J].植物保護,1985,11(6):9-11.

Chen Y X,Mei R H,He Y Q.Occurrence and control of apple mould core [J].Plant Protection,1985,11(6):9-11.(in Chinese)

[2] 劉 勇,劉紅雨,冷懷瓊.蘋果霉心病防治技術研究 [J].云南農業(yè)大學學報,1995,10(2):187-188.

Liu Y,Liu H Y,Leng H Q.Studies on the control technique of apple mould core [J].Journal of Yunnan Agricultural University,1995,10(2):187-188.(in Chinese)

[3] Combrink J C,Kotzé J M,Visagie T R.Colonization of apples by fungi causing core rot [J].Horticultural Sciences,1985a,2:9-13.

[4] Ellis M A.Fungi associated with moldy core of apple and their location within fruit [J].Fruit Crops,1980,259:36-38.

[5] Jones A L,Aldwinckle H S.Compendium of apple and pear diseases [M].America:APS PRESS the American Phytopathological Society,1990:29-30.

[6] 劉開啟,申衛(wèi)星,張培正,等.蘋果霉心病的研究：Ⅰ.致病菌種類的調查鑒定 [J].山東農業(yè)大學學報,1995,26(3):291-297.

Liu K Q,Shen W X,Zhang P Z,et al.Studies on apple mould core investigation and identification of genera and species of pathogenic fungi [J].Journal of Shandong Agricultural University,1995,26(3):291-297.(in Chinese)

[7] 呼麗萍,馬春紅,張 健,等.蘋果霉心病菌的侵染過程 [J].植物病理學報,1995,25(4):351-356.

Hu L P,Ma C H,Zhang J,et al.Infection process of pathogenic fungi contributing to moldy core and core rot of starking apple fruits [J].Acta Phytopathologica Sinica,1995,25(4):351-356.(in Chinese)

[8] Gao L L,Zhang Q,Sun X Y,et al.Etiology of moldy core,core browning and core rot of Fuji apple in China [J].Plant Disease,2012,97(4):510-516.

[9] 冷懷瓊,劉 勇,龔國淑.蘋果霉心病防治的研究 [J].四川農業(yè)大學學報,1991,9(2):257-261.

Leng H Q,Liu Y,Gong G S.Study on the control of apple mould core [J].Journal of Sichuan Agricultural University,1991,9(2):257-261.(in Chinese)

[10] 王龍根,倪玨萍,王鳳云,等.新型殺菌劑JS 399-19的生物活性研究 [J].農藥,2004,43(8):380-383.

Wang L G,Ni J P,Wang F Y,et al.The research on biological activities of new fungicide JS 399-19 [J].Chinese Journal of Pesticides,2004,43(8):380-383.(in Chinese)

[11] Reuveni M,Sheglov D,Sheglov N,et al.Sensitivity of red delicious apple fruit at various phonologic stages to infection byAlternariaalternataand control of moldy-core [J].European Journal of Plant Pathology,2002,108(5):421-427.

[12] Reuveni M.Inhibition of germination and growth ofAlternariaalternataand moldy-core development in red delicious apple fruit by bromuconazole and sygnum [J].Crop Protection,2006,25(3):253-258.

[13] Biggs A R,Ingle M,Solihati W D,et al.Control ofAlternariainfection of fruit of apple cultivar nittany with calcium chlorideand fungicides [J].Plant Disease,1993,77(10):976-980.

[14] Ellis M A,Barrat J G.Colonization of delicious apple fruits byAlternariaspp.and effect of fungicide sprays on moldy core [J].Plant Disease,1983,67(2):150-152.

[15] 孫廣宇,宗兆鋒.植物病理學實驗技術 [M].北京:中國農業(yè)出版社, 2002.

Sun G Y,Zong Z F.Plant pathologic experimental technology [M].Beijing:China Agricultural Press,2002.(in Chinese)

[16] 李恒奎,陳長軍,王建新.禾谷鐮孢菌對氰烯菊酯的敏感性基線及室內抗藥性風險初步評估 [J].植物病理學報,2006,36(3):273-278.

Li H K,Chen C J,Wang J X.Study on baseline-sensitivity ofFusariumgraminearumto JS 399-19 and assessment of the risk of resistanceinvitro[J].Acta Phytopathologica Sinica,2006,36(3):273-278.(in Chinese)

[17] 李恒奎,周明國,王建新,等.氰烯菊酯防治小麥赤霉病及治理多菌靈抗藥性研究 [J].農藥,2006,45(2):92-94.

Li H K,Zhou M G,Wang J X,et al.Controlling wheat scab with JS 399-19 and carbendazim resistance management [J].Agrochemicals,2006,45(2):92-94.(in Chinese)

[18] 陳 雨,張文芝,周明國,等.氰烯菊酯對禾谷鐮孢菌分生孢子萌發(fā)及菌絲生長的影響 [J].農藥學學報,2007,9(3):235-239.

Chen Y,Zhang W Z,Zhou M G,et al.Effects of JS 399-19 on conidial germination and mycelial growth ofFusariumgraminearum[J].Chinese Journal of Pesticide Science,2007,9(3):235-239.(in Chinese)

Evaluation of three fungicides against apple moldy core and core rot disease

DANG Ji-ling,MA Zhi-chao,ZHANG Rong,GUO Yun-zhong,ZHU Ming-qi,SUN Guang-yu

(StateKeyLaboratoryofCropStressBiologyinAridAreas,CollegeofPlantProtection,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

【Objective】 This study aimed to screen fungicides with optimum antibacterial effects on moldy core and core rot disease in apple.【Method】 Four fungicides,3% polyoxin,1.5% benziothiazolinone,4% TF 120,and 25% JS 399-19 SC,were used to treat main pathogens of apple moldy core and core rot diseaseinvitrobased on mycelial growth method.【Result】 The results showed that 3% polyoxin at 120 μg/mL had effective effects against tested pathogens includingAlternariaalternate,A.arborescens,A.tenuissima,CladosporiumcladosprioidesandTrichotheciumroseumwith antibacterial rate of >90%.1.5% benziothiazolinone at 300 μg/mL had >90% antibacterial rate againstAlternariaalternate,A.arborescens,T.roseumandC.cladosprioides.4% TF 120 at 400 μg/mL only had strong action againstT.roseum,with inhibition rate of 94.2%.The inhibition rate of polyoxin against fungus reached >80% with the concentration of 30 μg/mL,but it failed to inhibitFusariumproliferatumeffectively.Under the concentration of 37.5 μg/mL,benziothiazolinone had good action against tested fungus (C.cladosproioidesandT.roseum) with inhibition rate of >70%.When tested with the concentration of 200 μg/mL,TF 120 showed good inhibitory effect (88.2%) againstT.roseum.25% JS 399-19 SC showed good inhibitory effect againstFusariumequiseti,F.proliferatum,F.graminearumandF.tricinctum,and the EC50against the former three was <0.1 μg/mL while against the last one was 0.227 7 μg/mL.【Conclusion】 Polyoxin,TF 120,benziothiazolinone and JS 399-19 had different effects against moldy-core and core rot disease in apple.Thus,they can be mixed or separately applied to control these diseases.

apple moldy core;apple core rot;biodiversity of pathogen;indoor activity

2013-09-23

國家自然科學基金項目(31170015)；高等學校學科創(chuàng)新引智計劃項目(B07049)

黨繼玲(1986-)，女，甘肅武威人，在讀博士，主要從事蘋果早期落葉病及蘋果霉心病與心腐病病原及防治研究。 E-mail:dangjiling123@126.com

孫廣宇(1963-)，男，陜西洛川人，教授，博士生導師，主要從事真菌分子系統(tǒng)學、真菌多樣性及蘋果病害綜合治理研究。E-mail:sgy@nwsuaf.edu.cn

時間:2014-12-12 09:30

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.01.014

S436.611.1+9

A

1671-9387(2015)01-0147-05

網(wǎng)絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20141212.0930.014.html