PDE5巰基亞硝基化增加其泛素-蛋白酶體途徑依賴的降解

王月，張　萍，徐知遇，陳英杰，陸忠兵(中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049)

PDE5巰基亞硝基化增加其泛素-蛋白酶體途徑依賴的降解

王月，張萍，徐知遇，陳英杰，陸忠兵
(中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049)

目的:研究一氧化氮介導(dǎo)的巰基亞硝基化(S-nitrosylation)對(duì)磷酸二酯酶5(PDE5)蛋白穩(wěn)定性的影響，闡明衰竭心臟中PDE5表達(dá)增加的分子機(jī)制。方法:采用質(zhì)譜分析和點(diǎn)突變的手段，檢測(cè)PDE5發(fā)生S-nitrosylation的位點(diǎn)。采用Western blot的方法檢測(cè)一氧化氮和過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞PDE5表達(dá)的變化。結(jié)果:在細(xì)胞和動(dòng)物模型中均可以檢測(cè)到PDE5發(fā)生S-nitrosylation，這種修飾發(fā)生在第220位的半胱氨酸殘基上。發(fā)生S-nitrosylation修飾后，PDE5的活力降低20%左右，并很快被泛素-蛋白酶體系降解，引起細(xì)胞內(nèi)PDE5的表達(dá)上調(diào)。突變第220位半胱氨酸殘基、過(guò)氧化氫預(yù)處理以及抑制sGC和PKG活力均可以抑制一氧化氮引起的PDE5表達(dá)下調(diào)。突變PDE5的磷酸化位點(diǎn)也有類似效果。反過(guò)來(lái)，在心肌細(xì)胞中抑制一氧化氮合酶(NOS)活力或敲除NOS3均可以提高PDE5的表達(dá)。結(jié)論: S-nitrosylation能夠引起PDE5的降解，而衰竭心臟中一氧化氮生物利用率的降低可能是導(dǎo)致PDE5表達(dá)增加的主要原因。

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