結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學(xué)特性研究

薛士鵬

結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學(xué)特性研究

薛士鵬

目的 探討結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白在體外實驗中所表現(xiàn)出的免疫學(xué)特征。方法 將小白鼠隨機分為Rv1009免疫組和生理鹽水組, 各5只。Rv1009免疫組小白鼠需要在腹股溝皮下包埋兩條NC膜, 進行3次免疫, 每次免疫的時間間隔為2周；生理鹽水組小白鼠皮下注射生理鹽水即可。收集所有小白鼠的血清, 采用ELISA方式來對小白鼠血清中抗體的滴速情況進行測定。結(jié)果 從實驗中發(fā)現(xiàn), 小白鼠免疫血清抗體的滴速情況為1：1700, 淋巴細胞的增殖數(shù)量為(2.5±0.2), 鼠源性γ干擾素(IFN-γ)的含量為(1250±33)pg/ml, 白細胞介素-10(IL-10)的含量為(522±16)pg/ml, 以上數(shù)量均明顯高于生理鹽水組［(0.8±0.1)、(255±20)pg/ml、(75±5)pg/ml］。在白細胞介素-12(IL-12)的水平情況方面,各組別之間的含量較為相近。結(jié)論 結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白具有極強的臨床研究價值, 很有可能會成為未來新型的結(jié)合疫苗, 為人類的生命健康安全帶來福音。

結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白；體外實驗；免疫學(xué)特性；皮下注射

結(jié)核病是危害人類健康的頭號公敵, 是傳染病中給人類造成傷害最為嚴重的疾病。在臨床中, 針對結(jié)核疾病主要使用的藥物是卡介苗, 但是從近幾年的研究上來看, 卡介苗的保護性不完整情況越來越突出, 再加上人口流動性和艾滋病流行、吸毒、酗酒等外界因素的影響, 結(jié)核疾病在全世界范圍內(nèi)廣泛擴散, 并且呈現(xiàn)出發(fā)病人群的數(shù)量回升的趨勢。為了積極研究結(jié)核疾病的致病機制和免疫機制, 研究出有效預(yù)防和治療結(jié)合疾病的藥物, 本院特進行了一次研究, 取得了較為良好的效果, 現(xiàn)將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 液體培養(yǎng)液主要由Difco公司提供, IFN-γ、IL-10和IL-12所需要使用的檢測試劑盒由深圳晶美公司提供［1］, OADC和RPM11640培養(yǎng)所需要的培養(yǎng)基主要由GIBCO公司提供。另外還在華美生物公司購進了E.coliDH5α和羊抗鼠。本次研究中所使用的對象為小白鼠, 均為雌性。

1.2 研究方法

1.2.1 制備融合蛋白和轉(zhuǎn)移膜［2］將轉(zhuǎn)化的E.coli DH5α添加在20 ml的培養(yǎng)液中, 在37℃的環(huán)境中進行振蕩培養(yǎng),培養(yǎng)的時間在4 h左右, 并且使用IPTG進行誘導(dǎo)。對上述制備好的融合蛋白進行急菌處理, 將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,將含有目的蛋白表達的NC膜剪下備用即可。

1.2.2 免疫小白鼠［3］將小白鼠隨機分為Rv1009免疫組和生理鹽水組, 各5只。Rv1009免疫組小白鼠需要在腹股溝皮下包埋兩條NC膜, 進行3次免疫, 每次免疫的時間間隔為2周；生理鹽水組小白鼠皮下注射生理鹽水即可。收集所有小白鼠的血清, 采用ELISA方式來對小白鼠血清中抗體的滴速情況進行測定。

2 結(jié)果

Rv1009蛋白小白鼠血清特異性抗體的滴速為1：1700,生理鹽水組小白鼠檢測呈現(xiàn)出陰性。Rv1009組淋巴細胞的增殖數(shù)量為(2.5±0.2), 生理鹽水組淋巴細胞增殖的數(shù)量為(0.8±0.1), Rv1009組淋巴細胞阻滯的速度較為明顯。另外,在IFN-γ的含量方面, Rv1009組為(1250±33)pg/ml, IL-10的含量為(522±16)pg/ml, 以上數(shù)均明顯高于生理鹽水組的［(255±20)、(75±5)pg/ml］。在IL-12的水平情況方面, 各組別之間的含量較為相近。

3 討論

在臨床研究的過程中, 很多學(xué)者在結(jié)核領(lǐng)域做出了相當(dāng)大的貢獻, 這些研究的成果在不同程度上給結(jié)核的防治帶來了積極的借鑒意義［4］, 也給人類帶來了福音。學(xué)者Mukamolova發(fā)現(xiàn), resuscitation-promoting factor(Micrococcus luteus分泌的能夠復(fù)活的促進因子, 簡稱為RPF)［5］能夠刺激結(jié)核細菌休眠,也能夠促進患者機體繁殖和生長, 在結(jié)核疾病中所產(chǎn)生的作用與真核細胞的因子極為相似, 能夠進行自我刺激。另外,還有實驗證明, RPF還能夠?qū)ζ渌N類的高G+C含量中的革蘭陽性菌產(chǎn)生刺激, 也就是說, RPF能夠?qū)Y(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生作用［6］。在學(xué)者Sassetti的研究過程中發(fā)現(xiàn), RPF蛋白并不是結(jié)核株生長所必須具備的條件, 而且這種樣蛋白在功能傷害會出現(xiàn)重疊的現(xiàn)象［7］。在本次研究的過程中, 進行試驗的小白鼠體內(nèi)特異性抗體的滴速情況為1：1700, 證實了本次實驗研究的結(jié)果正確性。淋巴細胞的增殖數(shù)量為(2.5±0.2), IFN-Y的含量為(1250±33)pg/ml, IL-10的含量為(522±16)pg/ml。上述指標(biāo)均能夠證明Rv1009蛋白能夠誘導(dǎo)有效細胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答的情況。作者認為, 在感染的過程中首先需要使介導(dǎo)細胞之間出于平衡的狀態(tài), 也就是說在本次試驗研究中, IL-10在小白鼠體內(nèi)水平升高不能夠單純地下結(jié)論說此種情況對機體會產(chǎn)生不利的影響［8］。

綜上所述, 結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白讓人們在對抗結(jié)核疾病的過程中看到了希望, 具有極強的臨床研究價值, 值得在臨床中推廣應(yīng)用。

［1］ 樊愛琳, 師長宏, 蘇明權(quán), 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009結(jié)構(gòu)域多肽的免疫學(xué)特性研究 .中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志.2008.31(11):1282-1286.

［2］ 冷潔, 韓娜, 鄒悅.青島地區(qū)鏈霉素耐藥結(jié)核分枝桿菌的rpsL43基因突變特征.山東醫(yī)藥.2014.54(23):55-57.

［3］ 楊柳, 蘇哲, 岳喬紅, 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009基因蛋白的克隆和表達. 中國防癆雜志.2007.29(1):12-14.

［4］ 薛瑩, 姜鴻, 柏銀蘭, 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學(xué)特性. 中國人獸共患病學(xué)報.2007.23(3):256-258.

［5］ 薛瑩, 柏銀蘭, 高輝, 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及表達. 中國人獸共患病學(xué)報.2007.23(7):664-666.

［6］ 樊愛琳, 蘇明權(quán), 師長宏, 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009結(jié)構(gòu)域基因的克隆、表達及親和層析純化. 生物技術(shù)通訊.2007.18(4).1282-1286.

［7］ 陽幼榮, 吳雪瓊, 韓躍松, 等. 重組結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白應(yīng)用價值的研究. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2009.19(22):3410-3413.

［8］ 蘇明權(quán), 李立文, 張彩蓮, 等. 結(jié)核分枝桿菌Rv1009的生物信息學(xué)分析及克隆、表達. 生物技術(shù)通訊.2003.27(6):557-559.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.20.211

2015-02-02］

473061 南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校