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      α-enolase蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

      2015-02-21 13:43:52朱禮昆楊蔚琪
      云南醫(yī)藥 2015年3期
      關(guān)鍵詞:鱗狀鱗癌分化

      朱禮昆,楊蔚琪,楊 云

      (昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 整形外科,云南 昆明 650032)

      α-enolase(ENO1) 是烯醇化酶家族中3種同功酶之一,是一種多功能的蛋白,作為糖酵解過程中的關(guān)鍵酶,α-enolase廣泛分布在原核和真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,其基因表達(dá)隨細(xì)胞病理生理、代謝、發(fā)育狀況的不同而改變[1]。Jiang等[2]通過構(gòu)建結(jié)腸癌相關(guān)生物學(xué)網(wǎng)絡(luò)研究發(fā)現(xiàn):α-enolase與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分裂、細(xì)胞遷移、蛋白質(zhì)水解等生物學(xué)過程相關(guān)聯(lián),并且是結(jié)腸癌相關(guān)生物學(xué)網(wǎng)絡(luò)的中心基因之一,這提示α-enolase可能在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用??谇击[狀細(xì)胞癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率位于口腔頜面部腫瘤的首位,并且近年來仍有上升趨勢。本研究通過測定α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá),探討其與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,這對揭示口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的精確分子機制,設(shè)計合理的治療藥物及判斷預(yù)后,進(jìn)一步提高我國口腔鱗狀細(xì)胞癌的治療水平具有重要意義。

      材料和方法

      一、一般資料 收集2010年1月-2012年10月昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院整形外科術(shù)前未經(jīng)任何治療的口腔鱗狀細(xì)胞癌蠟塊40例,其中男性24例,女性16例,平均年齡58.5歲,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例,根據(jù)腫瘤分化程度分為低分化、中分化和高分化鱗癌,根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC) 2002年口腔癌分期標(biāo)準(zhǔn),包括I+II期25例,III+IV期15例。對照組10例,均為正??谇火つそM織。

      二、主要實劑及儀器 ELISA試劑盒:北京鑫方程生物技術(shù)有限公司,產(chǎn)品編號FU-E10980。PCR儀:ABI儀器型號9700。基因組提取試劑盒:莊盟生物,產(chǎn)品編號ZP311 2X。SYBR MIX:莊盟生物,產(chǎn)品編號ZF101。

      三、方法 1.ELISA定量測定α-enolase濃度:操作步驟參照文獻(xiàn)[3]。

      2.利用real-time PCR測定α-enolase mRNA表達(dá):用TRIzol法抽提總mRNA,測定其濃度和純度,用RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。α-enolase上游引物:5'-ATTGAGCTAGATGGGACCGAGAAT-3',下游引物:5'-CACTGGGAGTATGAGGTCAGGGTT-3',PCR產(chǎn) 物159bp;β-actin上游引物:5'-TCATGAAGTGTGACGTGGACA-3',下 游 引 物: 5'-GCTCAGGAGGAGCAATGATCT-3',PCR 產(chǎn) 物158bp。PCR條 件:95℃預(yù)變性2min,95℃變性2s,59℃退火延伸30s,50個循環(huán);72℃終延伸12s。

      結(jié) 果

      一、口腔鱗狀細(xì)胞癌中α-enolase蛋白的表達(dá)由附圖可見,口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中α-enolase蛋白表達(dá)明顯高于正常粘膜組織(P<0.05);由表1可見:α-enolase蛋白在低、中、高分化口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)均有差異(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,高分化鱗癌的α-enolase濃度>中分化鱗癌>低分化鱗癌;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為III+IV期者α-enolase的表達(dá)分別明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為I+II期者(P<0.05)。

      二、口腔鱗狀細(xì)胞癌中α-enolase蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 由表2可見,α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分化程度密切相關(guān)(P<0.05),而與患者的年齡、性別無關(guān)(P>0.05)。

      附圖 口腔鱗狀細(xì)胞癌、正常粘膜組織中α-enolase蛋白結(jié)果比較

      表1 口腔鱗狀細(xì)胞癌α-enolase濃度(±s,ng/ml)

      表1 口腔鱗狀細(xì)胞癌α-enolase濃度(±s,ng/ml)

      注:低分化鱗癌與中分化鱗癌比較▲P<0.05;中分化鱗癌與高分化鱗癌比較△P<0.05;低分化鱗癌與高分化鱗癌比較◇P<0.05;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較●P<0.05;III+IV期患者與I+II期比較☆P<0.05。

      組分 n淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 12無轉(zhuǎn)移 28 α-enolase濃度960.6±15.40 857.86±30.45●P 0.036低分化 16 839.28±17.49 0.029中分化 12 906.00±11.92▲ 0.032高分化 12 987.06±16.79△◇ 0.048 III+IV期 15 998.86±30.45☆ 0.021 I+II期 25 852.87±14.24

      表2 口腔鱗狀細(xì)胞癌中α-enolase蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

      討 論

      烯醇化酶(enloase,ENO) 是糖酵解途徑中催化2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿岽际奖岬拿?,烯醇化酶家族包括?enolase(ENO1)、β-enolase和γ-enolase。α-enolase作為一種糖酵解酶,廣泛分布在原核和真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,是一個高度保守的胞漿酶類,由兩個含有433個氨基酸,分子量約47kDa的亞單位反向平行結(jié)合構(gòu)成的二聚體,在細(xì)胞質(zhì)中起催化作用,形成磷酸烯醇式丙酮酸[4]。在臨床上,γ-enolase已作為一種常用于指導(dǎo)小細(xì)胞肺癌患者的療效監(jiān)測、復(fù)發(fā)預(yù)測和預(yù)后評估的血清腫瘤標(biāo)志物。

      以往認(rèn)為糖酵解代謝酶的生物學(xué)活性只是催化能量代謝,然而Kim等[5]研究發(fā)現(xiàn)糖酵解酶都是具有多功能的蛋白,其所涉及的其他生物學(xué)功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān);最近研究發(fā)現(xiàn),烯醇化酶是一種多功能蛋白,其多樣性主要體現(xiàn)在細(xì)胞定位和功能上[6]。位于細(xì)胞膜的α-enolase能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移,α-enolase蛋白的C端具有一個跨膜結(jié)構(gòu)域(包含16個氨基酸),以此錨定于細(xì)胞膜[7]。Jiang及同事[2]通過構(gòu)建結(jié)腸癌相關(guān)生物學(xué)網(wǎng)絡(luò)研究發(fā)現(xiàn):α-enolase與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分裂、細(xì)胞遷移、蛋白質(zhì)水解等生物學(xué)過程相關(guān)聯(lián),并且是結(jié)腸癌相關(guān)生物學(xué)網(wǎng)絡(luò)的中心基因之一,這提示α-enolase可能在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。

      在臨床上,γ-enolase已作為一種用于指導(dǎo)小細(xì)胞肺癌患者的療效監(jiān)測、復(fù)發(fā)預(yù)測和預(yù)后評估的血清腫瘤標(biāo)志物。鑒于α-enolase與γ-enolase是同一家族,近年來越來越多的研究者開始關(guān)注α-enolase作為腫瘤標(biāo)志物的潛能。目前在腫瘤組織中α-enolase的表達(dá)水平及其與患者臨床相關(guān)性尚無明確定論,有研究發(fā)現(xiàn),在轉(zhuǎn)移性肺癌的肺泡Ⅱ型肺泡、小細(xì)胞肺癌、頭頸癌患者腫瘤組織中,α-enolase表達(dá)水平是上調(diào)[8-10]。2003年Chang及其同事研究發(fā)現(xiàn),在非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織中,α-enolase表達(dá)水平顯著下調(diào),α-enolase表達(dá)水平與肺癌患者預(yù)后相關(guān),其表達(dá)量越低,患者預(yù)后越差[11],這提示α-enolase可能抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展過程。然而更多研究表明,α-enolase與腫瘤發(fā)生發(fā)展存在正相關(guān)。α-enolase作為肺癌相關(guān)抗原,在非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織和胸腔積液中的腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),其表達(dá)量越高,患者預(yù)后越差[12];頭頸癌患者腫瘤組織中α-enolase顯著高于正常對照組,其表達(dá)量越高,患者預(yù)后越差[13];乳腺癌患者腫瘤組織中α-enolase的mRNA水平顯著高于配對正常組織,并且這種改變在雌激素受體陽性(ER+) 的乳腺癌亞型中尤明顯,α-enolase表達(dá)水平越高,患者預(yù)后越差[14]。

      口腔鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率位于口腔頜面部腫瘤的首位,并且近年來仍有上升趨勢。本研究通過ELISA法測定α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn):口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中α-enolase蛋白表達(dá)明顯高于正常粘膜組織,α-enolase的高表達(dá)量與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān),隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度、TNM分期的增加,α-enolase的表達(dá)會增加,提示在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中α-enolase蛋白表達(dá)上調(diào),α-enolase可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的發(fā)生、發(fā)展起著重要作用,這與在其他腫瘤中的研究結(jié)論基本相-致[8-10],但這些研究多以腫瘤組織與癌旁組織為標(biāo)本,多應(yīng)用免疫組化方法進(jìn)行研究的,而我們的實驗是以腫瘤組織與正常人黏膜組織為標(biāo)本,應(yīng)用ELISA方法進(jìn)行研究。總之,本研究雖然通過測定α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá),探討其與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)展過種中起著重要作用,但只是停留在分子表淺層面,對臨床診斷和治療能提供些參考和建議,究其根源需要在基因水平上明確α-enolase在肺腺癌組織中的表達(dá)情況,進(jìn)一步明確α-enolase在口腔鱗狀細(xì)胞癌中所占居的重要地位,進(jìn)而盡早明確是否可以應(yīng)用于臨床診斷和治療。

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