不同造模方法的胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型比較

李　敏　陳　洪　張　程　邢德剛(廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東　廣州　510006)

不同造模方法的胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型比較

李敏陳洪張程邢德剛
(廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東廣州510006)

〔摘要〕目的比較不同方法建立的胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型，為胃腸動(dòng)力障礙疾病研究中動(dòng)物模型的建立、選擇與實(shí)際應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將80只昆明種小鼠，分為8組，每組10只。A組空白對(duì)照組; B組腹腔注射生理鹽水組; C組生理鹽水灌胃組; D組甘草煎劑造模組; E組肢體缺血-再灌注造模組; F組冰水刺激造模組; G組阿托品造模組; H精氨酸造模組。造模結(jié)束后，測(cè)定實(shí)驗(yàn)小鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率，比較各組胃腸動(dòng)力障礙的發(fā)生程度。結(jié)果各組模型小鼠胃內(nèi)殘留率分別為: A組43.5％，B組42.6％，C組42.1％，D組70.7％，E組57.2％，F(xiàn)組56.4％，G組59.5％，H組66.2％;各組模型小鼠小腸推進(jìn)率分別為A組90.7％，B組89.1％，C組89.3％，D組62.2％，E組75.9％，F(xiàn)組71.5％，G組68.1％，H組72.1％。結(jié)論甘草煎劑造模組出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙最明顯，造?？煽?。

〔關(guān)鍵詞〕胃腸動(dòng)力障礙;動(dòng)物模型;胃內(nèi)殘留率;小腸推進(jìn)率

第一作者:李敏(1991-)，男，碩士，主要從事胃腸動(dòng)力學(xué)的研究。

胃腸動(dòng)力障礙性疾病(DGIM)是臨床常見(jiàn)病，該疾病可由多種病因所致，是眾多功能性消化道疾病的共同病理過(guò)程，病理生理表現(xiàn)復(fù)雜〔1〕。胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型是進(jìn)行DGIM相關(guān)研究的重要基礎(chǔ)，國(guó)內(nèi)外已建立了多種DGIM相關(guān)的模型，常用方法有藥物注射法、物理法、中藥灌胃法。然而，有關(guān)這3種造模方法的質(zhì)量、穩(wěn)定性及應(yīng)用比較，目前尚未有相關(guān)研究報(bào)道。我們采用上述造模方法分別建立DGIM動(dòng)物模型，對(duì)各種模型進(jìn)行比較，旨在為DGIM研究中動(dòng)物模型的建立、選擇與實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料藥材:甘草飲片購(gòu)自廣東省采芝林藥材公司;精氨酸購(gòu)自天津金耀氨基酸有限公司;阿托品購(gòu)自吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司。動(dòng)物:昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量25～30 g，購(gòu)自廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。儀器:精密電子天平，型號(hào)AL204-IC。

1.2方法

1.2.1藥物制備(1)甘草煎劑:煎煮一定量甘草，重復(fù)煎煮2次，將所得煎煮液合并，過(guò)夜沉降，第2天用多層紗布過(guò)濾，加熱濃縮濾液，使之最終濃度為生藥1 g/ml，置4℃冰箱備用。(2)精氨酸溶液:將適量鹽酸精氨酸粉末溶于生理鹽水配成20％鹽酸精氨酸溶液，攪拌混勻后調(diào)節(jié)pH至7.3左右。

1.2.2分組與造模方法將80只小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只。A組空白對(duì)照組; B組腹腔注射生理鹽水組; C組生理鹽水灌胃組; D組甘草煎劑造模組:將得到的甘草煎劑以10 g/kg體重的比例對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，1次/d，連續(xù)喂養(yǎng)5 d，即可完成造模; E組肢體缺血-再灌注造模組:采用拉力法統(tǒng)一結(jié)扎造模，以烏拉坦按0.5 ml/100 g比例行術(shù)前麻醉，用拉力法結(jié)扎模型小鼠兩側(cè)大腿根部，持續(xù)3 h后，立即解除結(jié)扎，重復(fù)5 d; F組冰水刺激造模組:將小鼠置于冰水中，觀察其游泳狀態(tài)，隨后取出漂浮不動(dòng)的小鼠，放于自制的固定器中，束縛小鼠胸段及前肢，持續(xù)應(yīng)激2 h; G組阿托品造模組:以0.5 mg/kg體重的比例給予阿托品腹腔注射1次，造模完成; H組精氨酸造模組:模型動(dòng)物分別以5.2 g·kg－1·d－1(首日)，2.6 g·kg－1·d－1(第2～5 天)的比例腹腔注射左旋精氨酸，同時(shí)用生理鹽水15 ml/kg/d灌服，直至造模結(jié)束。

1.2.3檢測(cè)方法測(cè)定前24 h禁食不禁水，測(cè)定當(dāng)日灌服添加墨汁的玉米淀粉糊0.4 g/只，20 min后脫頸椎處死動(dòng)物，立即剖開(kāi)腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，取出胃，用濾紙拭干后稱全質(zhì)量，沿胃大彎剪開(kāi)胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈質(zhì)量，計(jì)算胃內(nèi)殘留率。取出完整的小腸平鋪于木板上，測(cè)量幽門至回盲部全長(zhǎng)及幽門至玉米淀粉糊前沿的距離，以幽門至玉米淀粉糊前沿的距離占幽門至回盲部全長(zhǎng)的百分比為小腸推進(jìn)率。胃內(nèi)殘留率(％) = (胃全質(zhì)量－胃凈質(zhì)量) /所給糊質(zhì)量×100％;小腸推進(jìn)率(％) =幽門至玉米淀粉糊前沿的距離/幽門至回盲部全長(zhǎng)×100％

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0軟件進(jìn)行方差分析。

2　結(jié)果

各組小鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率情況與C組比較，D組能顯著增加造模組小鼠胃內(nèi)殘留率〔(42.1±12.5) ％ vs (70.7±0.6) ％〕，顯著延遲小腸推進(jìn)速度〔(89.3±11.2) ％vs (62.2±8.2) ％〕(P＜0.05)。與A組相比，E組小鼠胃內(nèi)殘留率增加〔(43.5±12.4) ％ vs(57.2±10.0) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(90.7±7.9) ％vs(75.0±11.0) ％〕(P＜0.05)。F組與A組比較，小鼠胃內(nèi)殘留率增加〔(56.4±8.6) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(71.5±8.9) ％〕(P＜0.05)。G組小鼠與B組相比，小鼠胃排空延緩，胃殘留率增加〔(59.5±9.6) ％vs(42.6±11.6) ％〕;小鼠胃腸蠕動(dòng)顯著減慢，小腸推進(jìn)率明顯減少〔(68.1±7.4) ％vs (89.1±8.9) ％〕(P＜0.05)。與B組相比，H組小鼠胃排空延緩，胃內(nèi)殘留率增加〔(66.2±10.0) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(72.1±8.8) ％〕(P＜0.05)。

3　討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，DGIM的發(fā)生與多種因素有關(guān):神經(jīng)肌肉調(diào)控系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胃腸道高敏感狀態(tài)以及免疫及感染功能等〔2〕。根據(jù)致病因素，通過(guò)不同方式，均可建立DGIM動(dòng)物模型。甘草可使胃收縮運(yùn)動(dòng)減慢并使收縮頻率降低，減弱移行性復(fù)合肌電活動(dòng)〔3〕，根據(jù)甘草藥理學(xué)特性，利用甘草煎劑可復(fù)制胃動(dòng)力低下小鼠模型。研究表明，心理性應(yīng)激條件可使胃電活動(dòng)出現(xiàn)紊亂，顯著增加血漿中血管活性腸肽(VIP)、生長(zhǎng)抑制素(SS)的濃度以及一氧化氮合酶(NOS)的活性，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有明顯的影響〔4〕。以心理刺激因素為根據(jù)，利用冰水刺激造模，應(yīng)激模型小鼠出現(xiàn)明顯的胃腸動(dòng)力障礙。肢體缺血-灌注可對(duì)遠(yuǎn)隔器宮造成一定損傷，模型動(dòng)物血清腫瘤壞死因子(TNF) -α、 NO水平升高〔5〕，細(xì)胞因子TNF-α、NO對(duì)胃腸動(dòng)力障礙起介導(dǎo)作用，由此肢體缺血-灌注模型動(dòng)物同時(shí)存在胃腸動(dòng)力障礙，據(jù)此，確定采用肢體缺血-再灌注建立胃腸動(dòng)力障礙模型具有可行性。乙酰膽堿是胃腸道神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，可明顯興奮胃腸道平滑肌，使平滑肌細(xì)胞膜去極化。阿托品可阻斷M膽堿受體，抑制乙酰膽堿的作用，降低胃腸道平滑肌的興奮性，使其蠕動(dòng)的頻率和幅度下降〔6〕，因此采用阿托品阻斷M-膽堿能受體通路，可建立小鼠胃腸動(dòng)力障礙模型。體內(nèi)合成NO的唯一天然底物是精氨酸，腹腔注射后可增加胞質(zhì)Ca2+從而激活NO合成酶，促使機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生L-瓜氨酸和NO〔7〕，導(dǎo)致胃腸動(dòng)力下降，因此，選擇精氨酸建立胃腸動(dòng)力障礙實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型有科學(xué)的依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示各組模型小鼠均已出現(xiàn)類似DGIM的改變，可確定本實(shí)驗(yàn)采用的造模方法可行。本研究結(jié)果還證實(shí)，甘草煎劑模型組出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙最明顯。

由于人類疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程非常復(fù)雜，通過(guò)醫(yī)學(xué)臨床所積累的經(jīng)驗(yàn)具有時(shí)間或空間上的局限性，同時(shí)對(duì)DGIM患者的人體在體研究以及人胃腸組織的獲取較為困難。因此，在科學(xué)實(shí)驗(yàn)及臨床工作中，許多學(xué)者都在尋找一種理想可靠的方法建立理想的DGIM動(dòng)物模型。綜合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為甘草煎劑造模法可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)類似DGIM改變，符合臨床研究DGIM患者體內(nèi)胃腸動(dòng)力障礙的需要。該方法簡(jiǎn)單可靠，無(wú)須特殊儀器，便于操作，可作為一種探討DGIM的發(fā)病機(jī)制和病理改變的新型實(shí)驗(yàn)性模型。

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〔2015-03-16修回〕

(編輯郭菁)

通訊作者:邢德剛(1969-)，男，教授，博士，主要從事胃腸動(dòng)力學(xué)方面的教研工作。

基金項(xiàng)目:廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B021800270)

〔中圖分類號(hào)〕R363.1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015) 16-4479-02;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.026