糖尿病肺組織超微結(jié)構(gòu)病理改變與SPA、AGEs的免疫組織化學檢測方法 與分析

郭海燕 吳 巍 王志生 任世義

吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林長春 130012

糖尿病肺組織超微結(jié)構(gòu)病理改變與SPA、AGEs的免疫組織化學檢測方法 與分析

郭海燕 吳 巍 王志生 任世義

吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林長春 130012

目的探討糖尿病肺組織超微結(jié)構(gòu)病理改變，進行SPA、AGEs的免疫組織化學檢測及分析。方法選取該院2012年11月—2013年12月收治的成人二型糖尿病合并肺腫瘤患者74例，觀察患者肺組織超微結(jié)構(gòu)病理改變。對48只大鼠進行免疫組織化學方法分析AGEs、SPA變化。結(jié)果患者肺組織超微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)特征性改變。免疫組織化學檢測分析表明AGEs、SP-A表達增強。結(jié)論透射電鏡可以觀察到肺組織超微結(jié)構(gòu)特征病理改變。AGEs表達增加，提示可能為高糖導致非酶糖化作用增強，導致肺組織超微結(jié)構(gòu)改變；SPA增高，提示肺泡Ⅱ型細胞存在損傷，推斷其可能為糖尿病肺損害及其表現(xiàn)的病理生理基礎之一。

糖尿??；SPA；AGEs；免疫組織化學

糖尿病是由多種致病因素共同作用導致的一種全身代謝性疾病，主要表現(xiàn)為慢性高血糖，并可導致全身多系統(tǒng)損害。肺作為糖尿病全身損害的主要靶器官之一，對其超微結(jié)構(gòu)改變和免疫組織化學改變研究有重要意義。為進一步分析糖尿病肺組織超微結(jié)構(gòu)病理改變及SPA、AGEs的免疫組織化學檢測分析，進而提高對糖尿病所致肺病的診治水平，現(xiàn)將該院2012年11月—2013年12月成人二型糖尿病合并肺腫瘤患者74例的分析并做如下探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院自2012年11月—2013年12月收治的成人二型糖尿病合并肺腫瘤患者74例， 其中男31例，女43例，年齡43～81歲，平均年齡62歲。

1.2 超微病理觀察

取遠離癌組織的外周肺組織，制成活檢標本,2.5%戊二醛固定液前固定。將標本切為1mm^3小塊，緩沖液充分浸洗，1%四氧化鋨溶液后固定。用上升梯度酒精脫水，環(huán)氧丙烷置換Epon812環(huán)氧樹脂包埋。切成厚度50 mm左右的薄片。醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色。電鏡觀察并攝片。

1.3 免疫組織化學染色

①糖尿病動物模型的建立、分組、取材

選擇3月齡、體重185～210g的雄性SD大鼠48只，隨機分為糖尿病組和對照組，每組24只。分別行60mg/kg STZ 和等量生理鹽水尾靜脈注射。FBG >16.65mmol/ L表明糖尿病模型建立。實驗4、12、20周末，處死每組大鼠各8只，取肺臟固定、脫水、包埋待檢。

②免疫組化法

烘烤、脫蠟、水化、清洗、微波熱修復抗原、緩沖液平衡。滴加一抗AGEs抗體1:1600、SP-A抗體1:75，對照組滴加TriS緩沖液，室溫放置20 min，4℃冰箱中孵育過夜；滴加辣根酶標記的二抗和SABC試劑，室溫孵育1h；DAB顯色10 min，鏡下監(jiān)視染色效果；復染胞核3～4 min；上升梯度酒精脫水；二甲苯透明；中性樹膠封固；光鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 主要病理改變

肺泡Ⅱ型細胞變圓、變小，表面光滑，微絨毛減少乃至消失；核扭曲變形，可有多個核內(nèi)陷，偶見不規(guī)則空白透亮區(qū)；嗜餓性板層小體萎縮成高密度核心團塊；胞質(zhì)內(nèi)存在長桿狀空隙；線粒體基質(zhì)大部溶解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體擴張；次級溶酶體增多。肺泡Ⅰ型細胞萎縮，胞質(zhì)見透明區(qū)。微血管狹窄閉塞，內(nèi)皮細胞中可見自噬泡，泡內(nèi)含高電子密度自噬體殘渣顆粒?；こ恃笫[樣彌漫性增厚，周圍蛋白質(zhì)沉積，可見無定形沉積物、纖維狀細絲。膠原原纖維增生。

2.2 免疫組織化學結(jié)果

①動物模型 對照組：飲水、尿量未見明顯異常，大鼠毛色光滑、柔順，體重增長，血糖正常；實驗組：出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重明顯下降，活動減弱，一般狀態(tài)差。②AGEs對照組：大鼠細胞內(nèi)可見少量（棕）黃色顆粒。實驗組：在4、12、20周，AGEs在表達于肺組織細胞，可見（棕）黃色顆粒。相比于正常組，陽性細胞平均灰度值明顯偏低且隨時間推移降低。③sp-A：對照組：大鼠肺細胞可見少量胞漿（棕）黃色顆粒。實驗組：4周時 SP-A的表達無==明顯差異。12、20周SP-A表達于，胞漿可見（棕）黃色顆粒，實驗組大鼠平均灰度值較正常對照組偏低，表明SPA表達在增多。

3 結(jié)語

糖尿病是由多種致病因素共同作用導致的一種全身代謝性疾病，主要表現(xiàn)為慢性高血糖，并可導致全身多系統(tǒng)損害。肺損害所致的病理改變主要是肺泡Ⅱ型細胞及基板的改變。Ⅱ型細胞是一種分泌性細胞，嗜餓板層小體是富含磷脂、蛋白質(zhì)、粘多糖的胞漿內(nèi)特殊分泌顆粒。Ⅱ型細胞受損，嗜餓小體萎縮，分泌肺表面活性蛋白減少，是肺泡腔塌陷、肺不張的原因之一。同時促進膠原聚集，加重非酶糖基化作用，形成AGEs。AGEs作用于IV型膠原，加強其分子共價交聯(lián)，引起膠原彈性下降和變硬。AGEs沉積于肺毛細血管內(nèi)皮，合成、分泌多種因子造成肺組織損害，即肺是高血糖損傷的一個靶器官。通過啟動級聯(lián)式反應，促進多種因子表達，參與糖尿病肺組織病變的發(fā)生發(fā)展。SPA對維持肺泡正常結(jié)構(gòu)有重要的免疫作用。通過調(diào)理素作用于病原體，與病原表面特異性碳水化合物結(jié)合；配體激活途徑；調(diào)節(jié)表面受體表達途徑，利于機體的肺保護，避免病原微生物的侵害。實驗組大鼠肺SP-A表達上升，可能是糖尿病肺損害及其表現(xiàn)的病理生理基礎之一。

[1] 鄧偉吾.糖尿病的肺功能損害和肺部并發(fā)癥[J].臨床肺病雜志，2010，15(7)：903-905.

[2] 穆維新，沈亞欣，崔士杰，等. 2型糖尿病大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9及其抑制因子-1的表達變化[J]. 河北醫(yī)藥，2010,32(9)：1034-1037.

R587.1

A

1672-4062(2015)04(a)-0143-01

2015-01-03)

郭海燕(1966.1-)，女，長春市人，大專學歷，副主任技師，研究方向：免疫組織技術。

任世義（1965.11-），男，長春市人，大專學歷，副主任技師，研究方向：放射線技術。