HPLC法測定健腦補腎丸中甘草酸含量

徐利劍，吳葉鋒，趙鳳杰，胡海英，劉海鵬

(1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000；2.浙江普洛康裕天然藥物有限公司，浙江 金華 321017；3.優(yōu)勝美特制藥有限公司，浙江 金華 321025)

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HPLC法測定健腦補腎丸中甘草酸含量

徐利劍1，吳葉鋒2，趙鳳杰2，胡海英3，劉海鵬2

(1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000；2.浙江普洛康裕天然藥物有限公司，浙江 金華 321017；3.優(yōu)勝美特制藥有限公司，浙江 金華 321025)

目的：建立高效液相色譜法測定健腦補腎丸中甘草酸的含量。方法：使用Ultimate XB-C18柱，以甲醇∶0.2mol/L乙酸銨溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)為流動相，檢測波長為250nm。結果：甘草酸在0.015～0.45mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，平均回收率為98.1%，RSD為0.94%。結論：本方法準確、快速、簡便、重現(xiàn)性好，可以有效用于健腦補腎丸制劑的質(zhì)量控制。

健腦補腎丸；甘草酸；高效液相色譜；含量測定

健腦補腎丸以人參、鹿茸為君藥，當歸、白芍、山藥和白術為臣藥，佐以杜仲、牛膝等十八味藥，使以甘草調(diào)和諸藥，起健腦補腎、益氣健脾、安神定志之功。臨床應用的健腦補腎中成藥劑型主要為口服液和傳統(tǒng)丸劑。健腦補腎口服液的質(zhì)量標準(WS3-B-2209-96)中只對人參藥材進行簡單鑒別，健腦補腎丸質(zhì)量標準中僅有顯微鑒別。文獻使用HPLC法測定健腦補腎丸中的綠原酸[1]，但該制劑組方與本研究有差別，本研究所考察的健腦補腎丸的藥味多達25味，且采用醇提、水提二種工藝，成分更復雜。甘草酸含量是整個工藝過程中(水提、濃縮、干燥等工序)的重要控制參數(shù)。本研究以甲醇︰36%乙酸(25∶5)作溶劑提取甘草酸，并建立了HPLC法測定健腦補腎丸中甘草酸的含量。

1 儀器與試藥

10A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)。健腦補腎丸(榮昌制藥(淄博)有限公司，規(guī)格：每15粒重2g，批號 100608、100609、100610)；甘草酸銨對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110731-200614，純度97.95%)；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、乙酸銨和冰乙酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 溶液配制

對照品溶液：精密稱取甘草酸銨對照品適量(相當于甘草酸 12.5mg)，置25mL量瓶中，加流動相溶解并定容，搖勻；精密移取該溶液5mL置50mL量瓶中，加流動相定容，搖勻，制成含150μg/mL的對照品溶液。

供試品溶液：取樣品適量，研細，精密稱取1.5g置具塞錐形瓶中，精密加入溶劑25mL，稱重，超聲處理(功率350W，頻率40kHz)40min，放冷，稱重后用溶劑補足損失的量，搖勻，過濾，即得。

空白溶液：按處方量稱取缺甘草的藥材，按健腦補腎丸制備工藝制成缺甘草樣品；取缺甘草樣品適量，研細，精密稱取1.5g，同供試品溶液制備方法操作，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為Ultimate XB-C18柱；流動相為甲醇︰0.2 mol/L乙酸銨溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)；檢測波長為250nm；流速為1.0mL/min；柱溫為35 ℃；進樣量為10μL。理論板數(shù)按甘草酸峰計不低于2 500。典型色譜見圖1。

2.3 線性試驗

精密稱取甘草酸銨對照品38.28mg(相當于甘草酸37.5mg)置25mL量瓶中，加流動相溶解并定容，制成1.5mg/mL的對照品貯備液；分別精密移取貯備液1、2、3mL，各置100mL量瓶中，加流動相定容；進一步稀釋，得甘草酸濃度分別為0.015、0.03、0.045、0.15、0.3、0.45mg/mL的對照品溶液，分別進樣測定，以進樣量m為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程A=4.254 6×105m+854.97，r=0.999 9。表明甘草酸在0.015～0.45mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4 精密度試驗

取供試品溶液，連續(xù)進樣6次，計算得甘草酸含量的RSD為1.17%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

精密稱取同批樣品，共6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定，結果甘草酸含量的RSD為1.16%，表明本方法重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

將供試品溶液分別于配制后0、1、2、4、8、24h進樣，結果甘草酸含量的RSD為1.79%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知含量的同批樣品約0.75g，共5份，分別精密加入甘草酸銨對照品0.66mg，研細混勻。按“2.1”項下供試品溶液制備方法操作，進樣測定。結果甘草酸的平均回收率為98.1%，RSD為0.94%(n=5)。

2.8 樣品測定

取3批健腦補腎丸，分別按“2.1”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，結果甘草酸含量分別為0.86、0.65和0.77mg/g。暫定本品每克含甘草以甘草酸(C42H62O16)計不得低于0.6mg。

3 討論

本試驗采用甲醇︰36%乙酸(25∶5)超聲提取，可有效提取檢測指標成分并減少干擾，操作簡單，誤差小。

取對照品和供試品，配成一定濃度的樣品，照紫外方法[2]在紫外光區(qū)190～400nm的波長范圍內(nèi)掃描，結果在250nm波長處有最大吸收。同時，在250nm處，所用流動相及溶劑、輔料等空白均無吸收。對照品和供試品測得相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，故選定檢測波長為250nm。

雖然從現(xiàn)有文獻及中國藥典中可以查閱到健腦補腎丸中各味藥材的檢測方法，但在實際應用中，單味藥材的檢測并不代表在不同處方的制劑產(chǎn)品中適用。在本品的水提、濃縮、干燥等工序中，投入甘草藥材中甘草酸的含量與成品含量的比例較穩(wěn)定。故本研究以甘草酸為指標成分，采用HPLC法測定，可為健腦補腎丸的質(zhì)量控制提供參考。

[1] 靳維榮, 高國敬, 藤建北. 高效液相色譜法測定健腦補腎丸中綠原酸含量[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2006,17(2):195-196.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

(責任編輯：魏 曉)

Determination of Glycyrrhizic Acid in Jiannao Bushen Wan by HPLC

Xu Lijian1, Wu Yefeng2, Zhao Fengjie2, Hu Haiying3, Liu Haipeng2

(1.Zhejiang Zhongyi Pharmaceutical Co.Ltd., Lishui 323000，China;2. Zhejiang Apeloa Kangyu Natural Medicine Co.Ltd., Jinhua 321017，China;3. Yosemade Pharmaceutical Co.Ltd., Jinhua 321025，China)

Objective:An HPLC method was established for the determination of glycyrrhizinic acid in Jiannao Bushen Wan. Methods:An Ultimate XB Cl8column was used with the mobile phase of methanol∶0.2mol/L ammonium acetate solution:glacial acetic acid(63∶37∶2) at the detection wavelength of 250nm. The calibration curve was linear in the concentration range of 0.015～0.45mg/mL.Results: The average recoveries was 98.1%, with RSD of 0.94%.Conclusion:The method is accurate, rapid, simple and reproducible, can be used for quality control of Jiannao Bushen Wan.

Jiannao Bushen Wan; Glycyrrhizinic Acid; HPLC; Determination

2014-09-29

徐利劍(1974-)，男，浙江眾益制藥股份有限公司工程師，研究方向為藥品質(zhì)量控制。

R284

A

1673-2197(2015)03-0028-02

10.11954/ytctyy.201503011