• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落分布

    2015-02-13 01:16:19胡常巨熊金波陳和平崔永平朱建林張德民
    生態(tài)學報 2015年24期
    關(guān)鍵詞:象山港養(yǎng)殖區(qū)浮游

    胡常巨,熊金波,陳和平,,王 凱,葉 然,崔永平,朱建林,張德民,*

    1寧波大學海洋學院,寧波 315211 2寧波大學建筑工程與環(huán)境學院,寧波 315211 3寧波海洋環(huán)境監(jiān)測中心站,寧波 315012

    象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落分布

    胡常巨1,熊金波1,陳和平1,2,王 凱1,葉 然3,崔永平3,朱建林2,張德民1,*

    1寧波大學海洋學院,寧波 315211 2寧波大學建筑工程與環(huán)境學院,寧波 315211 3寧波海洋環(huán)境監(jiān)測中心站,寧波 315012

    近海集約化養(yǎng)殖是導致我國近海污染的主要來源之一。浮游細菌在近海生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)過程中發(fā)揮重要作用,研究海洋浮游細菌群落對養(yǎng)殖活動的響應,對于指示和評價海水養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)健康具有重要意義。采集了象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)3個深度,包括表層(0.5m)、中層(2.5m)、底層(8.0m)的水樣,利用焦磷酸測序技術(shù)測定16S rRNA 基因,研究浮游細菌的群落結(jié)構(gòu)和多樣性。結(jié)果表明:網(wǎng)箱養(yǎng)殖活動不僅使得附近區(qū)域水體理化性質(zhì)發(fā)生改變,如化學需氧量濃度顯著高于非養(yǎng)殖區(qū)域,而且顯著地(P<0.05)改變了浮游細菌的群落結(jié)構(gòu),但不同深度間群落結(jié)構(gòu)和多樣性的差異不顯著。網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)中主要浮游細菌類群為α-變形菌(Alphaproteobacteria)、γ-變形菌(Gammaproteobacteria)、擬桿菌(Bacteroidetes)、放線菌(Actinobacteria)、β-變形菌(Betaproteobacteria)、ε-變形菌(Epsilonproteobacteria)和其它變形菌(Unclassified Proteobacteria),占細菌總序列數(shù)的98.64%。有些細菌類群的平均相對豐度從網(wǎng)箱區(qū)到非養(yǎng)殖區(qū)差異顯著,如擬桿菌(P<0.01)和放線菌(P<0.05)顯著降低,而γ-變形菌(P<0.05)顯著增加。相似度分析表明γ-變形菌、α-變形菌和擬桿菌是造成網(wǎng)箱區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)群落差異的主要類群,對群落差異總貢獻率達到45.02%。偏冗余分析表明,影響細菌群落分布的主要環(huán)境因子有化學需氧量、磷酸鹽、銨鹽和總有機碳,共解釋38.18%的群落變異,空間距離單獨解釋10.66%的群落變異。實驗結(jié)果表明,養(yǎng)殖活動導致浮游細菌群落的改變, 其中擬桿菌、放線菌和γ-變形菌的豐度顯著變化,可能用于評價養(yǎng)殖水體的水質(zhì)狀況。

    浮游細菌;群落組成;網(wǎng)箱養(yǎng)殖;環(huán)境因子

    海產(chǎn)品需求急劇增長和海洋捕撈量逐年下降,刺激了近海集約化養(yǎng)殖技術(shù)的迅速發(fā)展,其中網(wǎng)箱養(yǎng)殖占據(jù)了重要的地位[1]。近年來海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速,常伴隨過量的飼料投放和抗生素使用,給近海生態(tài)環(huán)境帶來嚴重危害[2-3]。同時,因網(wǎng)箱數(shù)量和養(yǎng)殖密度的增加致使養(yǎng)殖病害爆發(fā)頻繁[4],成為養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。

    在養(yǎng)殖環(huán)境中,浮游細菌既是各種有機物質(zhì)的分解者和轉(zhuǎn)化者,又是物質(zhì)和能量的貯存者,在物質(zhì)循環(huán)和能量流動中具有無可替代的作用[5-6]。同時,有些細菌還是近海養(yǎng)殖的致病菌,如弧菌是最常見的條件致病菌之一。在養(yǎng)殖環(huán)境條件惡化時,弧菌大量增殖,可導致養(yǎng)殖生物感染發(fā)病[7-8]。我們的前期工作發(fā)現(xiàn),浮游細菌的群落組成與對蝦養(yǎng)殖塘的健康狀況密切相關(guān)[9],且細菌群落的變化趨勢是可以預測的[10]。目前有大量研究表明微生物是以群落的形式整體承擔重要的生態(tài)功能,群落響應可以綜合全面地反映環(huán)境擾動[9],如微生物群落結(jié)構(gòu)能對水溫、pH值、溶解氧、氨氮、磷酸鹽、總有機碳、化學需氧量和深度等因素的變化產(chǎn)生快速響應[11-15]。因此,在近海養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中,水體細菌的群落結(jié)構(gòu)和多樣性有可能作為評價海水養(yǎng)殖生態(tài)系健康和穩(wěn)定的重要指標[16-17]。

    象山港是浙江省重要的養(yǎng)殖基地[18]。然而,以往對象山港生態(tài)環(huán)境的報道多以潮間帶生物、浮游動植物和底棲動物為主,對養(yǎng)殖環(huán)境中微生物的研究也主要集中在底泥細菌群落以及水體中浮游細菌的數(shù)量方面[3,18-21],有關(guān)浮游細菌群落結(jié)構(gòu)方面的研究也較少。本研究通過16S rRNA基因焦磷酸測序技術(shù)研究象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖和非養(yǎng)殖區(qū)的浮游細菌群落,比較不同水深度下的細菌群落結(jié)構(gòu),獲得驅(qū)動浮游細菌群落結(jié)構(gòu)變異的環(huán)境因子,初步揭示了浮游細菌群落對養(yǎng)殖擾動的響應規(guī)律。結(jié)合不同細菌類群的功能,通過群落組成變化推測生態(tài)功能變化,可為網(wǎng)箱養(yǎng)殖生態(tài)健康提供評價和維護依據(jù)。

    1 實驗方法

    1.1 實驗設(shè)計和水樣采集

    象山港位于浙江省寧波市的東部,為東北-西南向的狹長形半封閉海灣。為研究養(yǎng)殖活動對浮游細菌群落的影響,2012年4月10日,選取位于象山港中西滬港內(nèi)網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)(121°45′9.935″ E,29°32′20.472″ N)和非養(yǎng)殖區(qū)(121°46′10.056″ E,29°36′4.356″ N)兩個站位,其具體時間為15:40和16:10,潮位均為低平一落,兩位點相距7km。養(yǎng)殖區(qū)面積約1.1km2,擁有海水網(wǎng)箱2000余只,網(wǎng)箱規(guī)格為3m × 3m × 6m,主要養(yǎng)殖種類為大黃魚和鱸魚,平均放養(yǎng)密度為3000尾/網(wǎng)箱,養(yǎng)殖周期為2—3a。每個區(qū)域分別采集表(水深0.5m)、中(水深2.5m)、底(水深8m)3個深度的水樣3L。

    每個點位設(shè)置兩個重復。采集的水樣置于預先滅菌容器中存于冰盒,4h內(nèi)運回實驗室進行檢測分析。1L水樣用于提取細菌總DNA,剩余水樣用于水質(zhì)指標測定。

    1.2 DNA提取

    分別取各樣品1L水樣,用經(jīng)滅菌處理的100μm孔徑的尼龍布預過濾,后用0.2μm孔徑的聚碳酸酯膜(Millipore)過濾。濾膜在無菌剪刀剪碎后用Power Soil?DNA試劑盒(Mobio)提取收集物的總DNA。用NanoDrop ND-1000型分光光度計測定DNA濃度和純度。抽提后的DNA于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 細菌16S rRNA基因擴增和454測序

    PCR擴增16S rRNA基因的V1-V3可變區(qū)(27F:AGAGTTTGATCMTGGCTCAG和519R:GWATTACCGCGGCKGCTG),其中正向引物上帶有10個堿基的barcode序列,用于區(qū)分不同樣品,DNA模板用量為50ng,在50μL反應體系擴增。每個樣品設(shè)置3個PCR重復,以降低擴增造成的偏差。PCR反應條件如下:94℃變性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,30個循環(huán),72℃延伸10min。擴增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。將每個樣品的重復擴增產(chǎn)物混合后純化(TaKaRa Biotech,Japan)。最后所有樣品的PCR產(chǎn)物等摩爾量混合,在羅氏FLX 454儀器上測序(Roche Diagnostics,Branford,CT,USA)。

    1.4 測序數(shù)據(jù)處理

    利用Qiime(Quantitative Insights Into Microbial Ecology,http://qiime.org)流程對下機測序數(shù)據(jù)進行樣品分裝、去嵌合體和質(zhì)量篩選;利用Uclust將相似性大于97%的序列歸為同一個分類操作單元(Operational Taxonomic Units,OTUs)[22]。選取每個OTU中豐度最高的序列作為代表序列[23],通過 Greengenes數(shù)據(jù)庫中對比獲得OTUs的分類地位信息[24]。為避免測序深度不同造成的偏差,每個樣品隨機選取5700條序列(樣品中最低測度深度)進行后續(xù)分析。

    1.5 數(shù)據(jù)分析

    用R軟件(v.2.11.0)中vegan軟件包計算養(yǎng)殖水環(huán)境中浮游細菌群落的多樣性,包括多樣性指數(shù)(Shannon Wiener)和均勻度指數(shù)(Pilou′s Evenness)。應用冗余分析方法(Redundancy analysis,RDA)分析細菌群落與環(huán)境因子之間的關(guān)系[25],同時采用偏冗余分析(Partial redundancy analysis,pRDA),計算出水體理化因子和空間距離對群落變異的相對貢獻。

    用Past(v.2.03)軟件中非參數(shù)多維度法(Non-metric multidimensional scaling,NMDS)分析浮游細菌的群落組成,將各樣品浮游細菌群落組成在二維圖上可視化。NMDS中,一般采用壓力系數(shù)(Stress)評定所得到的多維構(gòu)型與實際數(shù)據(jù)之間的適合度,壓力系數(shù)越小,表示適合度越高[25]。根據(jù)Kruskal提出的判斷標準,壓力系數(shù)<0.2,適合度較好,聚類分析可靠[26]。應用群落相似性檢驗分析養(yǎng)殖和水深對浮游細菌群落分布的影響。利用SIMPER(Similarity percentage)分析找出對群落差異貢獻度高的OTUs。

    2 結(jié)果

    2.1 水體理化性質(zhì)

    主要結(jié)果表明:在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)中,水溫、磷酸鹽、總磷、亞硝酸鹽和銨鹽的均值較高,化學需氧量顯著高于非養(yǎng)殖區(qū)(t檢驗,P=0.004);與網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)相比,非養(yǎng)殖區(qū)中葉綠素a和總有機碳較高(表1)。在不同水體中,化學需氧量均隨水深逐漸遞減,而總有機碳隨水深逐漸增加,其它環(huán)境因子在水深層次上分布規(guī)律不明顯(表1)。

    表1 網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)各采樣點水體主要理化參數(shù)Table 1 The main physical and chemical properties of the water samples in cage culture and non-cultured areas

    COD:Chemical oxygen demand;TP:Total phosphorus;TN:Total nitrogen;TOC:Total organic carbon;Chl a:Chlorophyll a;Y:養(yǎng)殖區(qū)Cage culture area;N:非養(yǎng)殖區(qū)Non-cultured area;S:表層Surface;M:中層Middle;B:底層Bottom

    圖1 各樣品的優(yōu)勢菌門(綱)平均相對豐度圖 Fig.1 Relative abundances of the dominant phyla or classes in water samplesY:cage culture area,養(yǎng)殖區(qū);N:non-cultured area,非養(yǎng)殖區(qū);S:surface,表層;M:middle,中層;B:bottom,底層

    2.2 浮游細菌群落組成和結(jié)構(gòu)分析

    象山港水體主要浮游細菌類群為γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)、α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、其它變形菌門(Unclassified Proteobacteria)、β-變形菌綱(Betaproteobacteria)和ε-變形菌綱(Epsilonproteobacteria),平均相對豐度分別為47.48%、39.45%、7.76%、1.32%、1.13%、0.87%和0.63%,占細菌總數(shù)的98.64%(圖1)。在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū),擬桿菌門(P=0.006)和放線菌門(P=0.015)顯著高于非養(yǎng)殖區(qū),而γ-變形菌綱(P=0.038)顯著低于非養(yǎng)殖區(qū)。在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū),α-變形菌平均相對豐度隨水深逐漸降低,而γ-變形菌綱逐漸增加;在非養(yǎng)殖區(qū),擬桿菌平均相對豐度隨水深逐漸降低(圖1)。總體而言,浮游細菌群落多樣性指數(shù)(t檢驗,P=0.790)和均勻度指數(shù)(t檢驗,P=0.587)在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)中的均值高于非養(yǎng)殖區(qū),但無顯著差異。網(wǎng)箱區(qū)中層水樣浮游細菌的多樣性指數(shù)最高,表層水最低,分別為4.808,4.104;均勻度指數(shù)也是中層水最高(0.735),表層水最低(0.652)(表2)。在非養(yǎng)殖區(qū),則是表層水多樣性最高,底層水多樣性最低,但是這些差別均不顯著(表2)。

    表2 網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)群落多樣性分析Table 2 Analysis of bacterial alpha diversity of water samples collected from cage culture and non-cultured areas

    同列中不同字母代表的值表示有顯著差異

    圖2 浮游細菌群落組成的非度量尺度分析NMDS二維圖(箭頭表示從表層到底層的變化方向)Fig.2 Two-dimensional NMDS of bacteriolplankton community compositions (The arrows representing changes from surface to bottom)NMDS: 非參數(shù)多維度法Non-metric multidimensional scaling

    2.3 浮游細菌群落組成空間分布分析

    利用NMDS分析浮游細菌群落組成,壓力系數(shù)為0.16,說明可以較好地反映各采樣點間浮游細菌群落的相似性(圖2)。各樣品在圖中的相對距離可以反映所對應的浮游細菌群落組成的相似程度[15],可將所有樣品大致分為3類,網(wǎng)箱區(qū)樣品為一類,非養(yǎng)殖區(qū)中層和底層樣品成一類,非養(yǎng)殖區(qū)表層樣品聚為一類(圖2)。此外,沿著第一排序軸網(wǎng)箱區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落分布規(guī)律均由表層向底層,具有相似的演替軌跡(圖2)。

    群落相似性檢驗分析發(fā)現(xiàn)網(wǎng)箱區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)浮游細菌群落分布差異顯著(P=0.023);不同水深層次的細菌群落差異不顯著(P=0.070),表明水深對浮游細菌群落分布影響較小。SIMPER分析表明網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落差異度為62.41。對群落差異度貢獻率較大的11個OTUs(貢獻率>1%),累積貢獻率達到45.02%,其中海單胞菌屬(Marinomonas)(2個OTUs)、褐桿菌屬(Phaeobacter)(1個OTU)、紅桿菌科(Rhodobacteraceae)(3個OTUs)、交替假單胞菌屬(Pseudoalteromonas)(1個OTU)、Sediminicolasp.(1個OTU)、鞘脂單胞菌目(Sphingomonadales)(1個OTU)、冰居菌屬(Glaciecola)(1個OTU)和弧菌科(Vibrionaceae)(1個OTU)(表3)。對造成群落差異的主要OTUs在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)進行豐度比較,發(fā)現(xiàn)黃桿菌科(Flavobacteriaceae)(t檢驗,P=0.012)和褐桿菌屬(t檢驗,P=0.041)的平均相對豐度在網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)顯著高于非養(yǎng)殖區(qū),而交替假單胞菌屬和弧菌科的平均相對豐度在非養(yǎng)殖區(qū)中較高。

    表3 網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)群落SIMPER分析Table 3 Taxonomic identities of the 11OTUs serving as indicator taxa between cage culture and non-cultured areas by SIMPER analysis

    SIMPER: Similarity percentage;OTUs: Operational Taxonomic Units

    2.4 浮游細菌群落與環(huán)境因子的關(guān)系

    圖3 網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)不同水深層次水樣浮游細菌群落與其變異驅(qū)動的主要環(huán)境因子RDA雙向排序圖Fig.3 RDA ordination biplot showed factors that driving the variation of bacterial communities between cage culture area and non-cuntured areaCOD: Chemical oxygen demand;TOC: Total organic carbon;RDA: Redundancy analysis

    3 討論與結(jié)論

    關(guān)于養(yǎng)殖活動對水體浮游細菌的影響,在群落水平上的研究還較少[3],其研究手段主要是依賴培養(yǎng)技術(shù)和基于16S rRNA基因的DGGE等分子指紋技術(shù)和克隆文庫測序方法[3,29]。這些方法費時費力,分析通量非常有限,而細菌多樣性又異常豐富,因此揭示的信息非常有限,忽略了一些具有重大功能的低豐度物種的存在[30-31]。新近出現(xiàn)的焦磷酸測序技術(shù)則將細菌的鑒定分析通量提高百萬倍,很好得解決了通量瓶頸,對細菌群落結(jié)構(gòu)信息揭示的更加全面、詳細[32-33]。本研究利用16S rRNA 基因焦磷酸測序技術(shù)分析了12個海水樣品,產(chǎn)生了110950條序列,共檢測出5752個OTUs(相當于種屬水平),每個樣品的序列數(shù)在5774—12877之間,涵蓋的OTU數(shù)平均達680—1578,為深入探究浮游細菌群落結(jié)構(gòu)與環(huán)境因子的關(guān)聯(lián)性提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

    3.1 浮游細菌多樣性與群落組成

    維持浮游細菌在養(yǎng)殖水體中的多樣性可以增強養(yǎng)殖環(huán)境生物群落生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性,減少養(yǎng)殖生物患病的風險。已有研究表明,高密度網(wǎng)箱增養(yǎng)殖活動使養(yǎng)殖區(qū)域及附近水體中的營養(yǎng)鹽和有機污染物濃度較高,對細菌具有一定的選擇作用,導致養(yǎng)殖區(qū)的細菌多樣性較低[3]。本實驗則顯示,網(wǎng)箱區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)的多樣性無顯著差異。這種差異可能是因為網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)受污染程度較低,對浮游細菌多樣性影響較小,也可能是以前研究不能檢測到稀有物種造成的。

    從浮游細菌種類組成來看,α-變形菌、γ-變形菌、擬桿菌為海水中主要的優(yōu)勢菌群,Kirchman也發(fā)現(xiàn)變形菌和擬桿菌是組成海洋異養(yǎng)細菌的兩個最大的類群[34]。在以前的象山港生態(tài)研究中,利用克隆測序方法發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢菌組成也與上述相似[35]。實驗結(jié)果顯示,從網(wǎng)箱區(qū)到非養(yǎng)殖區(qū),擬桿菌門和放線菌門的相對豐度顯著降低,而γ-變形菌綱的相對豐度增加,可能是網(wǎng)箱區(qū)域磷酸鹽、總磷濃度較高所致。有研究表明α-變性菌的相對豐度隨水體中總磷濃度增加顯著增加,擬桿菌門的相對豐度隨磷酸鹽的濃度升高而增加[36]。對東海沉積物中的微生物群落結(jié)構(gòu)研究也表明,隨著N、P污染梯度的變化,細菌群落中γ-變形菌和δ-變形菌相對豐度發(fā)生顯著變化,與污染物濃度顯著相關(guān),能夠指示環(huán)境受污染程度[28]。因此,擬桿菌門、放線菌門和γ-變形菌綱的豐度對水質(zhì)變化敏感,可能用于指示和評價海水養(yǎng)殖污染的生態(tài)效應。

    3.2 浮游細菌群落空間分布

    已有研究表明,養(yǎng)殖活動能夠改變浮游細菌群落結(jié)構(gòu)[19],本文結(jié)果也表明網(wǎng)箱區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)的群落差異顯著。Salvator等[37]對網(wǎng)箱養(yǎng)殖活動的調(diào)查也發(fā)現(xiàn):網(wǎng)箱養(yǎng)殖活動對網(wǎng)箱下微生物的影響效果顯著,但離網(wǎng)箱外50m區(qū)域受養(yǎng)殖活動影響較小。本研究中盡管養(yǎng)殖區(qū)站位和非養(yǎng)殖區(qū)站位的距離較遠,空間距離對群落變異的影響(10.66%貢獻度)小于環(huán)境因子(38.18%貢獻度)。造成群落變異的主要原因可能是養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)之間水質(zhì)差異較大,如化學需氧量有顯著差異。有研究表明,水質(zhì)情況相似的采樣點,其浮游細菌群落的組成也相似[38]。本研究還發(fā)現(xiàn)網(wǎng)箱區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落由表層向底層分布的規(guī)律一致,但水深對群落多樣性和群落結(jié)構(gòu)相似性均無顯著影響。李玉華等[38]通過對松花湖水體中不同空間分布的細菌群落結(jié)構(gòu)研究表明,水深變化對細菌群落垂直分布有重要影響。以上結(jié)果不一致性可能是由于不同深度范圍造成的,如本實驗采樣點最大水深只有8m,遠小于松花湖平均水深35m。

    劉晶晶等[3]對象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)水體中細菌分布研究表明,與養(yǎng)殖場魚類疾病相關(guān)的弧菌在網(wǎng)箱區(qū)中的數(shù)量均大于網(wǎng)箱外對照區(qū),而本文結(jié)果中,交替假單胞菌屬(Pseudoalteromonas)和弧菌科(Vibrionaceae)在非養(yǎng)殖區(qū)中的平均相對豐度較高。但同時發(fā)現(xiàn)褐桿菌屬(Phaeobacter)平均相對豐度在養(yǎng)殖區(qū)顯著高于網(wǎng)箱區(qū),而褐桿菌屬對以弧菌、交替假單胞菌等為代表的主要致病菌具有廣泛的抗菌活性譜并且能控制致病菌的繁殖[39-40]。因此,推測可能是褐桿菌屬的高豐度存在抑制了弧菌和交替假單胞菌的繁殖,具體原因和機制有待進一步研究。

    3.3 影響浮游細菌群落的主要環(huán)境因子

    冗余分析表明,化學需氧量、磷酸鹽、銨鹽和總有機碳是影響浮游細菌群落的主要環(huán)境因子。除總有機碳外,這與李秋芬等[35]應用DGGE技術(shù)對象山港中部養(yǎng)殖區(qū)細菌群落結(jié)構(gòu)特征的研究所得到的結(jié)果一致。銨鹽和磷酸鹽是調(diào)控浮游細菌群落分布的重要因子,與浮游細菌群落分布密切相關(guān)[20]。高密度的水產(chǎn)養(yǎng)殖常造成水體環(huán)境中氮、磷營養(yǎng)鹽濃度的增加[1],從而影響浮游細菌群落組成,包括條件致病菌的增殖和致病性的增加,同時增加水產(chǎn)動物對病原菌的敏感性,進而導致養(yǎng)殖病害的發(fā)生?;瘜W需氧量是衡量海水中有機質(zhì)含量的重要指標,水體中的溶解性有機物是異養(yǎng)細菌生長繁殖和生命活動最基本的營養(yǎng)源[20]。在養(yǎng)殖區(qū)中因剩余殘餌和養(yǎng)殖生物的排泄物與分泌物均含有豐富的有機質(zhì),造成養(yǎng)殖區(qū)中的化學需氧量顯著高于非養(yǎng)殖區(qū),從而影響浮游細菌群落組成的分布。在水生生態(tài)系統(tǒng)中,溶解性總有機碳是異養(yǎng)細菌重要的碳源,浮游細菌可以吸收、利用水體中的溶解性有機碳,進行二次生產(chǎn),其分布與總有機碳顯著相關(guān)[13]。有研究表明,總有機碳與有機污染物濃度存在正相關(guān)關(guān)系[41],這與本實驗結(jié)果不一致,可能是由于網(wǎng)箱區(qū)浮游植物的生長消耗了大量的總有機碳,而養(yǎng)殖動物對浮游植物的捕食,表現(xiàn)為養(yǎng)殖區(qū)的葉綠素a和總有機碳濃度較低。

    綜上所述,近海網(wǎng)箱養(yǎng)殖活動影響水質(zhì),進而改變細菌群落結(jié)構(gòu),且從表層至底層具有相似的演替規(guī)律。其中在網(wǎng)箱區(qū)增加的化學需氧量、活性磷酸鹽和銨鹽,總有機碳是驅(qū)動細菌群落變異的主要環(huán)境因子。造成群落差異的敏感類群如擬桿菌、放線菌和γ-變形菌可能用于指示和評價海水養(yǎng)殖污染程度。

    [1] Degefu F, Mengistu S, Schagerl M.Influence of fish cage farming on water quality and plankton in fish ponds: A case study in the Rift Valley and North Shoa reservoirs, Ethiopia.Aquaculture, 2011, 316(1/4): 129-135.

    [2] 王冉, 劉鐵錚, 王恬.抗生素在環(huán)境中的轉(zhuǎn)歸及其生態(tài)毒性.生態(tài)學報, 2006, 26(1): 265-270.

    [3] 劉晶晶, 曾江寧, 陳全震, 江志兵, 趙永強, 廖一波, 壽鹿, 徐曉群, 黃逸君, 杜萍.象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)水體和沉積物的細菌生態(tài)分布.生態(tài)學報, 2010, 30(2): 377-388.

    [4] 金珊, 王國良, 趙青松, 鄭天倫, 陳寅兒.海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚弧菌病的流行病學研究.水產(chǎn)科學, 2005, 24(1): 17-19.

    [5] Madoni P, Braghiroli S.Changes in the ciliate assemblage along a fluvial system related to physical, chemical and geomorphological characteristics.European Journal of Protistology, 2007, 43(2): 67-75.

    [6] Polat S, Koray T.Planktonic dinoflagellates of the northern Levantine Basin, northeastern Mediterranean Sea.European Journal of Protistology, 2007, 43(3): 193-204.

    [7] Hjelm M, Riaza A, Formoso F, Melchiorsen J, Gram L.Seasonal incidence of autochthonous antagonistic Roseobacter spp.and Vibrionaceae strains in a turbot larva (Scophthalmus maximus) rearing system.Applied and Environmental Microbiology, 2004, 70(12): 7288-7294.

    [8] Korsnes K, Nicolaisen O, Sk?r C K, Nerland A H, Bergh ?.Bacteria in the gut of juvenile cod Gadus morhua fed live feed enriched with four different commercial diets.ICES Journal of Marine Science, 2006, 63(2): 296-301.

    [9] Zhang D M, Wang X, Xiong J B, Zhu J L, Wang Y N, Zhao Q F, Chen H P, Guo A N, Wu J F, Dai H P.Bacterioplankton assemblages as biological indicators of shrimp health status.Ecological Indicators, 2014, 38: 218-224.

    [10] Xiong J B, Zhu J L, Wang K, Wang X, Ye X S, Liu L, Zhao Q F, Hou M H, Qiu Q L L, Zhang D M.The temporal scaling of bacterioplankton composition: High turnover and predictability during shrimp cultivation.Microbial Ecology, 2014: 67(2): 256-264.

    [11] Humayoun S B, Bano N, Hollibaugh J T.Depth distribution of microbial diversity in Mono Lake, a meromictic soda lake in California.Applied and Environmental Microbiology, 2003, 69(2): 1030-1042.

    [12] Yan Q Y, Yu Y H, Feng W S, Yu Z G, Chen H T.Plankton community composition in the Three Gorges Reservoir Region revealed by PCR-DGGE and its relationships with environmental factors.環(huán)境科學學報(英文版), 2008, 20(6): 732-738.

    [13] 周凱, 章潔香, 張瑜斌, 盧東偉, 丁玉靜, 孫省利.深圳灣浮游細菌生物量的時空分布及其影響因素.熱帶海洋學報, 2013, 32(3): 65-71.

    [14] 馮勝, 秦伯強, 高光.細菌群落結(jié)構(gòu)對水體富營養(yǎng)化的響應.環(huán)境科學學報, 2007, 27(11): 1823-1829.

    [15] 呂明姬, 汪杰, 范錚, 黃藝.滇池浮游細菌群落組成的空間分布特征及其與環(huán)境因子的關(guān)系.環(huán)境科學學報, 2011, 31(2): 299-306.

    [16] González N, Anadón R, Viesca L.Carbon flux through the microbial community in a temperate sea during summer: role of bacterial metabolism.Aquatic Microbial Ecology, 2003, 33(2): 117-126.

    [17] Grossart H P, Simon M.Bacterioplankton dynamics in the Gulf of Aqaba and the northern Red Sea in early spring.Marine Ecology Progress Series, 2002, 239: 263-276.

    [18] 高愛根, 楊俊毅, 陳全震, 王自磐, 張健, 董永庭, 寧修仁.象山港養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)大型底棲生物生態(tài)比較研究.水產(chǎn)學報, 2003, 27(1): 25-31.

    [19] 裘瓊芬, 張德民, 葉仙森, 鄭珍珍.象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖對近海沉積物細菌群落的影響.生態(tài)學報, 2013, 33(2): 483-491.

    [20] 楊季芳, 王海麗, 陳福生, 屠霄霞, 陳吉剛, 馮輝強.象山港海域細菌的分布特征及其環(huán)境影響因素.生態(tài)學報, 2011, 31(14): 4007-4018.

    [21] 溫丹, 張德民, 初航.網(wǎng)箱養(yǎng)殖海區(qū)底泥產(chǎn)芽孢細菌多樣性.海洋與湖沼, 2009, 40(5): 615-621.

    [22] Edgar R C.Search and clustering orders of magnitude faster than BLAST.Bioinformatics, 2010, 26(19): 2460-2461.

    [23] De Santis T Z, Hugenholtz P, Keller K, Brodie E T, Larsen N, Piceno Y M, Phan R, Andersen G L.NAST: a multiple sequence alignment server for comparative analysis of 16S rRNA genes.Nucleic Acids Research, 2006, 34(Web Server issue): W394-W399.

    [24] De Santis T Z, Hugenholtz P, Larsen N, Rojas M, Brodie E L, Keller K, Huber T, Dalevi D, Hu P, Andersen G L.Greengenes, a chimera-checked 16S rRNA gene database and workbench compatible with ARB.Applied and Environmental Microbiology, 2006, 72(7): 5069-5072.

    [25] 劉樂冕, 楊軍, 余小青, 余正, 張永雨, 田野, 張冬紅.廈門后溪流域沿城鄉(xiāng)梯度浮游細菌多樣性及其與環(huán)境因子的關(guān)系.應用與環(huán)境生物學報, 2012, 18(4): 591-598.

    [26] Kruskal J B.Multidimensional scaling by optimizing goodness of fit to a nonmetric hypothesis.Psychometrika, 1964, 29(1): 1-27.

    [27] Braak C J F,milauer P.CANOCO reference manual and CanoDraw for Windows user′s guide: software for canonical community ordination (version 4.5).Section on Permutation Methods.Microcomputer Power, Ithaca, New York, 2002.

    [28] Xiong J B, Ye X S, Wang K, Chen H P, Hu C J, Zhu J L, Zhang D M.Biogeography of the sediment bacterial community responds to a nitrogen pollution gradient in the East China Sea.Applied and Environmental Microbiology, 2014, 80(6): 1919-1925.

    [29] 楊彩霞, 王崇明, 李赟, 梁顏韜, 王娜, 蔡玉勇.應用DGGE技術(shù)分析流清河灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)細菌群落結(jié)構(gòu)的季節(jié)變化.水產(chǎn)學報, 2012, 36(3): 407-413.

    [30] Parkes R J, Cragg B A, Wellsbury P.Recent studies on bacterial populations and processes in subseafloor sediments: A review.Hydrogeology Journal, 2000, 8(1): 11-28.

    [31] Nogales B, Lanfranconi M P, Pia Villalonga J M, Bosch R.Anthropogenic perturbations in marine microbial communities.FEMS Microbiology Reviews, 2011, 35(2): 275-298.

    [32] Muyzer G, De Waal E C, Uitterlinden A G.Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA.Applied and Environmental Microbiology, 1993, 59(3): 695-700.

    [33] Kirchman D L, Cottrell M T, Lovejoy C.The structure of bacterial communities in the western Arctic Ocean as revealed by pyrosequencing of 16S rRNA genes.Environmental Microbiology, 2010, 12(5): 1132-1143.

    [34] Kirchman D L.The ecology of Cytophaga-Flavobacteria in aquatic environments.FEMS Microbiology Ecology, 2002, 39(2): 91-100.

    [35] 李秋芬, 有小娟, 張艷, 毛玉澤, 焦海峰.象山港中部養(yǎng)殖區(qū)細菌群落結(jié)構(gòu)的特征及其在生境修復過程中的變化.中國水產(chǎn)科學, 2013, 20(6): 1234-1246.

    [36] 沈燕, 高光, 湯祥明, 晁建穎.用FISH技術(shù)檢測太湖梅梁灣水體中細菌優(yōu)勢種群在冬夏兩季的變化.湖泊科學, 2010, 22(1): 57-62.

    [37] Porrello S, Tomassetti P, Manzueto L, Finoia M G, Persia E, Mercatali I, Stipa P.The influence of marine cages on the sediment chemistry in the Western Mediterranean Sea.Aquaculture, 2005, 249(1): 145-158.

    [38] 李玉華, 許其功, 趙越, 李強, 魏自民, 趙昕宇.松花湖水體中不同空間分布的細菌群落結(jié)構(gòu)分析.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報, 2013, 32(4): 764-770.

    [39] Porsby C H, Nielsen K F, Gram L.Phaeobacter and Ruegeria species of the Roseobacter clade colonize separate niches in a Danish turbot (Scophthalmusmaximus)-rearing farm and antagonize Vibrio anguillarum under different growth conditions.Applied and Environmental Microbiology, 2008, 74(23): 7356-7364.

    [40] Prado S, Montes J, Romalde J L, Barja J L.Inhibitory activity of Phaeobacter strains against aquaculture pathogenic bacteria.International Microbiology, 2010, 12(2): 107-114.

    [41] Accardi Dey A M, Gschwend P M.Assessing the combined roles of natural organic matter and black carbon as sorbents in sediments.Environmental Science and Technology, 2002, 36(1): 21-29.

    Distribution of bacterioplankton communities in cage culture and non-cultured areas of Xiangshan Bay, Ningbo, China

    HU Changju1, XIONG Jinbo1, CHEN Heping1,2, WANG Kai1, YE Ran3, CUI Yongping3, ZHU Jianlin2, ZHANG Demin1,*

    1SchoolofMarineScience,NingboUniversity,Ningbo315211,China2FacultyofArchitectural,CivilEngineeringandEnvironment,NingboUniversity,Ningbo315211,China3MarineEnvironmentalMonitoringCenterofNingbo,SOA,Ningbo315012,China

    Intensive aquaculture has been a major source of coastal pollution.Microorganisms play a critical role in primary production and biogeochemical processes such as substance cycling and energy transformation in coastal ecosystems.Bacterioplankton are considered to be a dominant group because of their many contributions to ecosystem functional processes.Studying the influences of aquaculture activities on bacterial diversity in water is significant for assessing the structure and function of mariculture ecosystems.Xiangshan Bay, an important mariculture base located in Ningbo, China, is subject to a large influx of organic matter from the rapid development of aquaculture.Thus, understanding the responsive pattern of the bacterioplankton community to aquaculture sheds light on indicating and evaluating the health status of the mariculture ecosystem.In this study, water samples were collected separately from three depths: the surface, middle, and bottom levels of the water column (corresponding to 0.5, 2.5, and 8.0m below the water surface, respectively), from a cage culture area and a non-cultured area in Xiangshan Bay, on April 10, 2012.Using the 16S rRNA gene amplicon pyrosequencing technique, we evaluated the effects of aquaculture activities on variations within bacterioplankton communities.The results showed that cage aquaculture dramatically changed the geochemical variables of water.For example, there was a substantial increase of chemical oxygen demand in the culture area.In addition, cage aquaculture significantly (P<0.05) altered the bacterioplankton community structure, although the alpha diversity was not affected.The bacterioplankton communities were very similar across the three water depths, dominated by Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Bacteroidetes, Actinobacteria, Betaproteobacteria, Epsilonproteobacteria, and Unclassified Proteobacteria, accounting for 98.64% of the total bacteria.The relative abundances of some dominant phyla were considerably different between the two investigated areas.For example, the relative abundances of Bacteroidetes and Actinobacteria were significantly lower in the non-cultured area than in the cage culture area, while that of Gammaproteobacteria was significantly higher in the non-cultured area.Similarity percentage (SIMPER) analysis further indicated that the presence of Gammaproteobacteria, Alphaproteobacteria, and Bacteroidetes taxa controlled the differences in bacterial communities between the two areas, which contributed to 45.02% of the overall dissimilarity.Redundancy analysis (RDA) showed that the bacterioplankton community variation significantly correlated with chemical oxygen demand, phosphate, ammonium, and total organic carbon.Partial redundancy analysis (pRDA) was conducted in order to quantify the effect of the geographic distance between the two investigated areas on the differences between the bacteria communities.The results showed that the above-mentioned environmental factors in total contributed 38.18% of the bacteria community variation, while the geographic distance contributed only 10.66%, indicating that the influence of environmental factors on bacterial communities was much greater than that of the geographic distance.Overall, this study demonstrated that coastal aquaculture could cause eutrophication of rearing water, which, in turn, drove the variation of the bacterioplankton community, and remarkably altered the relative abundances of Bacteroidetes, Actinobacteria, and Gammaproteobacteria.The sensitivity of these bacteria to the concentration changes of pollutants, represented by nitrogen and phosphorus, indicates their potential usage in assessing the quality of aquaculture water and the health and stability of an aquaculture ecosystem.

    bacterioplankton;community composition;cage culture;environmental factors

    國家863資助項目(2012AA092000);寧波大學自然科學基金(XYL14004)

    2014-06-17; < class="emphasis_bold">網(wǎng)絡出版日期:

    日期:2015-05-21

    10.5846/stxb201406171263

    *通訊作者Corresponding author.E-mail: zhangdemin@nbu.edu.cn

    胡常巨,熊金波,陳和平,王凱,葉然,崔永平,朱建林,張德民.象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)與非養(yǎng)殖區(qū)的細菌群落分布.生態(tài)學報,2015,35(24):8053-8061.

    Hu C J, Xiong J B, Chen H P, Wang K, Ye R, Cui Y P, Zhu J L, Zhang D M.Distribution of bacterioplankton communities in cage culture and non-cultured areas of Xiangshan Bay, Ningbo, China.Acta Ecologica Sinica,2015,35(24):8053-8061.

    猜你喜歡
    象山港養(yǎng)殖區(qū)浮游
    廣西北部灣近岸養(yǎng)殖區(qū)表層沉積物和養(yǎng)殖生物體重金屬污染狀況及生態(tài)風險評價*
    廣西科學(2022年5期)2022-12-07 09:36:24
    象山港周邊主要入海污染物特征研究
    海洋通報(2022年2期)2022-06-30 06:07:20
    江蘇近海紫菜養(yǎng)殖區(qū)的空間擴張模式研究
    海洋通報(2021年2期)2021-07-22 07:55:30
    浞河浮游藻類的調(diào)查研究與水質(zhì)評價
    《浮游》
    流行色(2019年10期)2019-12-06 08:13:26
    浮游藻類在水體PAHs富集與降解中的研究
    象山港海域生態(tài)分區(qū)研究
    象山港海灣生態(tài)系統(tǒng)服務價值評估
    養(yǎng)殖活動對超微型浮游生物分布影響的研究*
    海洋與湖沼(2014年6期)2014-03-19 12:17:34
    圍墾對椒江口夏季浮游植物群落結(jié)構(gòu)和多樣性的影響
    精品久久久久久电影网| 日日爽夜夜爽网站| 99国产精品免费福利视频| 又紧又爽又黄一区二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久久久久久精品吃奶| 国产免费现黄频在线看| 午夜免费观看网址| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利影视在线免费观看| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产av精品麻豆| 国产不卡一卡二| 国产男靠女视频免费网站| 午夜影院日韩av| 成年动漫av网址| 欧美激情 高清一区二区三区| 不卡一级毛片| 国产亚洲一区二区精品| 国产高清视频在线播放一区| 国产一区二区三区视频了| 免费看a级黄色片| 91字幕亚洲| 欧美不卡视频在线免费观看 | 老汉色∧v一级毛片| 国产视频一区二区在线看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 动漫黄色视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产在线一区二区三区精| 一a级毛片在线观看| 国产淫语在线视频| 亚洲,欧美精品.| 国产一卡二卡三卡精品| 在线永久观看黄色视频| 超碰97精品在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 脱女人内裤的视频| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品乱久久久久久| √禁漫天堂资源中文www| 久久午夜综合久久蜜桃| 看黄色毛片网站| 亚洲av片天天在线观看| 国产在视频线精品| 不卡av一区二区三区| 色播在线永久视频| 看免费av毛片| 黑人操中国人逼视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲在线自拍视频| 久久ye,这里只有精品| 午夜久久久在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 人人澡人人妻人| 亚洲成人手机| 精品福利观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 嫁个100分男人电影在线观看| 操出白浆在线播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 午夜老司机福利片| e午夜精品久久久久久久| av片东京热男人的天堂| svipshipincom国产片| 母亲3免费完整高清在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 777米奇影视久久| 妹子高潮喷水视频| 视频区图区小说| 亚洲精品一二三| 咕卡用的链子| 最新在线观看一区二区三区| 极品少妇高潮喷水抽搐| av天堂久久9| 日本精品一区二区三区蜜桃| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲国产看品久久| 久久九九热精品免费| 女同久久另类99精品国产91| av超薄肉色丝袜交足视频| 9191精品国产免费久久| 在线观看免费高清a一片| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 免费高清在线观看日韩| 日韩欧美国产一区二区入口| 超色免费av| 成人黄色视频免费在线看| 老司机靠b影院| 在线观看免费午夜福利视频| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲黑人精品在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 性少妇av在线| 欧美乱码精品一区二区三区| 99热只有精品国产| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产三级黄色录像| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产精品一区二区精品视频观看| 一区福利在线观看| 精品久久久久久电影网| 日韩欧美免费精品| 国产成人欧美在线观看 | 国产高清国产精品国产三级| 成年人午夜在线观看视频| 欧美在线一区亚洲| 又大又爽又粗| 美女国产高潮福利片在线看| 精品国产一区二区三区四区第35| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| a级毛片在线看网站| 久久久精品区二区三区| 极品教师在线免费播放| 国产男女内射视频| videosex国产| 国产精品久久电影中文字幕 | 日本vs欧美在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 丰满迷人的少妇在线观看| 高清av免费在线| 久久香蕉激情| 无人区码免费观看不卡| 国产成人影院久久av| 精品福利永久在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 天天添夜夜摸| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 午夜福利一区二区在线看| 国产主播在线观看一区二区| 午夜视频精品福利| 国产人伦9x9x在线观看| 一级作爱视频免费观看| 亚洲五月天丁香| 夜夜爽天天搞| cao死你这个sao货| 亚洲七黄色美女视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 两个人免费观看高清视频| 91精品三级在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜福利一区二区在线看| 黄片小视频在线播放| avwww免费| avwww免费| 免费少妇av软件| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久久国产欧美日韩av| 麻豆乱淫一区二区| 成年版毛片免费区| 中文字幕精品免费在线观看视频| av天堂在线播放| 亚洲国产精品sss在线观看 | 最新的欧美精品一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 夫妻午夜视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 三上悠亚av全集在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 热99国产精品久久久久久7| 9色porny在线观看| 日本wwww免费看| 男人的好看免费观看在线视频 | svipshipincom国产片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩欧美国产一区二区入口| 搡老岳熟女国产| 亚洲av美国av| 国产成人精品久久二区二区91| a在线观看视频网站| av福利片在线| 最新美女视频免费是黄的| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲片人在线观看| 在线天堂中文资源库| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 亚洲专区字幕在线| 国产99白浆流出| av不卡在线播放| 成人18禁在线播放| 国产区一区二久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 又大又爽又粗| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | xxxhd国产人妻xxx| 无限看片的www在线观看| 老熟女久久久| 悠悠久久av| 无遮挡黄片免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产精品亚洲一级av第二区| 老司机靠b影院| 免费黄频网站在线观看国产| 两个人免费观看高清视频| 久久精品国产清高在天天线| 51午夜福利影视在线观看| 91av网站免费观看| 免费观看人在逋| 免费观看人在逋| 夜夜爽天天搞| 欧美乱妇无乱码| 麻豆国产av国片精品| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线观看日韩欧美| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 正在播放国产对白刺激| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲美女黄片视频| 久久国产精品大桥未久av| 热99re8久久精品国产| 窝窝影院91人妻| 中文字幕av电影在线播放| 搡老岳熟女国产| 国产精品 国内视频| 成人影院久久| 亚洲色图av天堂| 国产一区二区激情短视频| 免费不卡黄色视频| 亚洲国产精品合色在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲精品乱久久久久久| av免费在线观看网站| 成人免费观看视频高清| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲专区国产一区二区| 久久久国产精品麻豆| 搡老乐熟女国产| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 99re在线观看精品视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产亚洲精品一区二区www | 高清av免费在线| 成年人午夜在线观看视频| av视频免费观看在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲国产精品合色在线| 久久久国产精品麻豆| 99热网站在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 老司机影院毛片| av片东京热男人的天堂| 久久久久久人人人人人| 久久中文字幕一级| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲专区国产一区二区| 91av网站免费观看| 人人澡人人妻人| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精华一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品一二三| 国产麻豆69| 亚洲精品国产区一区二| 两性夫妻黄色片| 国产精品99久久99久久久不卡| 91成年电影在线观看| 制服人妻中文乱码| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产亚洲欧美98| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜福利在线免费观看网站| 99精品在免费线老司机午夜| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日日爽夜夜爽网站| 国产一区二区激情短视频| 亚洲情色 制服丝袜| 久久狼人影院| 高清av免费在线| 亚洲精品在线观看二区| 18在线观看网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 很黄的视频免费| 一二三四在线观看免费中文在| 精品视频人人做人人爽| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲人成77777在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲黑人精品在线| 婷婷丁香在线五月| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜免费成人在线视频| 91成人精品电影| 午夜免费观看网址| 欧美在线一区亚洲| 午夜精品在线福利| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品永久免费网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品人妻1区二区| 久久人人97超碰香蕉20202| 男女午夜视频在线观看| 另类亚洲欧美激情| 大陆偷拍与自拍| 一区在线观看完整版| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91老司机精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜成年电影在线免费观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 97人妻天天添夜夜摸| 国产免费现黄频在线看| 成人三级做爰电影| 久久 成人 亚洲| 午夜福利,免费看| 女人精品久久久久毛片| 免费黄频网站在线观看国产| 久久性视频一级片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 性色av乱码一区二区三区2| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩精品免费视频一区二区三区| 在线观看日韩欧美| 成人国产一区最新在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 在线观看免费视频日本深夜| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品久久电影中文字幕 | 欧美黑人精品巨大| 99热国产这里只有精品6| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本wwww免费看| av线在线观看网站| 成年人黄色毛片网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 免费少妇av软件| 国产成人精品无人区| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲人成伊人成综合网2020| 女人被狂操c到高潮| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线观看www视频免费| 欧美在线黄色| 一夜夜www| 三级毛片av免费| 国精品久久久久久国模美| 精品久久久久久,| 国产成人欧美在线观看 | 久久久久久久午夜电影 | 免费在线观看黄色视频的| 91成人精品电影| 人妻 亚洲 视频| 国产精品久久视频播放| 午夜免费鲁丝| 欧美 日韩 精品 国产| 91精品三级在线观看| 黄片大片在线免费观看| 99热网站在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产亚洲一区二区精品| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美日韩av久久| 两个人免费观看高清视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 99热网站在线观看| av电影中文网址| 精品电影一区二区在线| 美女高潮到喷水免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品国产区一区二| a在线观看视频网站| 黄色毛片三级朝国网站| 国产男女超爽视频在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久中文看片网| 日本vs欧美在线观看视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 国产xxxxx性猛交| 色婷婷av一区二区三区视频| 悠悠久久av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 老司机靠b影院| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线观看www视频免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲色图av天堂| 黄频高清免费视频| 一级黄色大片毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 男女之事视频高清在线观看| 国产乱人伦免费视频| 18禁美女被吸乳视频| 国产人伦9x9x在线观看| 99热只有精品国产| 校园春色视频在线观看| 国产成人系列免费观看| 国产成人av教育| 色在线成人网| aaaaa片日本免费| 大型黄色视频在线免费观看| 成人手机av| 午夜激情av网站| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲专区国产一区二区| 一级作爱视频免费观看| 免费在线观看影片大全网站| 精品无人区乱码1区二区| 动漫黄色视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 欧美 日韩 精品 国产| 国产熟女午夜一区二区三区| 麻豆成人av在线观看| 天天添夜夜摸| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久国产精品大桥未久av| 老司机深夜福利视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产高清videossex| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美乱色亚洲激情| 91av网站免费观看| 黄色成人免费大全| 午夜福利在线观看吧| 婷婷成人精品国产| 国产成人影院久久av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 香蕉丝袜av| 黑人猛操日本美女一级片| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品久久久久久电影网| 女同久久另类99精品国产91| 人成视频在线观看免费观看| 欧美乱色亚洲激情| 午夜福利在线观看吧| 亚洲中文字幕日韩| 国产国语露脸激情在线看| 精品电影一区二区在线| 精品久久蜜臀av无| 精品亚洲成a人片在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 老汉色∧v一级毛片| 国产区一区二久久| 午夜福利一区二区在线看| 国产片内射在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日日夜夜操网爽| 日韩欧美三级三区| 黄色丝袜av网址大全| 大香蕉久久网| 丁香六月欧美| 欧美激情极品国产一区二区三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 51午夜福利影视在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久性视频一级片| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品乱久久久久久| 免费在线观看完整版高清| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久国产一区二区| 日韩欧美三级三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 91成人精品电影| 操美女的视频在线观看| videos熟女内射| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 精品国产一区二区三区四区第35| 国产男女内射视频| 美女高潮到喷水免费观看| 日日夜夜操网爽| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美激情在线| 大香蕉久久成人网| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品乱码久久久久久99久播| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 新久久久久国产一级毛片| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲片人在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜影院日韩av| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 91字幕亚洲| 黄片大片在线免费观看| 91成人精品电影| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久ye,这里只有精品| 免费高清在线观看日韩| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品国产高清国产av | 久久人妻福利社区极品人妻图片| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲成a人片在线一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品 欧美亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久草成人影院| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲色图综合在线观看| 久久99一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久热这里只有精品99| 国产成人免费无遮挡视频| 国产免费现黄频在线看| 女同久久另类99精品国产91| 麻豆av在线久日| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久ye,这里只有精品| 天堂动漫精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 电影成人av| av天堂在线播放| 大码成人一级视频| 天堂√8在线中文| 亚洲av片天天在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产熟女午夜一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 多毛熟女@视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 精品久久久精品久久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 高潮久久久久久久久久久不卡| avwww免费| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 捣出白浆h1v1| 男人操女人黄网站| 老司机在亚洲福利影院| 午夜福利在线免费观看网站| 岛国在线观看网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲全国av大片| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩视频一区二区在线观看| 国产99久久九九免费精品| 欧美日韩亚洲高清精品| 99香蕉大伊视频| 少妇 在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品电影一区二区三区 | a在线观看视频网站| 91在线观看av| 深夜精品福利| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲男人天堂网一区| 中文字幕av电影在线播放| 精品乱码久久久久久99久播| 大片电影免费在线观看免费| 另类亚洲欧美激情| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品综合久久久久久久免费 | 成人三级做爰电影| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产色视频综合| 不卡av一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲专区国产一区二区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 大码成人一级视频| 午夜视频精品福利| 电影成人av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 午夜两性在线视频|