膠體金法定性檢測試劑技術審評要點分析

李小江 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認證中心 （廣東 510000）

0.前言

膠體金試劑由于其快速、便捷、不需特殊設備、結果判斷直觀使其在醫(yī)學檢驗領域得到了迅猛的發(fā)展，特別是在床旁診斷和家庭使用中發(fā)揮著越來越重要的作用。該類產品生產廠家眾多，大小參差不齊，產品質量水平差距也較大。該類產品審評目前在國內沒有統(tǒng)一的行業(yè)標準和相關指南，下面結合筆者多年的審評經驗對審評中的重點問題進行分析。

1.適用范圍

本文所述適用于依據《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5 號）（以下簡稱《辦法》）管理類別為Ⅱ類的、基于抗原抗體反應原理的膠體金免疫層析法進行定性檢測的體外診斷試劑（盒）。其中所述“定性”是指只給出陰性或陽性（有反應或無反應、是或非、有或無、正?；虍惓＃﹥煞N可能的結果。至于定量、半定量檢測試劑（盒）不在本文討論范圍之內。

2.產品技術要求

產品技術要求應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《醫(yī)療器械產品技術要求編寫指導原則》的相關規(guī)定。試劑（盒）性能指標主要包括：外觀、膜條寬度、液體移行速度、最低檢測限（分析靈敏度）、特異性、重復性、批間差等。檢驗方法中應明確說明采用的參考品/標準品、樣本制備方法、使用的試劑批次和數(shù)量、試驗次數(shù)、計算方法。下面對幾個關鍵性能指標的關注點進行說明：

2.1 最低檢測限（分析靈敏度）

檢出限是定性檢測試劑(盒)的一項關鍵指標，其濃度點的選擇應符合臨床實際診斷意義。為了避免在臨床應用時出現(xiàn)過多的“假陽性”結果，企業(yè)在確定該產品的檢出限時應結合其實際的臨界值，建議不應把兩者濃度差設定的過大。在評價該項指標時，不但要驗證檢出限濃度點的陽性符合率情況，還要驗證陰性參考品的符合情況。如申報產品有相應的國家參考品，則企業(yè)內部陽性/陰性參考品應參考國家參考品的項目設置。在不低于國家參考品要求的前提下，申請人應根據產品性能驗證的實際情況自行設置合理的企業(yè)內部參考品。申請人應對內部陽性/陰性參考品的來源、抗體濃度等信息進行精確的實驗驗證，并提交詳細的驗證資料。

2.2 分析特異性

（1）交叉反應

對抗原結構相近或臨床癥狀相似的其他相關抗體血清進行交叉反應研究。申請人應提交所有用于交叉反應驗證的病原體來源、濃度確認等信息。

（2）干擾物質

對樣本中常見的內源性干擾物質進行檢測，如溶血、高脂、黃疸等，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質極限濃度。

2.3 重復性

檢測重復性指標時建議采用臨界值附近的樣品進行多次檢測，然后計算同一份樣品多次檢測的結果或其精確性。在分析試劑重復性時，不應使用強陽性樣品或明顯陰性的樣品，否則無法客觀地評價其檢測效果。

2.4 批間差

取三個批號的試紙，每個批號抽取相同數(shù)量，按照說明書步驟操作，對重復性進行檢測，三個批號測試條的結果應一致，顯色度均一。

3.產品說明書

3.1 產品名稱

試劑（盒）通用名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測試劑（膠體金法）。

3.2 預期用途

第一段內容詳細說明產品的預期用途，如試劑（盒）用于體外定性檢測人血清、血漿、全血、尿液等樣本的被測物水平，適用的樣本類型應結合實際的臨床研究情況進行確認。

第二段內容說明與預期用途相關的臨床適應癥及背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法等。

3.3 主要組成成分

（1）應說明試劑(盒)包含組分名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑(盒)中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應明確其相關信息。（3）試劑(盒)中各組分不同批號間如果可以互換，應明確說明并提交相關驗證材料。

3.4 儲存條件及有效期

（1）對試劑(盒)的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等信息做詳細介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。（2）開封后未使用產品允許暴露于空氣中的溫濕度及期限等條件予以明確。（3）不同組分保存條件及有效期不同時，應分別說明，產品總有效期以其中最短的為準。

注：保存條件不應有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。穩(wěn)定期限建議以月或日為單位。

3.5 樣本要求

重點明確以下內容：（1）樣本采集前對患者的要求：如采集時間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。（2）樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿或全血樣本，應注明對抗凝劑的要求。（3）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫、凍融次數(shù)、對儲存樣本的添加劑要求等。（4）已知的干擾物。

3.6 檢驗方法

（1）詳細說明試驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。（2）應明確試驗環(huán)境溫濕度、測試時間(如觀察時間、失效時間等)，以及樣本的復溫要求等試驗過程中的注意事項。不同型號產品，加樣方法如有差異，建議分別以圖示方式描述清楚。

3.7 檢驗結果的解釋

詳細描述對檢測結果的判定(無效、陰性、陽性等)，建議結合不同情況加以圖示說明。

3.8 檢驗方法局限性

綜合產品的預期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關說明，舉例如下：

（l）本產品檢測結果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查、治療反應等信息綜合考慮。（2）本產品檢測原理為基于抗原抗體反應的膠體金免疫層析法，可能會受到一些特殊樣本的影響而導致假陽性結果。（3）高濃度樣本可能會出現(xiàn)H00K 效應而導致假陰性，應將其稀釋后再檢測。應注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（4）建議對申報試劑臨床研究中的病例人群特征進行說明，并對適用人群的性別、年齡、地域等特征進行明示。

3.9 注意事項

應至少包括以下內容：（1）本試劑(盒)的檢測結果僅供臨床參考，患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。（2）由于方法學或抗體特異性等原因，使用不同生產商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會得到不同的測試結果，因此，在病程監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋，建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。（3）樣本：采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

4.臨床評價資料

生產企業(yè)應按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》及《體外診斷試劑注冊管理辦法》的要求進行產品臨床試驗，應注意以下要求：

4.1 研究方法

有同類產品上市的一般選擇與已上市的同類產品進行臨床研究。對比產品應選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品，證明本品與已上市產品等效或優(yōu)于已上市產品。研究對象應包括兩組，一組是用對比試劑確定為陽性的異常組，另一組是用對比試劑確定為陰性的對照組。

對于新研制體外診斷試劑而言，選擇適當?shù)氖茉囌?，采用試驗用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標準”進行盲法同步比較。

4.2 臨床研究單位的選擇

第二類體外診斷試劑申請人應當選定不少于2 家（含2 家）臨床試驗機構，按照有關規(guī)定開展臨床試驗，臨床試驗機構應獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質認可。

4.3 病例選擇及樣本類型

4.3.1 臨床試驗樣本量的確定：注冊申請人（簡稱申請人）或/臨床研究者應根據產品臨床使用目的，與該產品相關疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導原則有關最低樣本量要求的前提下，還應符合統(tǒng)計學要求。

①臨床研究的總樣本數(shù)至少為200 例（新研制體外診斷試劑產品的臨床試驗樣本量要求同第三類產品）。②陽性樣本不少于總樣本的30%。包含陽性、陰性樣本，樣本數(shù)目應盡可能原分布，盡可能收集/獲取臨界值的樣本，并考慮弱陽性樣本。

4.3.2 應明確臨床樣本的采集要求。

①盡可能采用新鮮樣品，避免貯存。②對檢測結果有明顯干擾作用的樣本，如溶血、脂血、黃疸樣本盡量避免使用。

4.3.3 試驗方案中應確定嚴格的病例或樣本納入/排除標準，任何已經入選的病例或樣本再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。

4.4 統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如陰/陽性符合率、檢測結果一致性分析等。

對于本類產品對比實驗的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結兩種試劑的定性檢測結果，對定性結果進行四格表卡方或kappa 檢驗以驗證兩種試劑定性結果的一致性，統(tǒng)計學分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。

如直接與臨床金標準比對，則除了進行上述統(tǒng)計分析外，還應進行臨床特異性、敏感性的相關分析。

4.5 結果差異樣本的驗證

在數(shù)據收集過程中，對兩種試劑檢測結果不一致的樣本，應采用“金標準”方法或臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑進行復核，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。

5.結語

膠體金法定性檢測試劑審評的規(guī)范化、標準化，將幫助相關審評人員更深入地了解該類產品的性能特點，把握技術審評工作的基本要求和尺度，對產品安全性、有效性作出更全面系統(tǒng)的評價。同時也更有利于指導生產企業(yè)的產品注冊工作，促進產品安全有效上市。

[1] 《體外診斷試劑注冊管理辦法》,(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令 第5 號),2014 年7 月30 日.

[2] 《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第16 號），2014 年9 月11 日.

[3] 《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通道》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第17 號），2014年9 月11 日.

[4] 《關于發(fā)布醫(yī)療器械產品技術要求編寫指導原則的通過》,( 國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第9 號), 2014年5 月30 日.

[5] 《關于公布醫(yī)療器械注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》,( 國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014 年第43 號 ) , 2014 年9 月5 日.

[6] YY/T 1164-2009, 人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測試紙（膠體金免疫層析法）[s]. 北京：中國標準出版社，2011.

[7] 中國生物制品規(guī)程[M]. 北京：化學工業(yè)出版社. 2000.