地蜂子化學(xué)成分的研究

陳會(huì)玲， 閆 斌， 覃 祝， 吳和珍，2，3， 楊艷芳，2，3*

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065；2.湖北省中藥資源與中藥化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢430061；3.老年病中藥新產(chǎn)品湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北武漢430065）

地蜂子化學(xué)成分的研究

陳會(huì)玲1， 閆 斌1， 覃 祝1， 吳和珍1，2，3， 楊艷芳1，2，3*

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065；2.湖北省中藥資源與中藥化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢430061；3.老年病中藥新產(chǎn)品湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北武漢430065）

目的 研究地蜂子Potentilla freyniana Bornm的化學(xué)成分。方法 采用硅膠和Toyopearl柱層析法對(duì)地蜂子乙酸乙酯提取部位進(jìn)行分離純化，再通過(guò)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)對(duì)所得化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果 從中分離得到8個(gè)化合物，分別鑒定為phloridzosid（1）、4′-0-乙基-兒茶素（2）、3-甲基鞣花酸-4-0-β-D-木榶苷（3）、clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl ester（4）、niga-ichigoside F2（5）、兒茶素（6）、β-胡蘿卜苷（7）、β-谷甾醇（8）。結(jié)論 化合物1和2為首次從委陵菜屬植物中分離得到，化合物3、4、6為首次從該植物中分離得到。

地蜂子；化學(xué)成分；分離鑒定

地蜂子為薔薇科委陵菜屬植物三葉委陵菜Potentilla freyniana Bornm.及其變種中華三葉委陵菜Potentilla freyniana Bornm.var.sinica Migo的干燥根莖，因外形酷似蜜蜂，故有此名［1］。該植物在全國(guó)大部分地區(qū)均有分布，主產(chǎn)于湖北、安徽、江西、江蘇等地，資源較為豐富，民間主要用于治療痢疾、腸炎、胃痛等疾病，療效確切?，F(xiàn)代藥理研究表明，地蜂子具有抗炎鎮(zhèn)痛［2］、抗病毒［3］、抗氧化［4］等功效，但其物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，人們前期從中得到少量三萜、黃酮及甾體類化合物［5-8］。為了更全面地考察地蜂子的物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了深入研究，結(jié)果從該植物乙酸乙酯部位中分離得到8個(gè)化合物1～8，包括二氫查爾酮 （1）、二氫黃酮醇 （2、6）、鞣花酸 （3）、三萜 （4、5）以及甾體 （7、8）。

1 儀器與材料

KQ3200E超聲波清洗儀 （昆山市超聲儀器有限公司）；RE2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀

器廠）。柱層析、薄層層析硅膠 （青島海洋化工有限公司）；Toyopearl HW-40F（日本東曹株式會(huì)社）；D101大孔吸附樹(shù)脂 （天津歐瑞生物科技有限公司）；Agilent1200 HPLC色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；核磁共振儀 （美國(guó)Varian公司）。所用試劑均為分析純或化學(xué)純。

地蜂子藥材采自湖北省恩施市，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室吳和珍教授鑒定為薔薇科委陵菜屬植物地蜂子Potentilla freyniana的干燥根莖，樣本保存于湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省中藥資源與中藥化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取分離

取地蜂子5 kg，粉碎后用10倍量80%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，依次以乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液減壓回收溶劑，得到相應(yīng)部分浸膏。其中，乙酸乙酯部分浸膏 （1 600 g）用60～70℃蒸餾水溶解，抽濾，得濾液部分 （A部分）和未濾過(guò)部分 （B部分）。A部分上D101大孔吸附樹(shù)脂柱，依次以蒸餾水、20%、40%、60%、95%乙醇洗脫，TLC檢識(shí)合并相似流份，濃縮，得到A1～A5五個(gè)部分。A3部分經(jīng)硅膠、MCI、Diaion HP-20柱色譜反復(fù)分離純化，得到化合物1（11 mg）、2（12 mg）、6（16 mg）；A4部分經(jīng)反復(fù)硅膠、Toyopearl凝膠柱色譜分離純化，得到化合物3（30 mg）、4（15 mg）；A5部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離提純，得到化合物7（20 mg）、8（1 g）。B部分經(jīng)反復(fù)硅膠、Toyopearl凝膠柱色譜分離純化后，再采用HPLC法制備，得到化合物5（6.2 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：黃色粉末 （甲醇）。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.12（1H，d，J=8.8 Hz，H-2），6.60（1H，d，J=8.8 Hz，H-3），6.58（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），7.12（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），2.76（2H，t，J=7.2 Hz，H-β），6.24（1H，d，J=2.3 Hz，H-3′），5.87（1H，d，J=2.3 Hz，H-5′），5.12（1H，d，J= 6.8 Hz，H-1″），3.92（1H，dd，J=12.0，1.6 Hz，Ha-6″）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：133.6（C-1），130.4（C-2），116.1（C-3），156.4（C-4），116.1（C-5），130.4（C-6），47.0（C-α），30.9（C-β），206.6（C=O），106.5（C-1′），167.0（C-2′），94.8（C-3′），166.3（C-4′），99.3（C-5′），161.7（C-6′），102.0（C-1″），74.7（C-2″），78.4（C-3″），71.1（C-4″），78.5（C-5″），62.4（C-6″）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9-10］報(bào)道基本一致，因此鑒定此化合物為phloridzosid。

化合物2：紅褐色粉末 （甲醇），1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：6.76（1H，s，H-2′），6.83（1H，d，J=1.8 Hz，H-5′），1.27（3H，t，J=4.1 Hz，H-2″），2.51（1H，dd，J=8.2，15.7 Hz，H-4），2.84（1H，dd，J=5.8，16.4 Hz，H-4），3.97（1H，m，H-3），4.12（2H，q，J=9.2 Hz，H-1′），4.61（1H，d，J=7.0 Hz，H-2），5.79（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），5.88（1H，d，J=1.6 Hz，H-8）。13C-NMR（CD3OD，146 MHz）δ：82.7（C-2），68.8（C-3），28.4（C-4），156.8（C-5），96.3（C-6），95.5（C-8），100.8（C-4α），157.5（C-8α），131.8（C-1′），114.8（C-2′），145.6（C-3′），145.6（C-4′），115.7（C-5′），121.8（C-6′），65.0（C-1″），15.3（C-2″）。以上碳譜數(shù)據(jù)文獻(xiàn) ［11］報(bào)道基本一致，但該化合物多出兩個(gè)碳原子，同時(shí)分析氫譜中4.05（2H，q，J=9.3 Hz，H-1′），1.27（3H，t，J=4.1 Hz，H-2″），可知該基團(tuán)為乙基，通過(guò)綜合分析得知該化合物為4′-0-乙基-兒茶素。

化合物3：淡黃色粉末（甲醇），F(xiàn)eCl3、Molish反應(yīng)均呈陽(yáng)性。1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：7.58（1H，s，H-5），7.64（1 H，s，H-5），4.06（1H，s，H-3），4.99（1H，d，J=7.2 Hz，H of Sugar-C1）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：114.2（C-1），143.1（C-2），141.3（C-3），154.0（C-4），112.3（C-5），112.0（C-6），159.4（C-7），114.2（C-1′），141.9（C-2′），137.2（C-3′），146.8（C-4′），108.3（C-5′），112.4（C-6′），159.4（C-7′），61.5（C-3-OMe），103.1（C-1″），72.8（C-2″），75.4（C-3″），70.5（C-4″），65.4（C-5″）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為3-甲基鞣花酸-4-0-β-D-木榶苷。

化合物4：白色無(wú)定型粉末（甲醇）。1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：1.23（1H，m，H-1α），1.36（1 H，m，H-1β），1.61（1 H，m，H-2α），2.61（1H，m，H-2β），3.99（1H，m，H-3），1.61（1H，m，H-5），1.48（2H，m，H-6），1.38（1H，m，H-7α），1.58（1H，m，H-7β），1.84（1H，m，H-9），1.30（1 H，m，H-11α），2.05

（1H，m，H-11β），5.33（1H，br t，H-12），0.99（1H，m，H-15α），1.84（1H，m，H-15β），1.19（1H，m，H-16α），1.72（1H，m，H-16β），2.51（1H，s，H-18），1.36（1H，m，H-20），1.54（1H，m，H-21），1.84（1H，m，H-22），1.60（1H，m，H-22α），1.76（1H，m，H-22β），3.68（1H，d，J=11.1 Hz，H-23α），3.80（1 H，d，J=11.1 Hz，H-23β），3.66（1H，d，J=4.1 Hz，H-24α），3.78（1H，d，J=4.1 Hz，H-24β），0.92（3H，s，H-25），0.77（3H，s，H-26），1.35（3H，s，H-27），1.19（3H，s，H-29），0.93（3H，d，J=6.4 Hz，H-30），5.32（1H，d，J=8.2 Hz，H-1），3.34（1 H，dd，J=9.3，8.7 Hz，H-2），3.36（1H，m，H-3），3.37（1H，m，H-4），3.40（1 H，dd，J=4.5，2.4 Hz，H-5），3.68（1H，dd，J=11.1，4.5 Hz，H-6α），3.80（1H，dd，J=11.1，2.4 Hz，H-6β）。13C-NMR（CD3OD，146 MHz）δ：33.8（C-1），26.4（C-2），70.2（C-3），46.5（C-4），43.9（C-5），21.2（C-6），34.3（C-7），42.5（C-8），49.2（C-9），37.9（C-10），25.1（C-11），128.8（C-12），138.0（C-13），43.4（C-14），28.8（C-15），26.9（C-16），50.6（C-17），54.9（C-18），74.2（C-19），42.4（C-20），25.9（C-21），37.6（C-22），71.2（C-23），63.2（C-24），15.9（C-25），18.2（C-26），25.5（C-27），179.2（C-28），26.7（C-29），16.6（C-30），95.8（C-1′），73.8（C-2′），78.6（C-3′），72.1（C-4′），77.9（C-5′），63.2（C-6′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為Clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl-ester。

化合物5：白色無(wú)定形粉末 （氯仿-甲醇）。1HNMR（CD3OD，584MHz）δ：6.30（1H，d，J= 8.0 Hz，H-1′），5.35（1 H，br s，H-12），3.95（1H，m，H-2），3.85（1H，br s，H-3），3.30-3.44（6H，overlapped，H-2′，3′，4′，5′，6′a，6′b），3.83（1H，d，J=10.4 Hz，H-23a），3.72（1H，d，J=10.4 Hz，H-23 b），1.59（3H，s，H-27），1.27（3H，s，H-29），1.18（3H，s，H-24），1.14（3H，s，H-25），1.12（3H，d，J= 6.8 Hz，H-30），0.85（3H，s，H-26）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：48.9（C-1），70.6（C-2），78.3（C-3），43.4（C-4），48.7（C-5），18.2（C-6），32.7（C-7），41.1（C-8），48.2（C-9），38.3（C-10），24.3（C-11），128.6（C-12），138.2（C-13），42.0（C-14），28.0（C-15），27.3（C-16），48.8（C-17），55.0（C-18），73.6（C-19），42.6（C-20），25.9（C-21），38.7（C-22），72.0（C-23），16.9（C-24），18.2（C-25），18.3（C-26），25.3（C-27），177.9（C-28），27.3（C-29），17.1（C-30），96.4（C-1′），74.0（C-2′），78.9（C-3′），70.3（C-4′），77.9（C-5′），64.1（C-6′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為nigaichigoside F2。

化合物6：黃色粉末 （甲醇），F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽(yáng)性。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：5.90（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），5.89（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.79（1H，d，J=1.9 Hz，H-2′），6.80（1H，d，J=7.2 Hz，H-5′），6.69（1H，dd，J= 7.2，1.9 Hz，H-6′），2.87（1 H，dd，J=5.2，16.0 Hz，H-4），2.53（1H，dd，J=8.0，16.0 Hz，H-4），4.56（1H，d，J=7.2 Hz，H-2），3.99（1H，m，H-3）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：82.7（C-2），68.9（C-3），28.6（C-4），100.8（C-4α），156.9（C-5），95.4（C-6′），157.8（C-7），96.2（C-8），157.5（C-8α），131.9（C-1′），114.8（C-2′），146.0（C-3′），145.7（C-4′），115.2（C-5′），121.4（C-6′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11，15］報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為兒茶素。

化合物7：白色粉末（甲醇），Liebermann-Burchard、Molish反應(yīng)均呈陽(yáng)性。與β-胡蘿卜苷對(duì)照品展開(kāi)，發(fā)現(xiàn)兩者TLC行為一致，因此鑒定該化合物為β-胡蘿卜苷［16］。

化合物8：白色針晶（氯仿），Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性［16］。與β-谷甾醇對(duì)照品在同一塊硅膠G薄層板上展開(kāi)，5%硫酸乙醇顯色，105℃下烘烤3 min，在與對(duì)照品相應(yīng)的地方顯示出相同顏色的色譜斑點(diǎn)，因此鑒定該化合物為β-谷甾醇。

4 結(jié)論

前期研究中，從地蜂子中分離得到的化合物包括黃酮、三萜及甾體類化合物。本實(shí)驗(yàn)從中分離鑒定出8個(gè)化合物 （1～8），其中化合物1和2均為首次從委陵菜屬植物中分離得到的黃酮類化合物，化合物3～6為首次從該植物中分離得到的化合物。地蜂子資源豐富，其化學(xué)成分和藥理作用有待進(jìn)一

步發(fā)掘，發(fā)展前景廣闊。

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Chem ical constituents from Potentilla freyniana

CHEN Hui-ling1， YAN Bin1， QIN Zhu1， WU He-zhen1，2，3， YANG Yan-fang1，2，3*

（1.College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 43OO65，China；2.Hubei Provincial Key Laboratory of Resource Scidence and Chemistry in Chinese Medicine，Wuhan 43OO61，China；3.Collaborative Innovation Center of Traditional ChineseMedicineof New Products for Geriatrics Hubei Province，Wuhan 43OO65，China）

AIM To study the chemical constituents from Potentilla freyniana.METHODS The compounds were isolated from the ethyl acetate extract of P.freyniana by silica and Toyopearl gel column chromatography. Their structures were then elucidated by physicochemical properties and spectroscopic data.RESULTS Eight compoundswere isolated and identified as phloridzosid（1），4′-0-ethyl-catechin（2），3-methyle ellagic acid-4-0-β-D-xylopyranoside（3），clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl ester（4），niga-ichigoside F2（5），catechins（6），daucostarine（7），β-sitosterol（8）.CONCLUSION Compounds 1 and 2 are firstly obtained from genus Potentilla.Compounds 3，4 and 6 are isolated from this plant for the first time.

Potentilla freyniana；chemical constituents；isolation and identification

R284.1

A

1001-1528（2015）12-2674-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.022

2014-12-23

湖北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科學(xué)研究項(xiàng)目 （2012Z-B21）

陳會(huì)玲 （1988—），女，碩士，從事中藥品種、質(zhì)量及資源開(kāi)發(fā)研究。E-mail：936796383@qq.com

*通信作者：楊艷芳（1971—），女，博士，副研究員，從事中藥及其制劑有效成分的研究。E-mail：yyf0204@aliyun.com