腫瘤精準細胞免疫治療：夢想照進現(xiàn)實

錢其軍，吳孟超

（第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院）

腫瘤精準細胞免疫治療：夢想照進現(xiàn)實

錢其軍，吳孟超

（第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院）

自2015年1月20日美國總統(tǒng)奧巴馬高調宣布啟動“精準醫(yī)療計劃（Precision Medicine Initiative）”以來，全球范圍內掀起一股精準醫(yī)療熱。在國內，精準醫(yī)療也風生水起，受到業(yè)內學者、藥企代表、患者等相關人群的廣泛關注。精準醫(yī)療本質上是一種更為精確的個性化醫(yī)療，非常適用于惡性腫瘤的臨床治療。而相對于其他精準醫(yī)療策略，精準細胞免疫治療（Precision cell immunotherapy，PCIT）具有開發(fā)周期相對較短、投入相對較低的優(yōu)勢，適合我國的國情，具有巨大的應用前景，有望成為我國惡性腫瘤精準醫(yī)療的一大突破口。

1　精準醫(yī)療是腫瘤臨床治療的必然趨勢

精準醫(yī)療（precision medicine）是通過基因組、蛋白質組等組學技術和醫(yī)學前沿技術，對疾病進行精細分類及精確診斷，從而對疾病和特定患者進行個性化精準治療的新型醫(yī)學概念與醫(yī)療模式［1］。2011年，在“人類基因組計劃”完成近10年后，這一概念由美國著名基因組學家 Olson 博士在其參與起草的美國國家智庫報告《走向精準醫(yī)療》中首次提出。精準醫(yī)療模式集合了諸多現(xiàn)代醫(yī)學科技發(fā)展的知識與技術體系，體現(xiàn)了醫(yī)學科學發(fā)展趨勢，也代表了臨床實踐發(fā)展的方向，將帶來一場新的醫(yī)療革命并將深刻影響未來醫(yī)療模式。正是基于此考慮，2015年1月20日，美國總統(tǒng)奧巴馬在白宮高調宣布啟動“精準醫(yī)療計劃”，擬通過分析100萬名志愿者的基因信息，研究遺傳性變異在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，了解疾病治療的分子基礎，為藥物研發(fā)與患者“精準治療”明確方向，以推動個性化醫(yī)療的發(fā)展，并希望以此“引領一個醫(yī)學新時代”。

在美國提出的精準醫(yī)療計劃中，惡性腫瘤的精準醫(yī)療是“重中之重”，美國國立衛(wèi)生研究院下設的國家癌癥研究所將接受重點資助開展解碼腫瘤基因及開發(fā)精準治療研究。那么，為什么要從腫瘤著手開展精準醫(yī)療計劃呢？誠然，這與當前日趨嚴峻的腫瘤防治形勢相關，另一個重要的原因是提升腫瘤療效的迫切需求。眾所周知，腫瘤本質上是一種由一系列基因變異的積累導致的復雜遺傳疾病，這意味著腫瘤的基因組是動態(tài)變化的，且存在著高度異質性。不同的疾病進展階段以及不同的腫瘤細胞可能攜帶不同的變異信息，從而對以大規(guī)模人群為基礎開發(fā)和測試藥物的治療模式構成了顛覆性挑戰(zhàn)。據(jù)一項覆蓋9個國家和地區(qū)的1217例患者的泛亞洲科研顯示：如果沒有基因檢測鑒定相關的靶標卻接受了靶向治療，死亡風險將增加185%［2］。而新一代測序技術能夠無假設、高分辨率地分析基因組，獲知這些不同的變異信息，能為制定更具針對性和有效性的防治措施提供準確依據(jù)，指導醫(yī)生對患者采取個性化用藥?；谏鲜鲈?，精準醫(yī)療模式已然成為癌癥治療刻不容緩的任務，是惡性腫瘤治療的大勢所趨。

在具體操作中，腫瘤精準醫(yī)療通?？蓜澐譃橐韵氯壳夯驒z測，大數(shù)據(jù)分析和用藥指導。第一步，基因檢測是患者變異信息的獲知過程，如通過高通量測序方法獲得腫瘤單核苷酸有義突變、拷貝數(shù)變異、基因移位和融合基因等海量基因變異信息，該環(huán)節(jié)中相關檢測技術的精確性及所檢測對象（如腫瘤組織標本）所反映信息的全面性是關鍵。第二步，大數(shù)據(jù)分析是相關變異信息的解碼與提煉過程，即從海量的組學數(shù)據(jù)中抽絲剝繭、去粗存精，提取有價值信息，發(fā)揮前后兩個環(huán)節(jié)之間承上啟下的作用，該環(huán)節(jié)相應分析模型與分析方法的精確性是關鍵。第三步，用藥指導是以大數(shù)據(jù)分析結果作為參考，制定因人、因病而異的治療方案的過程；而治療的結果也可以反饋到第一個環(huán)節(jié)，通過新的環(huán)路保證治療能隨病情的變化而做出相應的調整。候選藥物可涵蓋所有類型惡性腫瘤臨床用藥，甚至用于其他疾病治療的藥物。該環(huán)節(jié)中，可供選擇的治療藥物的豐富度直接關系到實施精準醫(yī)療治療的成敗。

精準醫(yī)療直指惡性腫瘤臨床治療的軟肋，其好處不言而喻，已在臨床治療中越來越顯現(xiàn)其價值。然而，每個患者多個癌細胞在癌變過程中與之相關的基因突變位點有成千上萬處，而其中起決定性作用的基因突變往往不足十處，如何從每個患者成千上萬處體細胞突變中找到每個腫瘤細胞真正的阿喀琉斯之踵，即引發(fā)癌變的關鍵基因，并非是一件容易的事；由于腫瘤的異質性，同一腫瘤患者不同癌細胞的基因突變并不一定相同，不同關鍵基因突變的隨機組合，導致癌癥治療難度大為增加；更為嚴重的事是癌癥細胞周期檢查點已破壞，各種新突變及融合基因仍在不斷累積，這些新突變及融合基因可能會破壞這些靶向藥物的靶點及其下游信號，從而使靶向治療藥物失效。因此，看似已抑制了關鍵基因，但癌癥細胞又建立新的關鍵基因并產(chǎn)生旁路。按精準醫(yī)學模式，希望將癌癥變?yōu)橐环N慢性病，但從發(fā)現(xiàn)靶點—使用靶向藥物—靶點突變或建立新旁路—癌癥復發(fā)—尋找新靶點—使用新靶向藥物，這種反復的貓捉老鼠的游戲，傳統(tǒng)藥物開發(fā)手段難以開發(fā)滿足所有變異信息的治療藥物，同時腫瘤基因突變的速度可導致費盡心思尋找到的藥物在幾個月時間內失效，患者只能輾轉于不同藥物的變換，對患者家庭乃至整個醫(yī)療保險體系造成巨大經(jīng)濟負擔。腫瘤精準醫(yī)療的這一系統(tǒng)性缺陷應值得引起充分的重視。

2　精準細胞免疫治療是腫瘤精準醫(yī)療的重要突破口

人類的免疫系統(tǒng)具有高度的特異性，能正確區(qū)分正常和惡性細胞，能以高度的敏感性和特異性識別“非自我的”分子或細胞，功能正常的T淋巴細胞能通過其細胞表面TCR受體（T cell receptor）正確識別腫瘤細胞中“非自我”改變，清除腫瘤細胞。因而，從這個意義上說，通過激活、修復、改構、甚至重建患者抗腫瘤免疫細胞反應的治療方法，尤其腫瘤細胞免疫治療，天然具有精準治療的特征。通過激活患者體內殘存腫瘤特異性T細胞的治療方式，已被證實具有良好的臨床療效［3-8］。更值得慶幸的是，不同T細胞所攜帶的TCR受體千差萬別，具有高度的多樣性，為實施針對不同腫瘤變異信息的精準醫(yī)學治療提供了足夠的廣度。而且，免疫細胞來源于患者自體，作為一種“活的藥物”，具有自主性與自我適應能力，能有效縮短開發(fā)時間［9］。因而，精準細胞免疫治療有望成為腫瘤精準醫(yī)療的一個重要突破口。

本文定義的精準細胞免疫治療是通過高通量基因測序及大數(shù)據(jù)分析，獲得針對癌細胞特異性新抗原（neo-antigens）和具有高效應的精準T細胞（precision T cell for neoantigen，PNA-T），富集PNA-T對腫瘤患者進行精準免疫治療。涉及的步驟（圖1）包括：（1）基因檢測：高通量基因檢測手段獲取患者的癌細胞特有的基因變異信息（包括突變、融合基因等），從中篩選出能高效激活免疫反應的腫瘤特異性新抗原，這種新抗原可以來自細胞核、細胞質、細胞膜任何部位；（2）免疫靶點的篩選：根據(jù)患者的主要組織相容性復合體（major histocompatibilty complex，MHC）分型，尋找能引發(fā)強烈免疫的新表位（neo-epitopes）；（3）尋找并富集針對新抗原表位的PNA-T：主要通過負載新表位的樹突狀細胞（dendritic cells，DC）刺激，標記后的MHC-新表位耦聯(lián)體流式/磁珠分選富集PNA-T，克隆PNA-T的TCR基因，通過轉基因修飾手段快速獲得轉基因PNA-T；（4）過繼細胞回輸治療：大量擴增PNA-T，實施過繼回輸治療，并跟蹤PNA-T的變化規(guī)律與腫瘤關系。因而，腫瘤精準細胞免疫治療是更為個性化的免疫細胞治療技術，屬于第三代免疫細胞治療技術（三代免疫細胞治療技術的比較見表1）。

雖然腫瘤精準細胞免疫治療是一個新概念，但該領域內研究者已進行了一些探索研究［10-11］。2013，Rosenberg 領導的團隊率先采用外顯子測序技術，鑒別在患者中表達的突變蛋白，并用一種MHC分子-抗原表位親和力算法進行模擬預測評估，進而合成候選的抗原表位，開展免疫反應驗證。通過此方法，研究人員能快速鑒別出了在患者腫瘤細胞上表達，能被腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TIL）識別的突變抗原［12］。2014年，Rosenberg團隊將該方法成功應用到臨床，他們通過高深度外顯子測序技術、免疫反應功能驗證，篩選出一位轉移性膽管癌患者的高頻突變基因，并鑒定到其對應的TIL，通過大量擴增該TIL克隆并實施回輸治療，使患者的病情得到有效控制［13］。2014年底，另一個研究團隊聯(lián)合應用外顯子測序技術、轉錄組測序技術、高通量蛋白質譜分析技術，及MHC抗原表位親和力模擬預測技術，尋找到能被T細胞識別從而高效激活免疫反應的多肽疫苗，該個性化腫瘤疫苗兼具預防性疫苗與治療性疫苗的效能［6］。筆者研究團隊作為全國第一家獲得細胞治療應用批文的單位，對精準醫(yī)療在免疫細胞治療方向中應用的重要性有深刻的體會，前瞻性地開展了精準細胞免疫治療的技術開發(fā)，搭建了高通量測序平臺，采用了患者循環(huán)腫瘤細胞的富集與單細胞分離技術、免疫新靶點的生物信息學篩選技術等，為實施精準細胞免疫治療打下堅實的基礎。

3　腫瘤精準細胞免疫治療面臨的技術難點

如前所述，免疫治療的理想靶點具有區(qū)別于其他靶向治療策略的特征：小分子靶向藥物注重的是能有效干預對腫瘤細胞生長、侵襲、轉移等細胞行為至關重要的基因及調控通路，而細胞免疫治療的關注點是其能否有效地被免疫系統(tǒng)識別，引起有效的免疫反應。所以，同樣從基因檢測出發(fā)，精準細胞免疫治療的側重點具有其特殊性，目前仍有幾大技術難題亟待解決。

3.1方便快速地獲取腫瘤患者的基因組變異信息

實際上，這是腫瘤基因檢測所面臨的共性問題。腫瘤基因檢測最直接的對象是患者原代組織標本，但對于那些未進行過手術的腫瘤患者，腫瘤標本不易獲取，而活檢穿刺的技術雖已較為成熟，但患者接受度相對較低，尤其對那些已發(fā)生多處轉移的患者。即便之前留有標本，但往往是幾個月前甚至是幾年前保存的局部標本，鑒于腫瘤基因組的動態(tài)性與異質性，它們反映的信息已經(jīng)是過時的或者代表的信息不全。循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cell，CTC）和循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor NNA，ctDNA）由腫瘤發(fā)生的各個部位釋放入血，能良好地反映患者整體的腫瘤負荷、惡性程度、轉移能力以及實時的基因突變信息［13-14］。因而，選擇CTC和ctDNA作為基因檢測的樣品來源，可以保證腫瘤治療在取樣信息上的全面精準，且與組織活檢相比具有檢查微創(chuàng)小、無放射性污染、經(jīng)濟等優(yōu)點，并允許對治療反應進行實時監(jiān)測。

然而，如何獲取高純度的CTC細胞并進行基因測序，以及如何在外周血巨大噪音背景的情況下準確檢測ctDNA是一項具有挑戰(zhàn)的工作。筆者研究團隊通過分離介質、抗體捕獲、熒光掃描顯微技術、激光顯微捕獲等整合技術平臺可以高效獲得單個CTC細胞用于基因檢測；同時開發(fā)了通過油滴PCR實現(xiàn)在一個油滴內單個CTC基因檢測技術，以及利用納米孔徑的芯片進行ctDNA的腫瘤突變基因檢測技術。發(fā)展類似于CAPP-Seq的超靈敏測序方法，可以實現(xiàn)100%地檢出2-4期NSCLC患者ctDNA，也可檢出1期NSCLC患者50%的ctDNA，可以特異性（96%）檢出等位基因突變，并將錯誤率降低至約0.02%水平。這類技術平臺有望利用CTC和ctDNA進行外周血腫瘤基因的精準檢測，為精準細胞免疫治療提供可靠的檢測依據(jù)。

3.2快速準確地篩選免疫細胞治療的合適靶點

在腫瘤表觀遺傳修飾變異尚無法被有效利用的現(xiàn)實條件下，細胞免疫治療更多的著眼點是腫瘤基因組遺傳變異，而只有那些能形成新的氨基酸序列且在腫瘤細胞中有效表達的變異信息才能被免疫系統(tǒng)有效識別。因而，通過外顯子組測序探知腫瘤的基因組變異信息，通過RNA轉錄組測序確定發(fā)生變異的DNA的轉錄情況，是尋找適合免疫治療新抗原的常規(guī)方法。獲得一系列候選新抗原信息后，如何從中篩選出能被抗原提呈細胞有效提呈的抗原，即新表位是至關重要的一步。通常的觀點認為，能與MHC分子高效結合的抗原序列，能更好地形成MHC分子-抗原復合物，從而具備更高的概率被提呈到細胞表面，成為新抗原表位。因而，預測MHC分子與抗原的親和力是該環(huán)節(jié)的關鍵要素。隨著MHC分子的空間結構越來越清晰化、準確化，多種MHC分子-抗原復合物的數(shù)學模型已被建立，通過計算機模擬運算能預估出每種抗原與MHC分子的親和力數(shù)值。但鑒于MHC分子亞型的多樣性，新抗原前后氨基酸序列以不同組合、不同長度形成表位的多樣性，數(shù)據(jù)龐大，目前該預測方法仍不夠成熟，假陽性或假陰性仍普遍存在，需要后續(xù)耗時耗力的驗證工作。因而，MHC分子與抗原的親和力的準確預估，仍有待于通過數(shù)據(jù)的不斷積累、預測模型的不斷優(yōu)化來實現(xiàn)。

3.3高效尋找PNA-T的TCR組學技術

腫瘤精準細胞免疫治療最終的效應細胞是PNA-T。然而，雖然正常人的TCR多樣性巨大，但腫瘤患者經(jīng)過長期的免疫編輯，或經(jīng)過其他非特異性治療策略處理后，其TCR組多樣性較正常人明顯降低，TCR多樣性的降低預示著患者體內預留的識別特定表位的TCR豐富度降低，即使經(jīng)過上述兩個步驟成功尋找到合適的新抗原表位，但可能無法在患者體內找到與之對應的PNA-T（除非通過轉基因TCR-T技術實現(xiàn)），精準細胞免疫治療仍將以失敗告終。因而，除了對腫瘤變異信息進行高通量檢測分析外，還需從免疫T細胞角度進行考量，通過高通量測序的方法評估腫瘤患者體內是否存留能對腫瘤抗原起反應的PNA-T。目前，利用TCR組學高通量測序技術可以較為準確地獲得患者的TCR多樣性數(shù)據(jù)，可以分析腫瘤患者和正常人之間TCR多樣性的差異。但由于TCR與表位的作用并不是一一對應關系的，即同一個TCR可以結合不同的表位，而同一個表位也可能被不同的TCR所識別，顯然它們之間親和力會有所差異。而且TCR組庫測序得到的是大量單獨的α鏈和β鏈信息，這些α鏈和β鏈理論上可以通過不同的組合構成千差萬別的TCR。因而，以目前的技術水平仍難以解析出哪個TCR-T細胞具有識別特定抗原表位的功能?？梢灶A想，如果通過技術進步以及抗原表位-TCR配對大數(shù)據(jù)的積累，能最終實現(xiàn)獲得針對特定抗原表位，能快速地鑒別出哪些T細胞攜帶的TCR基因能對其有效識別并發(fā)揮治療作用，那么將大大縮短腫瘤免疫治療的開發(fā)進程，為患者的治療贏得寶貴的時間，并可以通過測序或數(shù)字PCR等手段檢測體內這一群或者單個PNA-T的克隆增殖情況，實時監(jiān)測治療的獲益情況。筆者所在團隊正致力于發(fā)展基于CTC和ctDNA為樣本來源的腫瘤抗原測序技術以及TCR組庫的測序技術，包括通過油滴技術實現(xiàn)高通量的單個T細胞的微乳滴PCR（emulsion-PCR，emPCR）測序來獲得α鏈和β鏈的匹配信息，以此打開篩選特定抗原反應性TCR受體的方便之門。

3.4新表位特異性PNA-T的富集與擴增

實施精準細胞免疫治療的最后階段是PNA-T克隆的富集與擴增，有3個策略可供選擇：（1）將新表位負載到患者自體的DC中，然后應用成熟的DC刺激相應的PNA-T亞群特異性增殖。該策略的優(yōu)點是相對成熟，但由于涉及DC的抗原負載、DC內的抗原加工、DC對T細胞的提呈等一系列過程，各個環(huán)節(jié)的技術障礙均會影響相應T細胞的富集效率；且DC擴增不易，導致該流程耗費時間較長。（2）PNA-T的直接分選。通過在體外合成HLA-抗原肽四聚體（HLA-peptide tetramer）能夠有效地被特異性T細胞識別，配合流式細胞分選術，可以從淋巴細胞中分選出抗原特異性的T細胞克隆，再通過成熟的T細胞培養(yǎng)方案可大量擴增相應的T細胞克隆。但分選流式儀器價格昂貴，細胞通量有限，長時間分選會影響細胞活力，對后續(xù)細胞培養(yǎng)造成不良影響。為此，筆者實驗室建立結合HLA-抗原肽四聚體與免疫磁珠法的T細胞分選技術，有效提高細胞分選通量，且磁珠可通過后續(xù)切除消除其對細胞的影響，整個流程符合臨床應用規(guī)范。下一步將設法將該技術集成到單一儀器設備中，提高操作的便捷性與穩(wěn)定性。（3）通過轉基因修飾手段，將克隆到的PNA-T的TCR基因導入初始T細胞，使其快速具有識別并殺傷攜帶相應新表位的腫瘤細胞的能力。

3.5基于PNA-T變化規(guī)律的療效的實時監(jiān)控技術

療效評估是過繼細胞免疫治療的一大技術難點。與其他治療方式不同，經(jīng)行過繼細胞治療后，腫瘤負載可能不會立即縮小，甚至可能暫時增大，不利于臨床醫(yī)生對病情的準確掌控。因而，應用PNA-T對腫瘤患者實施過繼細胞治療，在治療過程需要跟蹤血液中PNA-T及其來源記憶性T細胞的數(shù)量變化，對比觀察其與腫瘤縮小或腫瘤復發(fā)、進展的關聯(lián)性，同時實時監(jiān)控血液中CTC、ctDNA的含量變化以及腫瘤新突變位點出現(xiàn)情況。通過數(shù)據(jù)的積累，建立關聯(lián)PNA-T體內動態(tài)變化規(guī)律與患者療效的數(shù)學模型，從而實現(xiàn)醫(yī)生能對病情實時作準確判定甚至預判的目標，以作出相應治療對策的調整，使患者能更好地獲益。

3.6增強精準細胞免疫治療體內療效的輔助技術

相對于體外培養(yǎng)條件，腫瘤部位存在抑制免疫的微環(huán)境。例如，腫瘤細胞表面高表達的PDL1可與T細胞表面PD1結合，使浸潤到腫瘤部位的T細胞失能，這也是為何一些免疫檢查點（如PD1/PDL1、CTLA4）單抗能通過重新激活體內殘留的腫瘤特異性T細胞，而在實體瘤的臨床治療中發(fā)揮良好療效的基本原理。另一方面，T細胞的持續(xù)發(fā)揮作用，需要共刺激信號（T細胞第二信號）的輔助，回輸后的T細胞如缺乏共刺激信號，將很快衰竭死亡，這也是嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）T細胞技術將第一信號與第二信號偶聯(lián)在同一分子上的根本原因。因而，為有效提高精準細胞免疫治療的療效，一方面可以通過免疫檢查點單抗的聯(lián)合使用，阻斷腫瘤微環(huán)境對回輸后腫瘤特異性T細胞的不良干擾效應；另一方面，可以借助基因轉染技術，將相應的傳遞共刺激信號元件在體外導入腫瘤特異性T細胞，從而延長回輸后腫瘤特異性T細胞在體內的存活時間與治療作用。在此方面，筆者團隊已建立一系列核心技術，申請中國發(fā)明專利緣項（已授權1項），顯示出良好的應用價值。

4　精準細胞免疫治療與CAR-T細胞治療的比較

在國際上另一種熱門的免疫細胞治療技術是CAR-T細胞治療技術。精準細胞免疫治療與它既具有共性特征，也有其各自的特殊屬性，兩者具體比較見表2。

CAR是識別腫瘤細胞膜上腫瘤相關抗原（tumor associated antigen，TAA）的單鏈抗體和胞內信號域“免疫受體酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，ITAM；通常為CD3ζ或FcεRIγ）”通過鉸鏈區(qū)相連構成的嵌合基因。將CAR基因通過基因轉導/轉染的技術導入患者T細胞后，使其表達CAR基因，獲得的CAR-T細胞具有識別并攻擊表達相應TAA的腫瘤細胞的能力。因而，CAR-T技術本質是通過基因轉染手段快速獲得腫瘤殺傷性T細胞的方法。由于CAR-T細胞所識別的是腫瘤細胞表面的蛋白，而非與MHC分子結合形成MHC-抗原復合物從而被提呈到細胞表面的抗原，因而可繞過T細胞的MHC分子限制性。而且，CAR-T技術通常將T細胞的第一信號與第二信號偶聯(lián)到同一分子結構中，使CAR-T細胞具有更強的自主性，基本無需其他類型免疫細胞的輔助即可發(fā)揮治療作用。鑒于CAR-T技術的精妙設計，其具有廣闊的應用前景。

精準細胞免疫治療與CAR-T技術所采用的效應細胞均是患者自體的T淋巴細胞，不同之處在于所針對的靶點類型的差別：精準細胞免疫治療瞄準的是患者特有的新抗原（即腫瘤特異性抗原），這些新抗原與MHC分子結合形成MHC-抗原復合物后被提呈到細胞表面，在被提呈前，這些抗原可以分布在細胞各個位置，包括細胞核、細胞質、細胞膜上，可選擇范圍更廣。所以，不管是效應細胞本身還是所針對的抗原，精準細胞免疫治療均是個性化的。CAR-T技術所針對的靶點是表達在腫瘤細胞膜上的腫瘤相關抗原，可供選擇的范圍較窄，特異性相對較差；但這一抗原可以是一類患者群體中普遍存在的抗原靶點，如表達于B細胞淋巴瘤細胞表面的CD19蛋白。因而，CAR-T技術所選用的效應細胞來源是個性化的，但治療靶點是非個性化的，無需通過高通量的檢測手段配合。

通常情況下，精準細胞免疫治療策略是從患者自體T細胞群體中尋找到天然存在的、能針對新抗原的腫瘤特異性T細胞，歸根到底采用的是未經(jīng)人工改造的天然免疫細胞；而CAR-T技術涉及轉基因過程，是人工改造的腫瘤特異性T細胞。目前，轉基因修飾技術多采用慢病毒載體系統(tǒng)，慢病毒為RNA病毒，其規(guī)?；a(chǎn)及病毒穩(wěn)定性均面臨諸多技術障礙。為解決該難題，筆者實驗室已研發(fā)出一套高效的非病毒載體系統(tǒng)，該非病毒載體比慢病毒載體具有更高的轉染率，具有易于規(guī)?；a(chǎn)及穩(wěn)定性高的特點，將為CAR-T技術的廣泛臨床應用鋪平道路。

5　結語

隨著人們對惡性腫瘤認識的不斷深刻，已經(jīng)越來越意識到實施腫瘤精準醫(yī)療的必要性與迫切性。而相對于其他基因檢測指導下的個性化治療方式，精準細胞免疫治療作為一種“活的藥物”，為快速制定針對特定新抗原表位的治療方式提供足夠的廣度與可行性。因而，有理由相信，精準醫(yī)學的“重中之重”是腫瘤精準醫(yī)學，而中國的腫瘤精準醫(yī)學突破口在于腫瘤精準細胞免疫治療。隨著精準細胞免疫治療各項配套技術的日趨成熟與完善，它將在惡性腫瘤治療中發(fā)揮越來越重要的作用。

錢其軍qianqj@163.com吳孟超 mcwu@public.sta.net.cn

摘編自《中國腫瘤生物治療雜志》2015年22卷4期：151-158，圖、表、參考文獻已省略。