抑癌基因PTEN在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

劉衛(wèi)梅

抑癌基因PTEN在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

劉衛(wèi)梅

目的 觀察抑癌基因PTEN在結(jié)腸癌組織中的表達(dá), 探討其與結(jié)腸癌發(fā)生的關(guān)系及其臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)抑癌基因PTEN在結(jié)腸癌組織和正常結(jié)腸黏膜中的表達(dá)。結(jié)果 PTEN在正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌中陽(yáng)性率分別為100.0%, 64.7%。PTEN表達(dá)與結(jié)腸癌的分化程度高低、浸潤(rùn)深度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 PTEN的異常表達(dá)可為結(jié)腸癌診斷和預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

結(jié)腸癌；抑癌基因PTEN；表達(dá)；免疫組化

結(jié)腸癌是較常見(jiàn)的腫瘤, 近年來(lái), 發(fā)病率有所增加, 發(fā)病年齡40～55歲, 平均年齡49.4歲。多基因異常是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵所在, 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程是各種基因及其表達(dá)產(chǎn)物作用及互相影響的結(jié)果, 一直以來(lái)是腫瘤分子機(jī)制研究的熱點(diǎn)。PTEN是人類發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)抑癌基因, 它具有磷酸酶活性, 在保持細(xì)胞增生、組織分化和細(xì)胞凋亡均衡中發(fā)揮重要的作用, 在許多腫瘤中表達(dá)缺失、突變。本組研究用免疫組化S-P法檢測(cè)PTEN在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況, 用以探討它與結(jié)腸癌發(fā)生的關(guān)系及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年12月～2012年9月本院手術(shù)切除的結(jié)腸癌患者68例, 其中男53例, 女15例, 年齡38～70歲,接受過(guò)輔助治療和手術(shù)治療后復(fù)發(fā)的患者, 不在本次研究之列, 取距癌腫邊緣8 cm以上鄰近無(wú)增生的正常結(jié)腸黏膜30例作對(duì)照。

1.2 方法 標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定, 厚度4 μm切片,脫蠟、水洗, 微波爐加熱抗原修復(fù), 蘇木素染色, 封膠, 鼠抗人PTEN單克隆抗體、S-P染色試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自武漢博士德生物公司, 以腫瘤陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照, 用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性：細(xì)胞漿有棕黃色顆粒著色為陽(yáng)性細(xì)胞, 陰性：細(xì)胞漿無(wú)著色。將玻片分為10個(gè)區(qū), 在10×40倍顯微鏡視野下, 每個(gè)區(qū)中連續(xù)觀察50個(gè)細(xì)胞, 計(jì)量值以平均個(gè)數(shù)為準(zhǔn), 根據(jù)相關(guān)資料, 以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例(5個(gè)高倍視野)分為：陰性(-)為著色細(xì)胞＜5%；弱陽(yáng)性(+)為細(xì)胞著色數(shù)量在5%～20%之間：陽(yáng)性(++)為細(xì)胞著色數(shù)量在20%～50%之間：強(qiáng)陽(yáng)性(+++)為細(xì)胞著色數(shù)目＞50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌PTEN表達(dá) 正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸癌組織PTEN的陽(yáng)性率分別為100.0%(30/30)和64.7%(44/68),正常結(jié)腸黏膜顯著高于結(jié)腸癌組織, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 結(jié)腸癌PTEN表達(dá)與結(jié)腸癌分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的聯(lián)系 高、中分化腺癌PTEN表達(dá)率84.2%(32/38), 明顯高于低分化腺癌表達(dá)率40.0%(12/30), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移的PTEN陽(yáng)性表達(dá)率為84.8%(39/46),明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTEN陽(yáng)性表達(dá)率18.2(4/22), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。浸潤(rùn)深度為黏膜及黏膜下層表達(dá)85.7%(36/42), 肌層和漿膜及漿膜外表達(dá)26.9%(7/26), 二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

PTEH中文名為：人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因, 為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因［1］, 近來(lái)研究顯示, 它在人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用,它定位于10q23染色體, mRNA編碼是5.5kh, 氨基酸共403個(gè),由180個(gè)氨基酸的催化區(qū)(N端)、165個(gè)氨基酸的C2區(qū)(中部)和50個(gè)氨基酸的尾區(qū)(C端)組成棚在N端催化區(qū)內(nèi)有與3, 4-二磷酸磷脂酰肌醇相結(jié)合的結(jié)構(gòu)區(qū)域, 在C端尾區(qū)內(nèi)含有一個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)可能是PEST的多個(gè)位點(diǎn)(磷酸化)和序列, N端與磷酸化酶功能相關(guān), 包括對(duì)蛋白質(zhì)和磷脂的脫磷酸化；C2區(qū)與細(xì)胞質(zhì)膜相連接：尾區(qū)C端參與穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)：尾區(qū)內(nèi)的結(jié)構(gòu)區(qū)域可以調(diào)節(jié)與細(xì)胞質(zhì)膜的結(jié)合。1997年由Li等［1］3個(gè)研究小組發(fā)現(xiàn), 也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)抑癌基因, 它具有雙特異性磷酸酶活性, 表達(dá)主要受miRNA、乙?；⒘姿峄胺核鼗绒D(zhuǎn)錄后調(diào)控。大量的實(shí)驗(yàn)證明, 在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中PTEN基因的缺失起到了非常重要的作用, 它通過(guò)影響磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/絲-蘇氨酸激酶(AKT)信號(hào)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的血管生成過(guò)程, 主要過(guò)程是：它可以通過(guò)其脂質(zhì)磷酸酶活性, PI3K的磷酸化作用的逆轉(zhuǎn), 移除磷脂酰肌醇-3磷酸的磷酸基團(tuán), 使成磷脂酰肌醇-2磷酸(PIP2)還原, 維持細(xì)胞內(nèi)低PIP3水平［2］。多種惡性腫瘤組織中均能見(jiàn)到腫瘤抑癌基因PTEN蛋白異常表達(dá), 但在不同腫瘤類型中基因突變率有很大的差別［3,4］,多步驟演變導(dǎo)致多基因突變累積的結(jié)果是引起腫瘤的發(fā)生,在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中抑癌基因功能喪失具有十分重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn), 結(jié)腸癌組織中PTEN的表達(dá)總陽(yáng)性率為64.7%, 顯著低于正常結(jié)腸黏膜組織的陽(yáng)性表達(dá)率, PTEN基因的異常表達(dá)在結(jié)腸癌組織中存在, 提示在結(jié)腸癌的發(fā)生中PTEN起著非常重要的作用, 同時(shí)還發(fā)現(xiàn), PTEN在低分化腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率為40.0%, 顯著低于高中分化腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率84.8%(P＜0.05), 斷定抑制細(xì)胞不正常增殖分裂功能喪失是PTEN蛋白下降或缺失的結(jié)果, 因而與結(jié)腸癌的變化、發(fā)展有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明, 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTEN表達(dá)率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率, 兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；隨著浸潤(rùn)深度的加深, 它的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 與文獻(xiàn)報(bào)道一致, 腫瘤的發(fā)生是一件極其復(fù)雜的過(guò)程, 人們對(duì)它與腫瘤發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系仍然存在著許多爭(zhēng)議和未知因素, 轉(zhuǎn)錄前及轉(zhuǎn)錄后結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展的調(diào)節(jié)機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。

總之, 本研究表明, 結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展與PTEN表達(dá)有關(guān), 它可為結(jié)腸癌的早期診斷、判斷預(yù)后和指導(dǎo)治療提供新的科學(xué)理論依據(jù)。

［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer. Science.1997.275(5308):1943-1947.

［2］ Choi JP, Desai R, Zheng Y, et al. Androgen actions via androgen receptor promote PTEN inactivation induced uterine cancer. Endocr Relat Cancer.2015.22(5):687-701.

［3］ Salvesen HB, Stefansson I, Kretzschmar EI, et al. Significance of PTEN alterations in endometrial carcinoma: a populationbased study of mutations, promoter methylation and PTEN protein expression. Int J Oncol.2004.25(6):1615-1623.

［4］ Bu HQ, Cai K, Shen F, et al. Induction of apoptosis by capsaicin in hepatocellular cancer cell line SMMC-7721 is mediated through ROS generation and activation of JNK and p38 MAPK pathways. Neoplasma.2015, 62(4):582-591.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.32.015

2015-06-01］

454001 河南省焦作市第二人民醫(yī)院病理科