RP-HPLC測定六味地黃丸中馬錢苷的含量

王 聰

（河南省鄭州市第一人民醫(yī)院藥劑科，鄭州 450000）

RP-HPLC測定六味地黃丸中馬錢苷的含量

王 聰

（河南省鄭州市第一人民醫(yī)院藥劑科，鄭州 450000）

目的建立六味地黃丸中馬錢苷的含量測定方法。方法 采用RP-HPLC法，色譜柱為Diamonsil C18柱(250 nm×4.6mm，5μm)，以乙腈：水=15∶85作為流動相，檢測波長為240 nm，柱溫為25℃，通過外標(biāo)法對六味地黃丸中馬錢苷的含量進(jìn)行測定。結(jié)果 馬錢苷線性回歸方程為Y=1610725.1X-11981.2，在0.08～1.6μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9991），平均加樣回收率為99.68%（RSD為1.07%）。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確，簡便，重復(fù)性好，靈敏度高，可用于對六味地黃丸的質(zhì)量評價(jià)及質(zhì)量控制。

六味地黃丸；馬錢苷；高效液相色譜法

六味地黃丸是棕褐色的濃縮丸，味甜而酸，由熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉六味藥組成。六味地黃丸是中醫(yī)補(bǔ)益劑中滋補(bǔ)腎陰的代表方劑，在中藥中占有很重要的地位，其功能是滋陰補(bǔ)腎，主要用于腎陰虧損，頭暈耳鳴，腰膝酸軟，骨蒸潮熱，盜汗遺精，消渴[1]。該方的主要成分有熊果酸，齊墩果酸等有機(jī)酸類[2]，澤瀉醇ABC[3]等萜類及芍藥苷，馬錢苷等苷類[4]。馬錢苷是六味地黃丸的有效成分，為提升六味地黃丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，保證制劑有效成分含量的穩(wěn)定性和可靠性，本文建立了用高效液相色譜法測定六味地黃丸中的馬錢苷含量的方法，并證明該方法簡便，快捷，可用于質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀（配Waters2998紫外檢測器，Empower色譜工作站）；DT-100電子分析天平 (北京光學(xué)儀器廠)，DL-360A超聲清洗機(jī) (上海之信儀器有限公司)；MIL-LI-QB純凈水發(fā)生器（美國MILLIPORE公司）；SHZ-D（Ⅲ） 型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；HH-6型數(shù)控恒溫水浴鍋（上海比朗儀器有限公司）；EYELA N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海愛朗儀器有限公司）。

1.2 試藥 九芝堂六味地黃丸濃縮丸 (批號：1201037、1201041、1201051，九芝堂股份有限公司)；馬錢苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111640-200503，五氧化二磷減壓干燥12h以上）；乙腈（HPLC級，Grace Company INC）；甲醇（分析純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 馬錢苷的含量測定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：Diamonsil C18柱 (250 nm×4.6mm，5μm)，柱溫為25℃；流動相：乙腈-水 (15：85)；檢測波長為240nm，理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.1.2 對照品溶液的制備 取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1m l含80μg馬錢苷的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取六味地黃丸濃縮丸50粒，研磨，取粉末約1g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25mL，稱定重量，超聲提取60min，放冷，再稱定重量，用50%的甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，過0.22μm的濾膜，即得供試品溶液。

2.1.4 陰性對照溶液的制備 按處方量制備不含山茱萸的陰性對照藥材，按“2.1.3”方法進(jìn)行處理，得陰性對照溶液。

2.1.5 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對照品、供試品及陰性對照溶液各10μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測試，結(jié)果陰性對照色譜中，在與對照品和藥材出峰時(shí)間處沒有相應(yīng)的色譜峰，表明其他組分對馬錢苷無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1馬錢苷HPLC色譜圖

2.1.6 線性關(guān)系考察 按以上色譜條件，分別用自動進(jìn)樣器進(jìn)1、2、4、8、10、20μL，按以上色譜條件下進(jìn)行測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以馬錢苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得到線性回歸方程Y=1610725.1X-11981.2，r=0.9991；結(jié)果表明，馬錢苷在0.08～1.6μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.7 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10μL，記錄馬錢苷的峰面積，計(jì)算精密度的RSD為1.01%，表明儀器的精密度良好。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取六味地黃丸樣品5份，按“2.1.3”項(xiàng)方法將其制備成供試品并按照上述色譜條件測定馬錢苷的含量，記錄馬錢苷的峰面積，計(jì)算RSD值為2.31%，表明重復(fù)性良好。

2.1.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量（含2.63mg/g馬錢苷） 的六味地黃丸約0.5g，共9份，精密稱定，分為3組，每組分別加入質(zhì)量濃度為1.247mg/mL的馬錢苷對照品0.8、1.0、1.2mL，按照以上供試品的制備方法制備供試品以及按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果顯示馬錢苷的加樣回收率的RSD為1.07%，見表1。

表1馬錢苷的加樣回收率結(jié)果 [例（%）]

2.2 樣品的測定 取3批六味地黃丸樣品（1201037，1201041，1201051），每批取6份，按照以上制備方法及色譜條件測定，記錄色譜峰面積并計(jì)算，測定結(jié)果見表2。

表2六味地黃丸樣品中馬錢苷含量測定結(jié)果 （%）

3 討論

3.1 流動相的考察 實(shí)驗(yàn)中對不同系統(tǒng)的流動相進(jìn)行了篩選考察，包括：乙腈-水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液、甲醇-水溶液；結(jié)果表明：把乙腈-水溶液做為流動相時(shí)效果最佳，色譜峰峰型及分離度均良好，且保留時(shí)間適宜，故選擇乙腈-水溶液作為流動相。

3.2 提取方法的考察 六味地黃丸為中藥復(fù)方制劑，對其進(jìn)行供試品制備的方法主要有超聲[5]，回流提取[6]兩種方法，故本文分別對這兩種方法進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)回流提取法提出馬錢苷的含量和超聲法提出的馬錢苷含量相比，無太大差異，因超聲提取法操作簡便，故選擇超聲提取法作為供試品的制備方法。

3.3 提取溶媒的考察 分別采用甲醇，50%甲醇，70%的甲醇為提取溶媒，對其進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)不同溶媒對馬錢苷的提取量有微小差異，最終確定以50%甲醇為提取溶媒。

六味地黃丸因其良好的療效及較為低廉的價(jià)格，在臨床上廣泛應(yīng)用。我們通過HPLC方法對六味地黃丸中的馬錢苷進(jìn)行含量測定，更科學(xué)、合理、全面地對山茱萸提取物進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)和控制，有利于生產(chǎn)及產(chǎn)品質(zhì)量的保證，我們建立的六味地黃丸中馬錢苷的含量測定方法，該法有良好的專屬性，靈敏度，且重現(xiàn)性好，可作為六味地黃丸中馬錢苷的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版一部）[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:26.

[2]熊筱娟，鄒盛勤，徐明，等.HPLC-PAD法測定市售六味地黃丸中熊果酸和齊墩果酸的含量[J].中成藥，2008，30(12):1789-1791.

[3]曾常青，曾宇，趙越，等.六味地黃湯中4種有效成分的含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(8):1034-1036.

[4]趙新峰，孔宏偉，汪江山，等.UFLC-ESI-IT-TOF鑒定六味地黃丸中的化學(xué)成分和代謝成分[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11(1):153-157.

[5]勵(lì)建榮，夏道宗.超聲波和溶劑法提取山茱萸中總皂甙的工藝研究[J].食品科學(xué)，2005，26(4)：198-202.

[6]韓志慧，張景偉，趙玉叢，等.7種山茱萸總皂苷提取分離方法效果比較[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005，40(3)：466-468.

Determination of Loganin in Liuwei Dihuang Pills by RP-HPLC

WANG Cong
(Pharmacy department,Zhengzhou First People's Hospital,Zhengzhou 450000,China)

ObjectiveTo develop an RP-HPLC method to determine the content of Loganin in Liuwei Dihuang pills.Methods Loganin was assayed by RP-HPLC.The condition is Acetonitrile-Purified Water（15：85）；wavelength 240nm；temprature 25℃.Results The linear regression equation is Y=1610725.1X-11981.2 (0.08～1.6μg),average recovery is 99.68（RSD=1.07%）.Conclusion Thismethod is sensitive,accurate and useful for the analysis of Loganin in Liuwei Dihuang pills.

Liuwei Dihuang pills;Loganin;RP-HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.02.078

1672-2779（2015）-02-0146-02

楊 杰 本文校對：胡春偉

2014-09-22）