HPLC-ELSD法測定澤蘭中齊墩果酸和熊果酸的含量

廖 壹

隴南市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，甘肅 隴南 746000

澤蘭為唇形科植物地筍(地瓜兒苗)Lycopus lucidus Turcz.var.hirtus Regel的干燥地上部分[1]。具有活血化瘀，行水消腫的功效，主要用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉，痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀血腹痛，水腫等。齊墩果酸與熊果酸均屬于五環(huán)三萜類化合物，是同分異構(gòu)體[2]。經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，齊墩果酸具有護(hù)肝降酶、抗炎、強(qiáng)心利尿、抗腫瘤的功效[3]。熊果酸具有化學(xué)預(yù)防、抗腫瘤活性、保肝、抗菌抗病毒、增強(qiáng)免疫等功效[4]。文獻(xiàn)報(bào)道用薄層掃描法測定澤蘭中齊墩果酸的含量[5]，楊學(xué)猛[6]等用HPLC法證實(shí)澤蘭中確有熊果酸的存在，黃宏偉用反相高效液相法測得了澤蘭中烏索酸和齊墩果酸的含量[7]，趙宇新等用HPLC-ELSD法測得了木瓜中齊墩果酸和熊果酸含量[8]，但文獻(xiàn)中迄今沒有采用高效液相色譜法（HPLC）-蒸發(fā)光射檢測器（ELSD）同時(shí)測定澤蘭中齊墩果酸和熊果酸含量的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-ELSD同時(shí)測定了澤蘭中齊墩果酸和熊果酸的含量，結(jié)果表明該方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為澤蘭的質(zhì)量控制提供可選擇性的技術(shù)方法。

1 儀器與試藥

圖1 對照品溶液(A)和供試品溶液(B)的HPLC圖

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀 [沃特世科技（上海）有限公司],2420型蒸發(fā)光射檢測器[沃特世科技（上海）有限公司]；Empower色譜工作站[沃特世科技（上海）有限公司]；分析天平（Met t ler AE-163）[梅特勒-托利多(上海)有限公司]。

1.2 藥品 齊墩果酸與熊果酸對照品（均購自中國生物制品檢定所，批號分別為110709-200304，110742-200516），甲醇（色譜純，山東禹王試劑公司，批號20140121173），冰醋酸(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20140115)。澤蘭均購自蘭州黃河藥材市場，經(jīng)甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院宋平順主任藥師鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hpersi l ODS柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相：甲醇 -0.5%冰醋酸(88∶12)，流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度：90℃；氣體壓力：30psi；噴霧器級別：85%。氮?dú)?99.999%)。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取齊墩果酸5.7mg和熊果酸4.7mg對照品，加甲醇定容至10mL，再分別吸取齊墩果酸對照品1mL，熊果酸對照品2mL，定容至5mL，使每1mL含齊墩果酸0.114mg，熊果酸0.188mg。對照品色譜圖見圖1。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，粉碎，精密稱取1 g，置索氏提取器中，提取6小時(shí)，過濾，蒸干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?0mL。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取混合對照品溶液，精密吸 5、10、20、30、40、50、60μL進(jìn)樣，測定峰面積，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)數(shù)值(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值的自然對數(shù)值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

熊果酸線性方程為：Y=0.850 4X-4.427 9，r=0.997 7。

齊墩果酸線性方程為：Y=1.318 0X-6.951 4，r=0.996 9。

結(jié)果熊果酸和齊墩果酸線分別在0.94～11.28μg、0.57～6.84μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一樣品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得熊果酸峰面積的RSD為1.90%，齊墩果酸峰面積的RSD為1.78%。

2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一樣品溶液6份，

分別進(jìn)樣10μL，測得熊果酸峰面積的RSD為2.01%，齊墩果酸的RSD為1.89%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一樣品溶液10μL，分別在 0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣 10μL，測得樣品在 8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，熊果酸峰面積RSD為2.33%，齊墩果酸峰面積RSD為2.62%。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批澤蘭樣品 (齊墩果酸0.16%，熊果酸0.30%)0.5 g，共6份，分別精密加入齊墩果酸對照品溶液 (0.401 2 mg/mL)2 mL，熊果酸對照品溶液(0.418 1mg/mL)3.6mL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定供試品溶液含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.8 樣品測定 取5批藥材樣品，按“2.2”項(xiàng)下操作制備供試液，準(zhǔn)確吸取供試液10μL，進(jìn)樣，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定，結(jié)果見表2。

表2 澤蘭中齊墩果酸與熊果酸的含量

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用甲醇-0.5%冰醋酸為流動相，88∶12時(shí)分離效果較好。以Diamonsi l C18柱，采用不同的流動相：甲醇∶水，甲醇∶水∶醋酸∶三乙胺，甲醇∶醋酸，分離效果都不是很好。改用hypersi l ODS柱，分離效果好，可是噪音較大，因此本實(shí)驗(yàn)將漂移管溫度設(shè)為90℃，柱溫調(diào)為40℃，氣壓設(shè)為30 psi，分離效果很好。對澤蘭進(jìn)行了超聲和索氏提取的工藝比較，通過HPLC測定含量發(fā)現(xiàn)，索氏提取率較超聲提取好，所以本實(shí)驗(yàn)采用索氏提取法。本實(shí)驗(yàn)建立了用HPLC-ELSD同時(shí)測定澤蘭中齊墩果酸與熊果酸含量的方法，為澤蘭的質(zhì)量控制提供了一種新的方法，該方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用來全面評價(jià)澤蘭的質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:212.

[2] 昌盛,李龍.齊墩果酸藥理作用研究進(jìn)展[J].廣州化工,2011,39(14):30-32.

[3] 胡華杰.齊墩果酸藥理作用與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2012,24(3):92-94.

[4] 王婷,宋懷燕.熊果酸藥理作用研究進(jìn)展[J].中華醫(yī)學(xué)研究雜志,2005,9(5):1-8.

[5] 何錦鈞,李子鴻.澤蘭中齊墩果酸的含量測定[J].中藥材,2000,23(8):466.

[6] 楊學(xué)猛,徐風(fēng)梅.HPLC法測定澤蘭中熊果酸、齊墩果酸的含量[J].中草藥,2003,34(10):11.

[7] 黃宏偉,鄒盛勤.反相高效液相色譜法測定澤蘭中烏索酸和齊墩果酸的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(15):4409.

[8] 趙宇新,李曼玲.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定中藥及制劑中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].藥物分析雜志,2004,24(2):167-170.