牛病毒性呼吸道疾病診斷技術

孔祥明

摘要：對牛的病毒性呼吸道疾病的病原學診斷方法進行了介紹。

關鍵詞：牛病毒性呼吸道疾?。徊≡瓕W診斷；防治

中圖分類號：S858.23 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）11-0048-01

牛呼吸道疾病（BRD）對全球養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重危害。導致該病的病因相對較為復雜，病毒成為其中主要病原之一。已分離到的病毒主要有牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒（BPIV-3）、牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）等。另外也與環(huán)境因素有關，例如，溫度、濕度、飼料、粉塵、營養(yǎng)缺失等原因都能引起B(yǎng)RD疾病。

1 病原學診斷方法

1.1 病毒分離鑒定

針對上述已經(jīng)檢測到的病毒，都可以依附牛腎細胞進行培養(yǎng)和生長?，F(xiàn)場檢查時，樣本可以采集病牛的鼻腔分泌液即可。剖檢則采集氣管黏膜或發(fā)生病變的的肺部組織，也可將血液或者脾臟器官用做樣本采集使用。BVDV具有兩種病變類型：致細胞病變型（CP）和非致細胞病變型（nCP）。其中CP-BVDV讓感染細胞變圓，使胞漿發(fā)生空泡現(xiàn)象，形成細胞單層拉網(wǎng)，最后引起細胞死亡。實際上，臨床中主要以nCP-BVDV為主要分離類型，所以，應該結合免疫熒光或者RT-PCR對分離毒株培養(yǎng)物鑒定。IBRV能夠使細胞圓縮，然后形成葡萄樣群落，并在單層細胞上出現(xiàn)空洞，偶爾會發(fā)現(xiàn)合胞體。若要鑒定IBRV是否為致細胞病變的病毒，須將細胞培養(yǎng)的上清液放置特定的抗血清或單克隆抗體進行中和試驗。一旦細胞確是被IBRV所感染，那么一定會出現(xiàn)核內包涵體。

BPIV-3會造成牛腎細胞出現(xiàn)拉網(wǎng)狀，并且最終會使細胞發(fā)生脫落。對于那些不易產(chǎn)生病變的毒株細胞，可以通過應用紅細胞吸附試驗驗證病毒是否存在，其中一些毒株必須經(jīng)過較長時間的體外停留才能顯現(xiàn)出具體現(xiàn)象。BRSV是一種可以充分生存在呼吸系統(tǒng)的細胞培養(yǎng)物上面，特別是牛鼻甲細胞最適合對病毒進行分離和培養(yǎng)，具體病變情況是可見細胞融合現(xiàn)象，處于晚期的細胞多呈現(xiàn)出圓縮、腫脹和聚集的情況，并且容易出現(xiàn)多個合胞體，最后細胞死亡并脫落。對于發(fā)生病變的細胞可以使用HE染色，通過鏡檢能夠看到核內包涵體。但是，受到病毒滴度不夠穩(wěn)定的影響，很容易在運輸過程中無法有效生存，使其敏感度降低，因此，運輸過程必須嚴格且迅速，才能保證細胞盡早接種，從而取得較好的結果。

1.2 病毒核酸檢測

病毒核酸檢測方法具有較高的敏感性和特異性，并且能夠對受到感染的或是不完整的病毒的基因組進行有效檢測。有些專家依據(jù)BVDV5′UTR基因序列，合成了特異性引物，形成了能夠對BVDV進行檢測的RT-PCR方法。這種方法能夠從BVDV Oregon C24V中擴增出特異性片段，而從豬瘟病毒（CSFV）、IBRV、BRSV、BPIV-3中的擴增結果為陰性。

2 呼吸道疾病綜合防治

（1）對牛群引進做好管理措施。堅決不從疫區(qū)引進牛，也不能從正在發(fā)病的牛群區(qū)域引進牛。對于引進牛應進行檢疫檢測，并與本區(qū)牛群之間進行一段時間的隔離觀察，確保無病再與健康牛群混群。

（2）加強飼養(yǎng)管理。對不同年齡和不同來源的牛進行分類喂養(yǎng)飼料。適當對牛加強營養(yǎng)補充，如富含維生素、礦物質元素等的飼料，保證全價營養(yǎng)。

（3）注重疾病防控。對牛舍做好通風、清潔以及消毒，對于病牛早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療。同時應注意避免牛舍環(huán)境過度擁擠。

3 小結

本文結合了病原學診斷方法，分別從病毒分離鑒定和病毒核酸檢測兩個方面進行論述，并在最后提出簡略的綜合防治措施，希望能夠為診斷和防治牛的病毒性呼吸道疾病提供參考。