支原體感染與輸卵管妊娠的相關(guān)性分析

郭宏亮，黃榮芳，方麗萍

（昆明市婦幼保健院 婦科，云南 昆明 650031）

沙眼衣原體（CT），解脲支原體（UU），人型解脲支原體（Mh） 感染與輸卵管妊娠的相關(guān)性也是近年來的研究熱點(diǎn)。受精卵在子宮體腔以外著床稱為異位妊娠，其發(fā)病率約為2%。輸卵管妊娠是育齡女性異位妊娠中最常見的一種，約占95%。因輸卵管不利于胎盤著床和胚胎發(fā)育，輸卵管妊娠發(fā)生破裂和出血的風(fēng)險(xiǎn)極大，是導(dǎo)致孕早期婦女死亡的重要原因。病原微生物引起的輸卵管炎癥是輸卵管妊娠的主要病因。以往認(rèn)為引起輸卵管炎的病原體主要是細(xì)菌、淋病奈瑟菌等，隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步及檢驗(yàn)手段的提高，對輸卵管炎的病因有了新的研究，有報(bào)道[1]指出沙眼衣原體和支原體也是引起輸卵管妊娠的重要病原體。我們通過對輸卵管妊娠患者及孕早期女性宮頸分泌物CT，UU，Mh的檢測探討CT，UU，Mh與輸卵管妊娠的關(guān)系。

有學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)在宮內(nèi)膜中能檢測到CT，UU，Mh[2]，在輸卵管組織同樣也能檢出CT，UU，Mh[3,4]，那么盆腔液中是否也能檢測到CT，UU，Mh，這是一個(gè)有待研究的問題。目前國內(nèi)檢測并研究盆腔液CT，UU，Mh感染的課題相對較少。我們通過檢測宮頸分泌物和盆腔液中的CT，UU，Mh，探討盆腔液中CT，UU，Mh感染的情況。

資料與方法 一、研究對象 所有研究對象均選取自2013年7月-2014年3月在昆明市婦幼保健院婦科門診、婦科住院部和生殖醫(yī)學(xué)科就診的患者，均需滿足的納入標(biāo)準(zhǔn)：有性生活史，在2周內(nèi)未使用過任何抗生素，取樣3d內(nèi)沒有陰道沖洗，沒有陰道用藥及性生活，排除經(jīng)期的女性。

選取婦科住院部收治的輸卵管妊娠患者81例作為研究組，選取同時(shí)期婦科門診孕早期要求終止妊娠并排外既往有異位妊娠史的患者102例作為對照組；取宮頸分泌物行支原體培養(yǎng)、沙眼衣原體檢測。

二、標(biāo)本采集 （一） 宮頸分泌物：用無菌窺陰器擴(kuò)張陰道，注意窺陰器上不能涂潤滑劑及消毒劑，以防干擾測定結(jié)果。用消毒棉簽擦拭宮頸口多余的分泌物，然后用滅菌棉拭子插入宮頸口內(nèi)（2～4） cm處緩慢旋轉(zhuǎn)（2～3） 圈，停留（10～30） s后取出，取出時(shí)注意不要碰到陰道壁，放于無菌試管內(nèi)送檢支原體和沙眼衣原體。

（二） 盆腔液：在術(shù)中用相同規(guī)格的無菌拭子在道格拉斯陷窩擦拭取盆腔液，無菌拭子放于無菌試管內(nèi)送檢支原體和沙眼衣原體。

（三） 陰道分泌物：用2支無菌棉簽取陰道側(cè)壁上1/3分泌物后送檢。

三、UU和Mh檢測及藥敏試驗(yàn) （一） 試劑UU和Mh檢測采用液體培養(yǎng)法。試劑盒是由珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)的UU/Mh分離培養(yǎng)藥敏試劑盒。試劑盒主要由支原體培養(yǎng)基和檢測卡組成。培養(yǎng)基中含有尿素、馬血清、酵母提取液、酚紅指示劑、混合抗生素、生長因子等物質(zhì)，稀釋液中有支原體基礎(chǔ)肉湯和精氨酸，當(dāng)UU和Mh生長時(shí)，尿素和精氨酸分解生成的堿性物質(zhì)引起PH值上升，培養(yǎng)基由黃色變成紅色。培養(yǎng)基中加有抑菌劑，可抑制生殖道中的細(xì)菌和真菌的生長。本試劑盒可同時(shí)檢測UU和Mh。

（二） 方法 從冰箱取出所需數(shù)量干燥培養(yǎng)基，用無菌吸頭吸取培養(yǎng)基100μl加入檢測卡C-空白孔。將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶，在靠近液面上方的瓶壁擠壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，充分混勻，使拭子中的樣本滲入，棄拭子。充分混勻接種標(biāo)本的培養(yǎng)基，取100μl加入檢測卡除C-空白孔的各空中。各孔滴加2滴無菌礦物油，蓋上檢測卡的蓋子，置于35℃～37℃的恒溫箱培養(yǎng)，在24h和48h分別觀察結(jié)果。操作過程中注意無菌原則，避免污染。

（三） 結(jié)果判讀 陰陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：黃色或橙黃色→陰性；清晰透明紅色→陽性；渾濁紅色→污染。C-空白孔應(yīng)為陰性，若為陽性表示有污染，本次試驗(yàn)無效。分離鑒定孔陰性（48h），可報(bào)告無UU和Mh生長。UU分離鑒定孔陽性，則報(bào)告檢測出解脲支原體。Mh分離鑒定孔陽性，則報(bào)告檢測出人型支原體。

四、沙眼衣原體檢測 （一） 檢測方法 采用Unipath有限公司生產(chǎn)的沙眼衣原體檢測試劑盒（免疫層析法） 檢測沙眼衣原體抗原，向提取試管中加入提取液（含低于0.1%疊氮鈉的提取試劑）至0.6ml，將宮頸分泌物棉拭標(biāo)本浸沒在提取液中并攪動(dòng)至少5秒，將提取試管于80℃加熱（10～12） min，即可提取沙眼衣原體抗原，將標(biāo)本提取液在室溫下18℃～30℃冷卻至少5min，將滴管附件蓋在提取試管上，向檢測塊的標(biāo)本窗滴上5滴提取液，15min后讀取檢測結(jié)果。

（二） 結(jié)果判讀 結(jié)果窗內(nèi)無線條出現(xiàn)為沙眼衣原體抗原陰性，結(jié)果窗內(nèi)有一條線出現(xiàn)為沙眼衣原體抗原陽性。若質(zhì)控線（C） 不出現(xiàn)紅線，則結(jié)果無效。

五、陰道分泌物檢測 陰道分泌物鏡檢：將陰道分泌物均勻涂于載玻片上，用油鏡觀察線索細(xì)胞、假絲酵母菌的芽孢、菌絲。然后將棉簽放入無菌試管中，滴上生理鹽水稀釋后，涂于載玻片上，直接在光鏡下檢查滴蟲。需氧菌陰道炎及細(xì)菌性陰道病測定：采用北京中生金域診斷技術(shù)有限公司生產(chǎn)的需氧菌陰道炎/細(xì)菌性陰道病五項(xiàng)聯(lián)合測定試劑盒。外陰陰道假絲酵母菌?。猴@微鏡下見到假絲酵母菌的孢子或菌絲。

滴蟲性陰道炎:顯微鏡下懸滴法檢查見到滴蟲。需氧菌陰道炎：當(dāng)過氧化氫（H2O）2，白細(xì)胞酯酶（LE） 陽性，同時(shí)β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS），凝固酶（GADP） 一項(xiàng)陽性或兩項(xiàng)均為陽性者。細(xì)菌性陰道?。寒?dāng)過氧化氫（H2O）2，白細(xì)胞酯酶（LE） 陽性，同時(shí)伴線索細(xì)胞陽性和（或）唾液酸苷酶（SNA） 陽性者。

六、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將研究對象的臨床資料、沙眼衣原體檢測結(jié)果、陰道分泌物檢測結(jié)果、解脲支原體和人型支原體的檢測錄入EXCEL數(shù)據(jù)庫，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)、四格表確切概率法，P值＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值＞0.05為差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果 研究組與對照組宮頸分泌物沙眼衣原體、支原體檢出情況。

研究組與對照組宮頸分泌物均未檢測出沙眼衣原體。

研究組81例中宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體51例，陽性率為62.96%，對照組102例宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體48例，陽性率為47.06%，研究組陽性率明顯高于對照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

手術(shù)患者宮頸分泌物和盆腔液沙眼衣原體、支原體檢出情況：305例手術(shù)患者的宮頸分泌物及盆腔液未檢測出沙眼衣原體。305例手術(shù)患者中宮頸分泌物培養(yǎng)出支原體的有152例，陽性率為49.84%；盆腔液培養(yǎng)出支原體的有0例，陽性率為0；宮頸分泌物陽性率明顯高于盆腔液，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

結(jié) 論 在本實(shí)驗(yàn)研究范圍內(nèi)：宮頸支原體感染是導(dǎo)致不孕、輸卵管妊娠的原因之一；支原體可能合并其他病原微生物共同致病。

討 論 UU和Mh與輸卵管妊娠關(guān)系的討論：輸卵管妊娠是婦產(chǎn)科常見的急腹癥，是孕產(chǎn)婦死亡的原因之一，嚴(yán)重威脅女性的生殖健康。病原微生物引起的輸卵管炎癥是輸卵管妊娠的主要病因。以往認(rèn)為引起輸卵管炎的病原體主要是細(xì)菌、淋病奈瑟菌等，隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步及檢驗(yàn)手段的提高，對輸卵管炎的病因有了新的研究，有報(bào)道[1]指出UU和Mh也是引起輸卵管妊娠的一種重要病原體。

國內(nèi)賀子秋[5]調(diào)查1985年～1986年，1995年～1996年2個(gè)時(shí)間段輸卵管妊娠發(fā)病率呈上升趨勢，支原體的感染亦呈上升趨勢，認(rèn)為二者有關(guān)。黃新可等[6]的研究報(bào)道：輸卵管妊娠患者宮頸分泌物培養(yǎng)支原體陽性率顯著高于對照組；2次以上輸卵管妊娠患者宮頸分泌物培養(yǎng)支原體陽性率高于初次輸卵管患者。認(rèn)為支原體感染與輸卵管妊娠之間密切相關(guān)。張帝開等[7]對大白兔的輸卵管感染支原體后進(jìn)行病理分析，發(fā)現(xiàn)輸卵管黏膜層上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度腫脹，黏膜下層炎性細(xì)胞浸潤，電鏡下可見支原體粘附于輸卵管黏膜上皮細(xì)胞上。同時(shí)，輸卵管表面的纖毛出現(xiàn)粘連、倒?fàn)?，微絨毛稀少、甚至脫落，提示支原體到達(dá)輸卵管可致輸卵管黏膜上皮的損傷。有學(xué)者對胚胎附著的輸卵管組織進(jìn)行了支原體的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)生輸卵管妊娠的輸卵管組織支原體的檢出率明顯高于對照組，認(rèn)為支原體感染與輸卵管妊娠相關(guān)[4]。

表2 宮頸分泌物和盆腔液支原體檢出情況

本研究中研究組宮頸分泌物支原體陽性率達(dá)62.96%，明顯高于正常早孕人群的陽性率47.17%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。輸卵管妊娠患者宮頸分泌物支原體的陽性率與郭慧梅[8]等報(bào)道的一致，提示支原體感染與輸卵管妊娠有關(guān)。支原體能吸附于宿主細(xì)胞表面，吸取脂質(zhì)和膽固醇，破壞宿主細(xì)胞膜；溶解磷脂，使宿主細(xì)胞膜遭受損傷，影響膜的生物合成和免疫功能；產(chǎn)生毒性代謝產(chǎn)物，對宿主細(xì)胞有急性毒性作用；刺激機(jī)體產(chǎn)生特異的細(xì)胞免疫和體液免疫，最終引起輸卵管的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能的改變[9]。

［1］童燕群．解脲支原體和沙眼衣原體感染與輸卵管妊娠的[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(16)：3194-3195．

［2］張岱，魏宏，廖秦平．女性生殖道支原體及其他病原體在急性盆腔炎中的檢出率[J]．中國婦幼保健，2010，25(3)：366-369．

［3］劉志紅，鄧玉清，王玉潔，等．解脲支原體和沙眼衣原體感染與輸卵管妊娠的關(guān)系[J]．中國醫(yī)師雜志，2004，6(10)：1416-1417．

［4］郝艷華，程明剛，鄧志敏，等．解脲支原體與輸卵管妊娠關(guān)系的研究[J]．中原醫(yī)刊,2005,32(14):20-21.

［5］賀子秋，張慧娟，戴鐘英，等．輸卵管傳性播疾病病原體感染與輸卵管妊娠關(guān)系的研究[J]．實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，1999，15（5）：254-255.

［6］黃新可，張羨，羅新，等．女性下生殖道沙眼衣原體及解脲支原體感染與輸卵管妊娠的相關(guān)性[J]．中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2012，28（8）：628-630.

［7］張帝開，賈繼輝，鄺健全，等．解脲支原體對輸卵管黏膜上皮細(xì)胞致病性研究[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2009，15（6）：317-319.

［8］郭慧梅，田瑩．輸卵管妊娠與生殖道支原體感染關(guān)系的臨床分析[J]．河北醫(yī)學(xué)，2008，14(2)：151-153．

［9］曲艷，于濤，夏麗穎，等．解脲支原體和沙眼衣原體感染致不孕癥機(jī)制研究[J]．中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2007，7（10）：881-882.