細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞在胃癌治療中的作用及臨床應(yīng)用

韓蘭秀，王　瓊，茅衛(wèi)東(綜述)，張學(xué)光(審校)

(1.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院實驗室，江蘇 江陰 214400； 2.江蘇省臨床免疫研究所，江蘇 蘇州 215000)

?

細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞在胃癌治療中的作用及臨床應(yīng)用

韓蘭秀1△，王瓊1，茅衛(wèi)東1(綜述)，張學(xué)光2※(審校)

(1.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院實驗室，江蘇 江陰 214400； 2.江蘇省臨床免疫研究所，江蘇 蘇州 215000)

摘要：細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(CIK細胞)被稱為自然殺傷T細胞，其殺傷腫瘤的作用不受主要組織相容性復(fù)合體的限制，是過繼細胞免疫治療的代表類型。CIK細胞通過分泌細胞毒顆粒及細胞因子、調(diào)節(jié)癌基因表達、活化NKG2D受體等發(fā)揮抗腫瘤作用。CIK細胞聯(lián)合化療，不僅可以延長胃癌患者的無病生存期和總生存期，改善生活質(zhì)量，而且不良反應(yīng)少，治療耐受性較好。雖然CIK細胞治療已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，但仍有很多問題需要進一步探討。

關(guān)鍵詞：胃癌；細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞；過繼細胞免疫治療

近年來，隨著膳食習(xí)慣的變化及幽門螺桿菌的定植，胃癌的發(fā)病率逐年升高，嚴重危害了人民的健康。目前，手術(shù)、化療及放療仍是治療胃癌的主要措施，但是復(fù)發(fā)率和病死率依舊很高，5年生存率仍不甚理想[1]。過繼細胞免疫治療已經(jīng)成為繼手術(shù)、放化療后治療惡性腫瘤的一種新型手段，在抗腫瘤治療和提高患者免疫力及生存質(zhì)量方面發(fā)揮重要作用。目前研究較多的是細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(cytokine-induced killer cells，CIK細胞)。CIK細胞是將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子(如γ干擾素、抗CD3單克隆抗體和白細胞介素2等)共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群以CD3+CD56和CD3+CD8+細胞為主的異質(zhì)細胞群[2]。在惡性腫瘤過繼細胞免疫治療中具有廣泛的應(yīng)用前景[3]。現(xiàn)就CIK細胞的特點、作用機制、臨床應(yīng)用及目前存在的問題予以綜述。

1CIK細胞的表型及特點

CIK細胞發(fā)揮抗腫瘤作用的主要效應(yīng)細胞是CD3+CD56+細胞群，該群細胞在正常人外周血淋巴細胞中僅占1%～5%，但可在一定培養(yǎng)條件下迅速擴增；該類細胞來源于增殖的CD3+CD8+CD56-T細胞，而非培養(yǎng)初期稀有的CD3+CD56+細胞，也就是說擴增出來的CD3+CD56+細胞來源于T細胞，而非自然殺傷 (natural killer，NK) 細胞[4]。該類細胞代表了CIK細胞中最具有殺傷毒性的細胞類型，被稱為NK T細胞[5]。因此，CIK細胞具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非主要組織相容性復(fù)合體限制性殺瘤的特點，但殺傷作用是非抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用依賴性的[6]。此外，CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細胞敏感，殺瘤活性不受環(huán)孢素A和FKS06等免疫抑制劑的影響，能抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應(yīng)細胞經(jīng)凋亡相關(guān)因子/凋亡相關(guān)因子配體(Fas-FasL)介導(dǎo)的凋亡等特點[7]，對多種實體瘤細胞和白血病細胞均有殺傷作用[8]。因此，在臨床腫瘤治療中發(fā)揮著越來越重要的作用。

2CIK細胞的作用機制

研究發(fā)現(xiàn)，CIK細胞在體內(nèi)外均可以殺傷胃癌細胞株[9]，聯(lián)合奧沙利鉑后還可以協(xié)同殺傷耐藥胃癌細胞株[10]。但CIK細胞的抗瘤機制至今尚未完全闡明。

2.1釋放穿孔素和顆粒酶直接殺傷腫瘤細胞CIK細胞可通過黏附分子淋巴細胞功能相關(guān)抗原/細胞間黏附分子1途徑對腫瘤細胞進行識別、結(jié)合后，釋放穿孔素和顆粒酶；其中穿孔素會在靶細胞膜上形成穿膜樣結(jié)構(gòu)，改變靶細胞的滲透壓；顆粒酶具有胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的特性，同時表達酯酶活性破壞細胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腫瘤細胞裂解，從而發(fā)揮CIK細胞的毒性作用[11-13]。

2.2分泌多種細胞因子間接殺傷腫瘤細胞進入體內(nèi)的活化CIK細胞可分泌多種細胞因子(如γ干擾素、白細胞介素2、白細胞介素6及腫瘤壞死因子α等炎性細胞因子)，不僅可以直接抑制腫瘤細胞，而且可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細胞[14]。

2.3調(diào)節(jié)FasL/Fas途徑誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡及壞死Hoyle等[15]發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)的CIK細胞表達凋亡配體FasL，可以誘導(dǎo)Fas+的腫瘤細胞凋亡。Sun等[16]研究表明，CIK細胞早期誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，晚期則通過對p53、c-myc和Bcl-2的下調(diào)及Bax的上調(diào)來誘導(dǎo)瘤細胞壞死。

2.4作用于natural killer group 2 member D(NKG2D)配體的殺傷腫瘤細胞CIK細胞表達的NKG2D受體識別實體瘤和白血病細胞上的NKG2D配體，并聯(lián)合組蛋白脫乙?；敢种苿┖徒饘俚鞍酌敢种苿┻_到殺傷腫瘤細胞的目的[17]。

3CIK細胞治療胃癌的臨床應(yīng)用

3.1CIK細胞聯(lián)合化療治療進展期胃癌單純CIK細胞治療胃癌的臨床報道幾乎未見，目前研究較多的是CIK細胞聯(lián)合化療治療術(shù)后胃癌患者，該方案始于2006年；研究將術(shù)后的胃癌患者分為兩組，25例患者使用3個療程的亞葉酸、5-氟尿嘧啶和奧沙利鉑化療，32例患者使用CIK細胞免疫治療結(jié)合亞葉酸、5-氟尿嘧啶和奧沙利鉑化療；結(jié)果顯示，兩組患者的血清腫瘤標志物水平均明顯下降(P<0.05)，但CIK細胞聯(lián)合化療組的下降水平更加顯著，其累計存活率在開始時有所上升，2年后與單純化療組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義[18]。另一項研究卻證實了接受CIK細胞聯(lián)合化療治療的患者，存活時間明顯高于單純化療的患者，其2年和5年的生存率也明顯高于單純化療組[19]。其他多項相關(guān)研究也均證實，CIK細胞聯(lián)合化療可以提高患者的無病生存期和總生存期，延緩胃癌的復(fù)發(fā)，還可以提高患者的生活質(zhì)量[20-23]。因此,相對于單純化療而言，CIK細胞聯(lián)合治療更有益于患者。

3.2CIK細胞腹腔灌注聯(lián)合化療治療晚期胃癌王志明等[24]42例出現(xiàn)腹水的晚期胃癌患者分為兩組，研究組的20例患者使用希羅達和奧沙利鉑方案化療結(jié)合CIK細胞腹腔灌注；對照組22例患者僅使用希羅達和奧沙利鉑方案化療；結(jié)果顯示，聯(lián)合CIK細胞免疫治療組患者2個周期內(nèi)的腹水引流量減少，中位疾病進展時間明顯延長(P=0.001)，中位總生存時間延長(P=0.006)；此外，聯(lián)合治療組患者的耐受性較好，CIK細胞灌注后無明顯不良反應(yīng)發(fā)生。

3.3CIK細胞聯(lián)合化療治療胃癌的不良反應(yīng)與手術(shù)、化療、放療相比，生物治療最大的優(yōu)勢在于不良反應(yīng)小。研究發(fā)現(xiàn)，CIK細胞治療主要的不良反應(yīng)是寒戰(zhàn)、發(fā)熱，一般為輕、中度發(fā)熱，大多不需要特殊處理或者僅對癥處理即可解決；其他的不良反應(yīng)還包括全身不適、乏力、胸悶和惡心等，尚未發(fā)現(xiàn)引起過敏、嚴重的肝腎功能不全等其他不良反應(yīng)[20-23]。

4CIK細胞治療目前存在的問題

CIK細胞作為過繼免疫治療的一種代表類型已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種腫瘤的輔助治療[25-27]。雖然CIK細胞治療目前應(yīng)用范圍較廣，尤其是聯(lián)合化療治療術(shù)后胃癌患者，效果較顯著，且不良反應(yīng)小，治療耐受性較好。然而，目前國內(nèi)外應(yīng)用CIK細胞治療腫瘤仍處于探索階段，還存在很多亟需解決的問題。例如，接受CIK細胞治療的患者如何選擇；目前各研究單位實驗室培養(yǎng)CIK細胞的方法統(tǒng)一問題；患者回輸CIK細胞的最佳治療數(shù)量；CIK細胞治療與其他治療結(jié)合的時機和治療療程等，這些問題需要在進一步的臨床實驗研究后得到優(yōu)化、規(guī)范和統(tǒng)一。雖然，目前很多報道證實了CIK細胞治療的安全性、有效性等，然而國內(nèi)外尚缺乏多中心、大樣本的臨床實驗來進一步證實。另外，CIK細胞殺傷腫瘤的機制尚未完全明確，大量的基礎(chǔ)理論尚待進一步探討。

5小結(jié)

CIK細胞因增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細胞敏感等優(yōu)勢而備受關(guān)注。多項研究均證實，CIK細胞聯(lián)合化療治療術(shù)后胃癌患者的安全性、有效性和可行性，同時也展現(xiàn)了廣闊的治療前景。然而，CIK細胞治療也同樣面臨著很多的問題和挑戰(zhàn)。如何在短時間內(nèi)獲取大量、優(yōu)質(zhì)的CIK細胞，如何進一步優(yōu)化、規(guī)范和統(tǒng)一CIK細胞的治療流程，如何讓CIK細胞治療更加安全、高效地應(yīng)用于臨床，這些是所有研究人員目前需要思考和解決的問題。

參考文獻

[1]Zhang YZ，Zhang LH，Gao Y，etal.Discovery and validation of prognostic markers in gastric cancer by genome-wide expression profiling[J].World J Gastroenterol，2011，17(13):1710-1717.

[2]Sangiolo D，Martinuzzi E，Todorovic M，etal.Alloreacitvity and anti-tumor acitvity segregate within two distinct subset of cytokine-induced killer(CIK) cells:implications for their infusion across major HLA barriers[J].Int Immunol，2008，20(7):841-848.

[3]Mesiano G，Todorovic M，Gammaitoni L，etal.Cytokine-induced killer(CIK) cells as feasible and effective adoptive immunotherapy for the treatment of soild tumors[J].Expert Opin Biol Ther，2012，12(6):673-684.

[4]Lu PH，Negrin RS.A novel population of expanded human CD3+CD56+cells derived from T cells with potent in vivo antitumor activity in mice with severe combined immunodeficiency[J].J Immunol，1994，153(4):1687-1696.

[5]Sievers E，Albers P，Schmidt-Wolf IG，etal.Telomerase pulsed dendritic cells for immunotherapy for renal cell carcinoma[J].J Urol，2004，171(1):114-119.

[6]Linn YC，Hui KM.Cytokine-induced killer cells:NK-like T cells with cytotolytic specificity against leukemia[J].Leuk Lymphoma，2003，44(9):1457-1462.

[7]Prevani A，Borleri G，Pende D，etal.Dual-functional capability of CD3+CD56+CIK cells,a T-cell subset that acquires NK function and retains TCR-mediated specific cytotoxictity[J].Blood，2011，118(12):3301-3310.

[8]Thanendrarajan S，Nowak M，Abken H，etal.Combining cytokine-induced killer cells with vaccination in cancer immunotherapy:more than one plus one [J].Leuk Res，2011，35(9):1136-1142.

[9]Zhang L，Hou Y，Zhang J，etal.Cytotoxicity of cytokine-induced killer cells targeted by a bispecific antibody to gastric cancer cells[J].Oncol Lett，2013，5(6):1826-1832.

[10]Zhao Q，Zhang H，Li Y，etal.Anti-tumor effects of CIK combined with oxaliplatin in human oxaliplatin-resistant gastric cancer cells in vivo and in vitro[J].J Exp Clin Cancer Res，2010，29:118.

[11]Huang ZM，Li W，Li S，etal.Cytokine-induced killer cells in combination with transcatheter arterial chemoembolization and radiofrequency ablation for hepatocellular carcinoma patients[J].J Immunother，2013，36(5):287-293.

[12]Wang XP，Xu M，Gao HF，etal.Intraperitoneal perfusion of cytokine-induced killer cells with local hyperthermia for advanced hepatocellular carcinoma[J].Word J Gastroenterol，2013，19(19):2956-2962.

[13]Li W，Xu LP，DI Zhao L，etal.Cytokine-induced killer cell therapy for advanced pancreatic adenocarcinoma:A case report and review of the literature [J].Oncol Lett，2013，5(4):1427-1429.

[14]Gritzapis AD，Dimitroulopoulos D，Paraskevas E，etal.Large-scale expansion of CD3+CD56+lymphocytes capable of lysing autologous tumor cells with cytokine-rich supernatants[J].Cancer Immunol Immunother，2002，51(8):440-448.

[15]Hoyle C，Bangs CD，Chang P，etal.Expansion of Philadelphia chromosome-negative CD3+CD56+cytotoxic cells from chronic myeloid leukemia patients:in vitro and in vivo efficacy in severe combined immunodeficiency disease mice[J].Blood，1998，92(9):3318-3327.

[16]Sun S，Li XM，Li XD，etal.Studies on inducing apoptosis effects and mechan ism of CIK cell for Mgc-803 gastric cancer cell lines[J].Cancer Biother Radiopharm，2005，20(2):173-180.

[17]Huang B，Sikorski R，Sampath P，etal.Modulation of NKG2D-ligand cell surface expression enhances immune cell therapy of cancer[J].J Immunother，2011，34(3):289-296.

[18]Jiang J，Xu N，Wu C，etal.Treatment of advanced gastric cancer by chemotherapy combined with autologous cytokine-induced killer cells[J].Anticancer Res，2006，26(3B):2237-2242.

[19]Jiang JT，Shen YP，Wu CP，etal.Increasing the frequency of CIK cells adoptive immunotherapy may decrease risk of death in gastric cancer patients[J].World J Gastroenterol，2010，16(48):6155-6162.

[20]Liu H，Song J，Yang Z，etal.Effects of cytokine-induced killer cell treatment combined with FOLFOX4 on the recurrence and survival rates forgastric cancer following surgery[J].Exp Ther Med，2013，6(4):953-956.

[21]Zhao H，F(xiàn)an Y，Li H，etal.Immunotherapy with cytokine-induced killer cells as an adjuvant treatment for advanced gastric carcinoma:a retrospective study of 165 patients[J].Cancer Biother Radiopharm，2013，28(4):303-309.

[22]Shi L，Zhou Q，Wu J，etal.Efficacy of adjuvant immunotherapy with cytokine-induced killer cells in patients with locally advanced gastriccancer[J].Cancer Immunol Immunother，2012，61(12):2251-2259.

[23]孔炯，蔣敬庭，吳昌平，等.CIK細胞治療胃癌患者的相關(guān)臨床因素對其預(yù)后的影響[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15(4):295-299.

[24]王志明，莊榮源，陳勇，等.化療聯(lián)合腹腔灌注細胞因子有道德殺傷細胞治療胃癌腹水[J].中華胃腸外科雜志，2013，16(1):28-31.

[25]Liu L，Zhang W，Qi X，etal.Randomized study of autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in metastatic renal carci-noma[J].Clin Cancer Res，2012，18(6):1751-1759.

[26]Yang B，Lu XC，Yu RL，etal.Repeated transfusions of autologous cytokine-induced killer cells for treatment of haematological malignancies in elderly patients:a pilot clinical trial[J].Hematol Oncol，2012，30(3):115-122.

[27]Hui D，Qiang L，Jian W，etal.A randomized,controlled trial of postoperative adjuvant cytokine-induced killer cells immunotherapy after radical resection of hepatocellular carcinoma[J].Dig Liver Dis，2009，41(1):36-41.

The Role of CIK Cells in the Treatment of Gastric Cancer and the Clinical ApplicationHANLan-xiu1，WANGQiong1，MAOWei-dong1，ZHANGXue-guang2. (1.DepartmentofLaboratory，AffiliatedJiangyinHospital，CollegeofMedicineofSoutheastUniversity，Jiangyin214400，China； 2.JiangsuInstituteofClinicalImmunology，Suzhou215000，China)

Abstract：Cytokine-induced killer(CIK) cells are called natural killer T lymphocytes.CIK cells are non-MHC-restricted in target cell killing and have become the representative type of adoptive cellular immunotherapy.CIK cells can kill tumor cells by secreting cytotoxic granules and cytokines,regulating oncogene expression and activating natural killer group 2 member D receptor.In combination with chemotherapy,CIK cells can not only prolong the disease-free survival and the overall survival in patients with gastric cancer,but also improve the quality of life of these patients.No obviously side effects have been observed and the tolerance is good.Although CIK cells have been widely used in clinical treatment,there are still many problems to be further discussed.

Key words：Gastric cancer； Cytokine-induced killer cells； Adoptive cellular immunotherapy

收稿日期：2014-07-17修回日期：2014-10-14編輯：鄭雪

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.11.019

中圖分類號：R730.51

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)11-1970-03