豬圓環(huán)病毒2型與豬圓環(huán)病毒相關(guān)性系統(tǒng)疾病的回顧及展望

顧金燕，邢剛，雷靜，劉斐，周繼勇

豬圓環(huán)病毒2型 (Porcine circovirus type 2，PCV2) 是目前已知的最小的哺乳動物病毒，直徑為12–23 nm，是豬圓環(huán)病毒相關(guān)性系統(tǒng)疾病(PCV2-systemic disease，PCV2-SD) 的主要病原。PCV2能損傷豬的免疫系統(tǒng)，以淋巴結(jié)腫大、淋巴細胞減少等為特征，導(dǎo)致嚴重的免疫抑制，給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的損失。近幾年疫苗的使用使PCV2-SD得到了一定的控制[1]。

1 PCV2的進化歷程

1974年，德國學(xué)者Tischer首次描述了一種存在于豬腎細胞系 PK15 (ATCC-CCL33) 的類似小核糖核酸病毒的細胞污染物[2]。8年后，他證明這種污染物是一種豬源的單鏈環(huán)狀的DNA病毒，并命名為豬圓環(huán)病毒 (Porcine circovirus，PCV)[3]。將PCV接種豬后，對豬不具有致病性。1996年，加拿大學(xué)者首次描述了一種新的、從1991年開始偶發(fā)的豬病，該病主要侵犯5–12周齡的豬群且涉及豬病的多個器官的損傷，稱之為斷奶后仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征 (PMWS)[4-5],現(xiàn)在國際上多稱為 PCV2相關(guān)性系統(tǒng)疾病(PCV2-SD)。隨后，該病在全世界相繼被報道，逐漸受到人們關(guān)注，并從PCV2-SD患豬中分離到一種新的PCV，這種PCV能致病，且抗原性和核苷酸序列與之前分離到的無致病性的 PCV存在差異，為了區(qū)分兩者，將不致病的PCV命名為 PCV1，能致 PCV2-SD的 PCV命名為PCV2。2009年，德國科學(xué)家利用原位雜交和PCR技術(shù)在一份保存于1962年的豬脾和肺臟組織中檢測到了PCV2[6]，說明PCV2可能在豬群中存在已長達50年以上，在這50多年間，PCV逐漸從一種對豬群無害的病毒演變?yōu)槟軐ωi群造成重大傷害的病毒。

PCV2主要有兩種基因型：PCV2a和PCV2b。兩者基因組長分別為1 767和1 768個核苷酸[7]，還有一種 PCV2c僅在丹麥有過報道[8]。起初 PCV2a的大流行導(dǎo)致大規(guī)模的亞臨床感染與零星的發(fā)病，大約到20世紀90年代，PCV2b逐漸成為優(yōu)勢毒株并導(dǎo)致了PCV2-SD的大爆發(fā)，并且大多數(shù)在動物模型上成功誘導(dǎo)健康豬發(fā)病的基因亞型都為 PCV2b[9]。2010年，Guo等測定了2004至2008年間分離自我國各地多株 PCV2毒株的序列，并按照現(xiàn)行基因分型原則進行分析，首次提出了PCV2d亞型[10]。2011年，Jantafong等將在泰國分離到的一株新PCV2毒株命名為 PCV2e[11]，近兩年，PCV2d和PCV2e在世界其他地區(qū)也偶見報道[12-13]。但是Cortey等并不同意這種新的亞型命名方式，他們認為應(yīng)該堅持將 PCV2分為 a、b、c 三個亞型[14]。我們實驗室對在 2009–2013年間從中國東部地區(qū)分離到的20株P(guān)CV2進行分析，發(fā)現(xiàn)兩株P(guān)CV2雖然具有PCV2b標(biāo)簽序列，但在進化分析中卻組成一個獨立分支，可能是一個新的基因型，并命名為PCV2new[15]。除此之外，我國還分離到一些基因缺失毒株、基因插入毒株、重組毒株、類PCV毒株等圓環(huán)病毒的突變體[16]?？傊还苡媚姆N分類方式，以上研究都表明當(dāng)前 PCV2的變異速度加快，且臨床上存在多種PCV2亞型共感染，PCV2與其他多種病毒 (如豬瘟病毒、藍耳病毒、細小病毒、偽狂犬病毒等) 共感染的現(xiàn)象，感染情況普遍且復(fù)雜。另有研究發(fā)現(xiàn)，PCV2現(xiàn)已不僅在豬群中流行，在人類、牛、嚙齒動物、蒼蠅、蚊子、貝類等動物種群以及水、人用疫苗、空氣中也分別檢測或分離到了PCV2[17-21]，為PCV2-SD的防控帶來新的挑戰(zhàn)。

2 PCV2編碼蛋白

PCV2基因組很小，Hamel等通過軟件分析認為其基因組結(jié)構(gòu)存在11個潛在的開放閱讀框(Open reading frame，ORF)。PCV2充分利用了其在宿主細胞內(nèi)形成的復(fù)制中間體及閱讀框間相互重疊的方式傳達了大量的遺傳信息[22]，其中ORF1、5、7和10位于病毒正鏈DNA上并順時針轉(zhuǎn)錄，而ORF2、3、4、6、8、9、11則位于病毒負鏈DNA上并逆時針轉(zhuǎn)錄[23]，到目前為止，ORF1、2、3、4的編碼產(chǎn)物已經(jīng)被分別證明，其他閱讀框所編碼產(chǎn)物是否存在尚不清楚。

2.1 ORF1編碼蛋白

ORF1基因，亦稱rep基因，是PCV2基因組中最大的ORF (945 bp，nt 51-995)，在其基因啟動子區(qū)存在一個干擾素刺激反應(yīng)元件(ISRE，nt 1 737-1 751)，研究證明該ISRE在病毒的轉(zhuǎn)錄起始方面起著很重要的作用[24]。rep基因編碼兩個復(fù)制必需蛋白Rep和Rep’，前者編碼自rep基因的全長轉(zhuǎn)錄本，而后者則由rep基因剪接轉(zhuǎn)錄本翻譯而得，雖然兩者的N端是一致的，但是由于 Rep’剪接造成的移碼，兩者 C端的氨基酸差異很大[25]。

之前大量實驗數(shù)據(jù)證明，Rep及 Rep’蛋白主要定位于細胞核[26-27]，這可能與Rep及Rep’蛋白N端存在的核定位信號相關(guān)。Rep及Rep’蛋白的共同 N端存在 3個核定位信號區(qū)(NLS1、2、3)，其中 NLS1和 NLS2是 Rep及Rep’蛋白核定位所必需的，NLS3在蛋白核轉(zhuǎn)運過程中起促進作用。但是我們實驗室證實 Rep蛋白僅在病毒感染早期定位于核質(zhì)，隨著時間推移慢慢向細胞核周圍移動并進入細胞質(zhì)[28]。Finsterbusch等通過細菌雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)了syncoilin蛋白和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白c-myc與Rep蛋白互作，隨后有人用酵母雙雜交系統(tǒng)又鑒定出了宿主細胞中能與 Rep蛋白互作的鋅指蛋白265 (ZNF265)、胸腺嘧啶糖苷酶 (TDG) 和血管生成因子 VG5Q。有趣的是 Rep’只能與 VG5Q及 TDG發(fā)生反應(yīng)，這可能是因為 Rep蛋白與ZNF265作用的位點位于兩者差異很大的C端[29]。

2.2 ORF2編碼蛋白

位于負鏈的 ORF2基因編碼一個大小為27.8 kDa的衣殼蛋白Cap，Cap蛋白是PCV2的結(jié)構(gòu)蛋白。隨著Cap單體蛋白晶體結(jié)構(gòu)的解析，人們終于解開了其組裝方式的神秘面紗，在這個模型中，60個Cap蛋白亞基即可形成了一個對稱的二十面體，獨立構(gòu)成完整的PCV2衣殼。

分子流行病學(xué)顯示cap基因比其他ORF基因更容易發(fā)生變異，而且 cap基因的多態(tài)性與PCV2的毒力和復(fù)制能力相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Cap蛋白110位的脯氨酸變成丙氨酸 (P110A)、191位的精氨酸變成絲氨酸 (R191S) 后，PCV2在體外的生長能力增強但在體內(nèi)的毒力衰減[30]。有學(xué)者在比較 PCV2a和 PCV2b差異序列時發(fā)現(xiàn)，Cap蛋白的190-191-206-210四個保守氨基酸殘基與病毒蛋白的分布模式相關(guān)，PCV2b的這4個氨基酸殘基AGIE比PCV2a的SRKD更有利于Cap和Rep蛋白在細胞核中的定位，從而促進了病毒的復(fù)制[31]。我們實驗室分離到的長度為1 766 bp的PCV2毒株與1 767 bp毒株相比，其cap基因中1 059處堿基缺失，導(dǎo)致體外復(fù)制能力增強[32]。為了解 PCV2新的潛在單核苷酸缺失可行性，本實驗室選擇 Cap蛋白抗原表位外不影響 ORF2內(nèi)其他編碼框翻譯的1 376、1 377、1 378和1 379位點的堿基進行單核苷酸缺失感染性克隆構(gòu)建，結(jié)果顯示，1 376位點不是 PCV2形成病毒粒子所必需的，但是它的缺失能增強病毒復(fù)制能力，促進IL-6的表達[33]，再次說明Cap蛋白與PCV2的復(fù)制能力相關(guān)。

作為主要的免疫原性蛋白，Cap蛋白的抗原表位逐漸被解析，2000年，Mahé等利用PEPSCAN技術(shù)鑒定出了Cap蛋白的4個線性表位，分別為 aa65-87、aa117-131、aa157-183和aa193-207[34]；2004年，Lekcharoensuk等利用PCV1和 PCV2嵌合病毒鑒定出了由 aa47-63、aa165-200和C末端的最后4個氨基酸共同構(gòu)成的至少3個構(gòu)象表位[35]。2009年，我們利用單抗及合成肽精細地定位了 Cap蛋白的aa156-162、aa175-192、aa195-202和aa231-233四個線性表位, 其中aa231-233既是線性表位又能形成構(gòu)象表位，并確認其是潛在的 PCV2感染的血清學(xué)標(biāo)志[32]。2011年，Guo等在Cap蛋白的核定位信號區(qū)鑒定出了一個新的抗原表位aa26-36，對Cap蛋白的核定位和功能研究有重要意義[36]。2013年，Ge等利用噬菌體展示技術(shù)又發(fā)現(xiàn)了aa86-93和aa102-107兩個抗原表位。aa86-93是Cap蛋白中PCV2a和PCV2b兩個基因型間差異最明顯的氨基酸序列，可能是區(qū)別PCV2兩種基因型的靶標(biāo)片段及特異性表位。aa102-107與PCV2細胞受體硫酸乙酰肝素潛在的結(jié)合位點末端序列 aa98-103部分重疊，而PCV2是通過Cap蛋白與受體硫酸乙酰肝素和硫酸軟骨素 B的糖胺聚糖結(jié)合而完成入胞過程的[37]，所以針對此表位的單抗可能可以影響PCV2的吸附及入胞[38]。

在PCV感染的早期，Cap蛋白定位于核仁，而后進入核質(zhì)，說明 Cap蛋白可在細胞不同區(qū)域之間穿梭，這與只定位于核質(zhì)的 Rep蛋白不同[26]。在 PCV2與宿主細胞相互作用的研究過程中，研究人員迄今發(fā)現(xiàn)了11個能與Cap蛋白互作的宿主細胞蛋白，包括補體因子C1qB、細胞粘附分子 P-selectin、makorin環(huán)指蛋白 1(MKRN1)、受體蛋白補充組件的球狀頭部 C1q(gC1qR)、核小體組裝蛋白1 (NAP1)、前列腺凋亡反應(yīng)蛋白4 (Par-4)、核仁磷酸蛋白1 (NPM1)、熱休克蛋白 40 (Hsp40)、細胞骨架蛋白α-tubulin、熱休克蛋白70 (Hsp70)[29,39-40]和我們實驗室最近發(fā)現(xiàn)的胞質(zhì)動力蛋白 IC1亞基[41]。另有研究表明，Cap蛋白在體外能與 Rep蛋白互作，甚至Cap蛋白之間也能發(fā)生互作[42]，我們實驗室最近研究發(fā)現(xiàn) Rep蛋白和ORF3蛋白具有干擾 Cap蛋白誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生保護性免疫反應(yīng)的能力[43]。

2.3 ORF3編碼蛋白

ORF3疊加于ORF1中，但轉(zhuǎn)錄方向相反。PCV1和 PCV2的 ORF3序列大小不一樣，在PCV1中為621 bp，在PCV2中只有315 bp。2005年，Liu等首次通過實驗證明ORF3編碼蛋白是PCV2復(fù)制非必需的，但是它能通過活化caspase-8和caspase-3通路來誘導(dǎo)細胞凋亡[44]。隨后的研究表明，ORF3蛋白能與pPirh2特異性結(jié)合并導(dǎo)致 p53聚集從而誘發(fā)細胞調(diào)亡[45-46]。動物試驗表明ORF3與PCV2的致病性相關(guān)[47-48]，且ORF3能提高病毒在體內(nèi)外的散播[49]。但是，我們實驗室構(gòu)建的ORF3缺失PCV2感染性克隆未能在細胞上拯救出病毒，ORF3是否在PCV2的復(fù)制中發(fā)揮作用有待進一步實驗[50]。最近，Choi等研究發(fā)現(xiàn)在 PCV2感染的早期階段，ORF3蛋白能促進蛋白酶體降解RGS16并促使豬上皮細胞分泌 IL-6、IL-8等細胞因子，這提示ORF3蛋白可能與PCV2引起的慢性炎癥反應(yīng)有關(guān)[51]。

2.4 ORF4編碼蛋白

ORF4基因完全疊加在ORF3基因中，且轉(zhuǎn)錄方向與 ORF3一致，我們實驗室分別從蛋白和轉(zhuǎn)錄本水平驗證了PCV2 ORF4基因的轉(zhuǎn)錄和表達，其轉(zhuǎn)錄本為180 bp，并證明ORF4不是PCV2在體內(nèi)外復(fù)制所必需的，ORF4缺失PCV2能夠誘發(fā)感染細胞更高水平的 caspase-3、8、9活性，提示ORF4蛋白與凋亡抑制相關(guān)，是PCV2致病性的負調(diào)控基因[52]。隨后，Gao等用RACE技術(shù)確定了ORF4的全長mRNA為355 bp[53]，并驗證了ORF4編碼蛋白不是PCV2復(fù)制所必需的，但卻在感染的早期階段抑制病毒的復(fù)制，ORF4編碼蛋白通過抑制ORF3的轉(zhuǎn)錄來抑制細胞凋亡作用[54]。

3 PCV2對免疫系統(tǒng)的影響

PCV2是PCV2-SD的主要誘因，PCV2-SD患豬的最主要特征是淋巴結(jié)損耗。研究表明，淋巴結(jié)損耗會影響 B細胞、T細胞和 NK細胞[55-57]，且PCV2-SD患豬的外周血中性粒細胞和淋巴細胞的相對比例與健康豬是相反的，說明 PCV2的感染會對宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生巨大的影響[58]。

PCV2很容易侵犯宿主先天免疫系統(tǒng)的單核/巨噬細胞系統(tǒng)和樹突狀細胞，但是PCV2在巨噬細胞中復(fù)制非常緩慢，在樹突狀細胞中基本不復(fù)制，PCV2與這些細胞共存，不被降解，不被遞呈，也不引起細胞凋亡，極有可能PCV2僅是利用這些細胞作為自己在宿主體內(nèi)散播的載體，這可能與 PCV2的免疫逃避機制相關(guān)[27,59]。PCV2感染巨噬細胞后雖然不會引起細胞凋亡，但是會降低其殺微生物的能力。除此之外，感染 PCV2的肺泡巨噬細胞會產(chǎn)生高水平TNF-α和IL-8，同時上調(diào)中性粒細胞趨化因子Ⅱ、粒細胞集落刺激因子和單核細胞趨化蛋白1的水平[60]。

研究表明，PCV2感染能提高宿主淋巴組織和外周血單核細胞中 IL-10的表達水平[61]，IL-10能夠抑制活化的T細胞產(chǎn)生細胞因子，抑制NK細胞活性，干擾NK細胞和巨噬細胞產(chǎn)生細胞因子。據(jù)報道病毒的持續(xù)感染或慢性感染會導(dǎo)致IL-10的高水平表達，IL-10表達水平的提高導(dǎo)致 IL-12等細胞因子分泌減少從而誘導(dǎo)免疫抑制，阻礙病毒清除[62]。PCV2感染中IL-10高水平的表達提示 IL-10誘導(dǎo)的免疫抑制在PCV2的致病和持續(xù)性感染中扮演重要角色[63]。Crisci等發(fā)現(xiàn)在PCV2-SD患豬的脾臟中，IL-10表達上調(diào)都位于 T細胞富集區(qū)，而很少位于 B細胞或巨噬細胞富集區(qū)，這有利于 IL-10對 T細胞的調(diào)節(jié)，誘導(dǎo)下游免疫抑制[64]。有趣的是，在感染 PCV2的細胞中并沒有檢測到高水平的IL-10，而在感染細胞周圍的細胞中 IL-10的表達水平非常高，這可能是旁分泌作用導(dǎo)致的[63]。除了IL-10以外，PCV2還能誘導(dǎo)IL-1β和IL-8的產(chǎn)生，但是對 IL-2、IL-4和 IFN-γ的表達具有抑制作用，說明 PCV2的感染影響了患豬的免疫功能[61,65]。

在 PCV2感染豬體實驗中，中和抗體一般在接種后4周產(chǎn)生[66]，中和抗體的水平與PCV2的復(fù)制相關(guān)。Meerts等發(fā)現(xiàn)，在中和抗體和IFN-γ水平很高的豬體中，PCV2的病毒載量很低；而在中和抗體和IFN-γ水平很低的豬體中，PCV2的病毒載量很高，提示中和抗體在清除宿主病毒中起著很重要的作用[67]。在PCV2-SD患豬體內(nèi)往往不能產(chǎn)生特異性中和抗體或抗體水平很低，這可能導(dǎo)致病毒在體內(nèi)大量積聚[68]，總之，體液免疫受損，特別是中和抗體反應(yīng)的失能可能是導(dǎo)致PCV2-SD的重要原因。

淋巴細胞的活化是 PCV2在體內(nèi)增殖所必需的，免疫刺激能促進 PCV2的增殖，這些現(xiàn)象說明 PCV2能利用天然免疫系統(tǒng)促進自身的增殖，但同時它又破壞宿主免疫系統(tǒng)，影響關(guān)鍵天然免疫細胞的功能，造成免疫抑制。PCV2究竟如何導(dǎo)致PCV2-SD的發(fā)生？哪些因子在這個過程中起著作用？淋巴系統(tǒng)的損傷又是如何造成的？解決這些問題并不容易，仍然需要科學(xué)家們進一步探索。

4 技術(shù)防控

4.1 診斷與檢測技術(shù)

PCV2單獨感染時常呈現(xiàn)亞臨床感染狀態(tài)，混合感染時又與其他共感染病原導(dǎo)致的臨床癥狀及器官病變十分相似，僅依靠臨床和病理學(xué)診斷很難準確檢測該病。國內(nèi)外學(xué)者對 PCV2的診斷與檢測技術(shù)投入了大量的研究，并取得了很大的進步，這些技術(shù)大致可以分為病原學(xué)檢測技術(shù)和血清學(xué)檢測技術(shù)。

PCV2病原學(xué)檢測技術(shù)主要有 PCR技術(shù)、原位雜交技術(shù)和核酸探針技術(shù)。PCR技術(shù)具有快速、簡便、特異性強的優(yōu)點，是實驗室最常用的檢測 PCV2病原的方法。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，常規(guī)PCR和基于此的多重PCR、競爭PCR、熒光定量PCR等檢測PCV2的PCR檢測技術(shù)被不斷建立。1999年，Larochelle等應(yīng)用建立多重 PCR方法檢測了加拿大地區(qū) 1994–1998年間的42份病料，此法成功鑒別了每份樣品中PCV的型[69]。2000年，Liu等建立了檢測感染仔豬樣品中PCV基因的競爭PCR方法，此法不僅能夠區(qū)分PCV1和PCV2，還能確定病毒的拷貝數(shù)量[70]。Mcintosh等建立了綠色熒光實時PCR方法來檢測PCV2，運用該方法成功地從血清、糞便、腸系膜淋巴結(jié)、心肌層、肝臟、腎臟中檢測出PCV2[71]。除此之外，基于PCR技術(shù)的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(LAMP)操作簡便，非常適合基層操作，我們實驗室 Qiu等建立的LAMP方法能準確鑒別PCV2a和PCV2b，具有很好的特異性、靈敏性和穩(wěn)定性[72]。2007年，Pérez-Martín等建立了檢測病料中PCV2的原位雜交方法[73]，同年，國內(nèi)姚鑫等利用原位雜交技術(shù)分析了 PCV2在人工感染仔豬主要組織中的分布，此法具有良好的敏感型與特異性，可用于 PCV2的實驗室診斷和感染靶細胞的定位[74]。核酸探針技術(shù)是一種快速、可靠、敏感度高的檢測 PCV2的方法，姜永厚等結(jié)合 PCR方法和DNA-DNA雜交技術(shù)建立的PCV2檢測與分型寡核苷酸芯片可以準確鑒別PCV病毒基因型，其靈敏度是凝膠電泳的 5倍[75]。肖馳等根據(jù)PRRSV、CSFV、PCV2的序列制成相應(yīng)探針并構(gòu)建的DNA芯片具有特異性高、靈敏度高和可重復(fù)利用的優(yōu)點，能夠同時檢測PRRSV、CSFV和PCV-2感染[76]。

血清學(xué)檢測技術(shù)主要有間接免疫熒光(Indirect immunofluorescence assay，IFA)、免疫過氧化物酶單層細胞試驗 (Immunoperoxidase monolayer assay，IPMA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和膠體金診斷方法等。1998年，Allan等建立了IFA方法用于PCV2感染豬的檢測[77]。1998年，Ellis等建立了用于檢測 PCV2感染豬的 IPMA方法[78]。2007年，劉長明等建立了用于檢測PCV2血清抗體的IPMA[79]。ELISA檢測方法具有快速、簡單、敏感性高、特異性強又易于標(biāo)準的優(yōu)點，為最常用的血清學(xué)檢測技術(shù)，用于檢測抗體的ELISA有間接ELISA、競爭ELISA和阻斷ELISA 3種。2000年，Walker等用細胞培養(yǎng)PCV2作為抗原，以PCV2單抗作為競爭抗體成功建立了檢測PCV2抗體的競爭ELISA方法，結(jié)果顯示此法比 IFA更敏感，具備大規(guī)模檢測PCV2抗體的條件[80]。2002年，Nawagitgul等建立了分別基于PCV2病毒粒子和 Cap蛋白為抗原的間接ELISA方法檢測PCV2抗體，結(jié)果顯示兩者的敏感性、特異性和準確性相似[81]。我們實驗室 Shang等用大腸桿菌表達的核定位信號缺失 Cap蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA方法檢測 PCV2抗體，研制出了我國第一個獲得國家批準生產(chǎn)的商品化 PCV2 ELISA抗體檢測試劑盒[82]。除了以上這些傳統(tǒng)的PCV2檢測技術(shù)，最近Hu等應(yīng)用表面等離子共振技術(shù)檢測液體樣本中的 PCV2含量的方法[83]。Yang等進行了將 PCV2特異性的單域抗體融合于堿性磷酸酶作為新型的檢測試劑的探索[84]。

4.2 免疫預(yù)防

控制病毒性疾病最好的方法是使用安全有效的疫苗。自2004年第一個PCV2疫苗在法國和德國生產(chǎn)使用以來，商品化的圓環(huán)病毒疫苗已在世界各地豬場廣泛使用。亞單位疫苗、PCV1-2嵌合滅活苗和PCV2滅活苗等在歐洲、北美、韓國等地區(qū)都取得了很好的防疫效果。近年來，中國政府和養(yǎng)殖企業(yè)對PCV2-SD逐漸關(guān)注，我國浙江大學(xué)、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、哈爾濱獸醫(yī)研究所等單位已成功開發(fā)出 5種全病毒滅活疫苗，這些疫苗為控制我國的PCV2-SD作出了重要貢獻。與此同時，基于大腸桿菌、桿狀病毒、偽狂犬病毒及腺病毒等載體的PCV2疫苗研究都取得了重要進展。Yin等在大腸桿菌表達系統(tǒng)獲得了 Cap蛋白組裝的病毒樣顆粒[85-86]；Fan等在昆蟲細胞中獲得了Cap蛋白組裝的病毒樣顆粒，動物實驗證明其能在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生較好的免疫反應(yīng)[87-88]。最新研究顯示將poIFN-γ與cap基因在桿狀病毒載體串聯(lián)表達也能誘導(dǎo)小鼠體產(chǎn)生良好的免疫保護作用[89]。最近，武漢中博股份有限公司利用桿狀病毒載體研發(fā)的 PCV2滅活疫苗取得了國家新獸藥證書。除此以外，以偽狂犬病毒、腺病毒為載體的 PCV2疫苗試驗也在不同的實驗室進行[90-94]，這些研究為 PCV2基因工程疫苗的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。

總之，雖然使用疫苗使PCV2-SD得到了一定程度的遏制，但由于 PCV2許多基本特性和致病機理不清，加上臨床上 PCV2變異速度的加快、共感染問題愈加嚴重，未來PCV2-SD的防控面臨著極大的挑戰(zhàn)，因此，PCV2感染的研究與PCV2-SD新型控制技術(shù)的開發(fā)任重道遠。

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