益氣活血片對(duì)腦卒中前狀態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響

朱根福，陳根成，譚玉群，程敏宜

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510360；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405

益氣活血片對(duì)腦卒中前狀態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響

朱根福1，陳根成1，譚玉群2，程敏宜1

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510360；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405

目的：探討益氣活血片對(duì)腦卒中前狀態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響。方法：采用雙腎雙夾法建立腎血管性高血壓大鼠模型；治療組給予益氣活血片，對(duì)照組給予阿司匹林，模型組及空白組給予蒸餾水喂養(yǎng)；采用免疫組化檢測(cè)血管細(xì)胞黏附分子-1、細(xì)胞間黏附分子-1和P-選擇素水平。結(jié)果：治療后，治療組血壓較治療前低（P＜0.05）；治療組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子水平低于對(duì)照組和模型組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：長(zhǎng)期持續(xù)的高血壓損害了大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控功能，益氣活血片能有效改善血壓水平，降低腦血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，抑制黏附反應(yīng)，對(duì)腦卒中有預(yù)防作用。

腦卒中前狀態(tài)；益氣活血片；細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）；細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）；P-選擇素；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；大鼠

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及處理 SPF級(jí)SD純種雄性大鼠80只，重80～120 g(廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，許可證號(hào)(廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)所檢測(cè))：SCXK(粵)2008-0020。采用雙腎雙夾法[1]制作易卒中型腎血管性高血壓性大鼠模型。具體方法：采用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔麻醉，備皮，清潔消毒，鋪孔巾，沿劍突下1～2 cm部位向下劃開(kāi)2～3 cm的切口，依次打開(kāi)腹腔，先定位左側(cè)腎臟，再定位右側(cè)腎臟，自制小夾鉗夾雙側(cè)腎動(dòng)脈，回納胃腸于腹中合適位置，依次縫合，獨(dú)立飼養(yǎng)1天。用ALC-NIBP無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量分析系統(tǒng)(上海奧爾科特生物科技有限公司)，經(jīng)尾動(dòng)脈測(cè)定大鼠收縮壓，造模后每周測(cè)量1次，并正確記錄血壓值，造模成功標(biāo)準(zhǔn)為血壓峰值達(dá)到并穩(wěn)定在20 Kpa以上。在高血壓模型術(shù)前隨機(jī)抽取20只大鼠作為空白對(duì)照組(D組)；在高血壓早期即模型術(shù)后14天將高血壓模型大鼠隨機(jī)分為：A組-益氣活血片組；B組-阿斯匹林組；C組-模型組。在高血壓早期即模型術(shù)后14天開(kāi)始給藥。A組：益氣活血片1.89 g/kg灌胃，每天1次；B組：拜阿斯匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司，中國(guó)北京，產(chǎn)品批號(hào)：BJ08409)溶于0.5%羧甲基纖維素鈉中，制成懸濁液，用時(shí)搖勻，用量為80 mg/kg灌胃，每天1次；C組：蒸餾水2 mL灌胃，每天1次；D組：自由飲用蒸餾水。4組大鼠連續(xù)灌服至模型術(shù)后112天。

1.2 血壓測(cè)定 大鼠血壓由ALC-NIBP無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量分析系統(tǒng)測(cè)定。

1.3 內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子水平測(cè)定 將大鼠用水合氯醛(10%，300 mg/kg)麻醉后，經(jīng)左心室向升主動(dòng)脈插管，剪開(kāi)下腔靜脈。同時(shí)快速灌注肝素化生理鹽水(50 U/mL)120 mL(滴速為10 mL/min)以清除血管內(nèi)血液。斷頭取腦，冰箱-20℃冷凍10 min后由嘴側(cè)至尾側(cè)每2mm切成一冠狀薄片，固定于40 g/L多聚甲醛溶液中8 h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，視交叉層面每8張取1張切片作免疫組化檢測(cè)VCAM-1、ICAM-1、P-選擇素水平。因視交叉層面符合中動(dòng)脈特征的血管為大腦中動(dòng)脈(MCA)，按血管外徑分為小MCA(75 μm≤D＜150 μm)、中MCA(150 μm≤D＜200 μm)、大MCA(D≥200 μm)[2]，本研究切片的大MCA較少，故不做分析。腦內(nèi)血管30～50 μm為微血管[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以(±s)表示，多組比較采用方差分析，先行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，各組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)；方差不齊，則采用秩和檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組大鼠血壓比較 見(jiàn)表1。治療前，C組、A組、B組血壓水平明顯高于D組(P＜0.05)；A組、B組和C組之間，血壓無(wú)明顯差異(P＞0.05)。治療后，A組血壓低于B組、C組(P＜0.05)；C組血壓與B組無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

2.2 各組大鼠ICAM-1、VCAM-1、P-選擇素水平比較 見(jiàn)表2。治療后，A組各指標(biāo)水平均低于C組(P＜0.05)；與B組比較，A組各指標(biāo)水平均較低(P＜0.05)；B組與C組比較，各指標(biāo)水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)。B組、C組與D組比較，各指標(biāo)水平均較高(P＜0.05)；A組與D組比較，各指標(biāo)水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

表1 各組大鼠血壓比較(±s) K pa

表1 各組大鼠血壓比較(±s) K pa

與A組比較，①P＜0.05；與D組比較，②P＜0.05

組別A組B組C組D組樣本數(shù)18 17 18 20治療前25±2②25±1②24±2②14±1治療后20±1 24±2①②27±1①②14±2

表2 各組大鼠ICAM-1、VCAM-1、P-選擇素水平比較(±s)

表2 各組大鼠ICAM-1、VCAM-1、P-選擇素水平比較(±s)

與A組比較，①P＜0.05；與D組比較，②P＜0.05

組別D組C組B組A組ICA M-1 V CA M-1 P-選擇素微小中微小中微小中46±3 80±2①②78±4①②48±3 57±4 69±1①②67±4①②55±3 35±2 47±3①②45±4①②33±5 52±2 67±5①②66±3①②50±4 58±4 75±2①②73±5①②60±1 64±2 90±2①②88±4①②65±3 28±2 38±2①②36±4①②27±3 34±4 50±2①②48±4①②35±3 28±2 36±3①②34±4①②28±4

3 討論

腦卒中已成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病，其發(fā)病率、死亡率呈逐漸增長(zhǎng)趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)，在嚴(yán)重的腦血管病變基礎(chǔ)上，加之其它因素的共同作用，更易于促發(fā)腦卒中[4]。卒中發(fā)生前出現(xiàn)的由各種原因引起的有可能導(dǎo)致短期內(nèi)卒中發(fā)作的內(nèi)環(huán)境失穩(wěn)態(tài)，稱為卒中前狀態(tài)[5]。有效防止卒中前狀態(tài)的出現(xiàn)和發(fā)展對(duì)預(yù)防卒中發(fā)作具有重要的意義。

基礎(chǔ)和臨床研究均表明，炎癥反應(yīng)在心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[6～7]，白細(xì)胞穿越血腦屏障進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)是腦內(nèi)炎癥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)鍵步驟，而黏附分子能協(xié)助白細(xì)胞黏附并跨越內(nèi)皮細(xì)胞遷移。研究表明，高血壓可增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的切變力，引起內(nèi)皮功能紊亂。ICAM-1、VCAM-1、P-選擇素與高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中之間關(guān)系密切[8～9]；ICAM-1、VCAM-1和P-選擇素的表達(dá)增高能促進(jìn)腦卒中的炎癥反應(yīng)和加劇腦卒中的損傷[10]。因此，針對(duì)卒中前狀態(tài)(高血壓晚期)大鼠黏附分子進(jìn)行干預(yù)，改善細(xì)胞調(diào)控功能，抑制黏附反應(yīng)，從而抑制炎癥發(fā)生發(fā)展，可達(dá)到預(yù)防卒中的作用。

益氣活血片由黃芪、川芎、當(dāng)歸、益母草、全蝎、石菖蒲、冰片組成。課題組前期實(shí)驗(yàn)已證明益氣活血片可誘導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生有利的微環(huán)境促進(jìn)神經(jīng)再生[11]；臨床試驗(yàn)亦表明其可明顯改善中風(fēng)患者神經(jīng)功能評(píng)分，具有促進(jìn)中樞神經(jīng)功能恢復(fù)的作用[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血壓水平與黏附分子表達(dá)呈正相關(guān)，長(zhǎng)期持續(xù)的高血壓損害了大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控功能，血壓越高調(diào)控功能越差；服用益氣活血片治療后，A組大鼠血壓與治療前比較，有明顯改善；且A組大鼠各級(jí)血管ICAM-1、VCAM-1和P-選擇素水平均低于B組和C組，提示益氣活血片可有效改善卒中前狀態(tài)大鼠血壓水平，并能降低腦血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1和P-選擇素表達(dá)水平，改善內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)控功能，抑制黏附反應(yīng)，從而抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展。這可能是益氣活血片有效預(yù)防腦卒中的機(jī)制之一。

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（責(zé)任編輯：駱歡歡）

R285.5

A

0256-7415（2015）05-0280-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.05.132腦血管內(nèi)皮損傷是促使高血壓晚期(腦卒中前狀態(tài))大鼠腦卒中發(fā)生發(fā)展的重要因素，腦卒中前狀態(tài)是預(yù)防腦卒中的重要時(shí)期，在控制血壓的同時(shí)改善腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控功能，對(duì)預(yù)防腦卒中具有重要意義。本研究通過(guò)觀察益氣活血片對(duì)高血壓晚期大鼠腦血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和P-選擇素表達(dá)的影響，明確益氣活血片對(duì)卒中前狀態(tài)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的作用，以探討益氣活血片對(duì)高血壓大鼠腦卒中的預(yù)防作用，同時(shí)也為活血化瘀中藥預(yù)防腦卒中提供理論依據(jù)。

2014-12-19

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（20132A011042）

朱根福（1982-），男，醫(yī)學(xué)博士，醫(yī)師，研究方向：腦血管病臨床與基礎(chǔ)研究。