牛病毒性呼吸道疾病診斷技術(shù)

孔祥明

摘要：對(duì)牛的病毒性呼吸道疾病的病原學(xué)診斷方法進(jìn)行了介紹。

關(guān)鍵詞：牛病毒性呼吸道疾病；病原學(xué)診斷；防治

中圖分類號(hào)：S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2014）11-0048-01

牛呼吸道疾病（BRD）對(duì)全球養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重危害。導(dǎo)致該病的病因相對(duì)較為復(fù)雜，病毒成為其中主要病原之一。已分離到的病毒主要有牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒（BPIV-3）、牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）等。另外也與環(huán)境因素有關(guān)，例如，溫度、濕度、飼料、粉塵、營(yíng)養(yǎng)缺失等原因都能引起B(yǎng)RD疾病。

1 病原學(xué)診斷方法

1.1 病毒分離鑒定

針對(duì)上述已經(jīng)檢測(cè)到的病毒，都可以依附牛腎細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和生長(zhǎng)?，F(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，樣本可以采集病牛的鼻腔分泌液即可。剖檢則采集氣管黏膜或發(fā)生病變的的肺部組織，也可將血液或者脾臟器官用做樣本采集使用。BVDV具有兩種病變類型：致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（nCP）。其中CP-BVDV讓感染細(xì)胞變圓，使胞漿發(fā)生空泡現(xiàn)象，形成細(xì)胞單層拉網(wǎng)，最后引起細(xì)胞死亡。實(shí)際上，臨床中主要以nCP-BVDV為主要分離類型，所以，應(yīng)該結(jié)合免疫熒光或者RT-PCR對(duì)分離毒株培養(yǎng)物鑒定。IBRV能夠使細(xì)胞圓縮，然后形成葡萄樣群落，并在單層細(xì)胞上出現(xiàn)空洞，偶爾會(huì)發(fā)現(xiàn)合胞體。若要鑒定IBRV是否為致細(xì)胞病變的病毒，須將細(xì)胞培養(yǎng)的上清液放置特定的抗血清或單克隆抗體進(jìn)行中和試驗(yàn)。一旦細(xì)胞確是被IBRV所感染，那么一定會(huì)出現(xiàn)核內(nèi)包涵體。

BPIV-3會(huì)造成牛腎細(xì)胞出現(xiàn)拉網(wǎng)狀，并且最終會(huì)使細(xì)胞發(fā)生脫落。對(duì)于那些不易產(chǎn)生病變的毒株細(xì)胞，可以通過(guò)應(yīng)用紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)驗(yàn)證病毒是否存在，其中一些毒株必須經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的體外停留才能顯現(xiàn)出具體現(xiàn)象。BRSV是一種可以充分生存在呼吸系統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)物上面，特別是牛鼻甲細(xì)胞最適合對(duì)病毒進(jìn)行分離和培養(yǎng)，具體病變情況是可見(jiàn)細(xì)胞融合現(xiàn)象，處于晚期的細(xì)胞多呈現(xiàn)出圓縮、腫脹和聚集的情況，并且容易出現(xiàn)多個(gè)合胞體，最后細(xì)胞死亡并脫落。對(duì)于發(fā)生病變的細(xì)胞可以使用HE染色，通過(guò)鏡檢能夠看到核內(nèi)包涵體。但是，受到病毒滴度不夠穩(wěn)定的影響，很容易在運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)法有效生存，使其敏感度降低，因此，運(yùn)輸過(guò)程必須嚴(yán)格且迅速，才能保證細(xì)胞盡早接種，從而取得較好的結(jié)果。

1.2 病毒核酸檢測(cè)

病毒核酸檢測(cè)方法具有較高的敏感性和特異性，并且能夠?qū)κ艿礁腥镜幕蚴遣煌暾牟《镜幕蚪M進(jìn)行有效檢測(cè)。有些專家依據(jù)BVDV5′UTR基因序列，合成了特異性引物，形成了能夠?qū)VDV進(jìn)行檢測(cè)的RT-PCR方法。這種方法能夠從BVDV Oregon C24V中擴(kuò)增出特異性片段，而從豬瘟病毒（CSFV）、IBRV、BRSV、BPIV-3中的擴(kuò)增結(jié)果為陰性。

2 呼吸道疾病綜合防治

（1）對(duì)牛群引進(jìn)做好管理措施。堅(jiān)決不從疫區(qū)引進(jìn)牛，也不能從正在發(fā)病的牛群區(qū)域引進(jìn)牛。對(duì)于引進(jìn)牛應(yīng)進(jìn)行檢疫檢測(cè)，并與本區(qū)牛群之間進(jìn)行一段時(shí)間的隔離觀察，確保無(wú)病再與健康牛群混群。

（2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。對(duì)不同年齡和不同來(lái)源的牛進(jìn)行分類喂養(yǎng)飼料。適當(dāng)對(duì)牛加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，如富含維生素、礦物質(zhì)元素等的飼料，保證全價(jià)營(yíng)養(yǎng)。

（3）注重疾病防控。對(duì)牛舍做好通風(fēng)、清潔以及消毒，對(duì)于病牛早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療。同時(shí)應(yīng)注意避免牛舍環(huán)境過(guò)度擁擠。

3 小結(jié)

本文結(jié)合了病原學(xué)診斷方法，分別從病毒分離鑒定和病毒核酸檢測(cè)兩個(gè)方面進(jìn)行論述，并在最后提出簡(jiǎn)略的綜合防治措施，希望能夠?yàn)樵\斷和防治牛的病毒性呼吸道疾病提供參考。