多西環(huán)素治療兔實驗性骨關節(jié)炎的效果及作用機制探討

李慧艷葛 鵬周博宇

（1.吉林大學,吉林長春 130012；2.天津藥物研究院新藥評價有限公司,天津 300193）

多西環(huán)素治療兔實驗性骨關節(jié)炎的效果及作用機制探討

李慧艷1葛 鵬2周博宇2

（1.吉林大學,吉林長春 130012；2.天津藥物研究院新藥評價有限公司,天津 300193）

目的:探究兔實驗性骨關節(jié)炎采用多西環(huán)素的治療效果和作用機制。方法:在實驗中對30只家兔的右膝關節(jié)給予0.3ml1.6%木瓜蛋白酶溶液的注射，建立兔膝骨關節(jié)炎模型的建立，所有家兔給予清理霉素的治療，對照組有15例正常的家兔。結果:兩個多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對照組低，差異顯著，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。且兩組多西環(huán)素組的評分明顯低于模型對照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對照組的評分明顯比正常對照組高，差異顯著（P＜0.05）。結論:兔骨關節(jié)炎采用多西環(huán)素的關節(jié)腔內給藥治療，可使癥狀得到明顯緩解，作用機制和一氧化氮合酶的活性以及軟骨細胞基質金屬蛋白酶-13的表達有關系。

兔實驗性骨關節(jié)炎 多西環(huán)素 作用機制

骨關節(jié)炎為局灶關節(jié)軟骨出現骨丟失、退行性變、關節(jié)邊緣骨贅為特征的一種慢性關節(jié)疾病[1]。在研究中發(fā)現骨關節(jié)炎的發(fā)病是因為生物、力學、酶、化學等不同因素的發(fā)病機制造成的，重要特征為進行性的軟骨破壞，通過多年的探究，四環(huán)素抗生素得到深入的研究，多西環(huán)素就是半合成四環(huán)素類的抗生素。本文主要對兔骨關節(jié)炎給予多西環(huán)素的關節(jié)內治療，觀察治療效果，并探討作用機制，現報告如下。

1 資料和方法

1.1 建立動物模型

共選擇45只健康成年的大耳白兔，雌雄不限，體重為2kg左右，其中隨機選擇30只兔子在實驗的第一天和第四天在右膝關節(jié)中注入0.3ml1.6%的木瓜蛋白酶，2周之后會形成穩(wěn)定骨關節(jié)炎的模型。

1.2 使用試劑

一氧化氮合酶的試劑盒，生產商為：南京建成生物工程有限公司，木瓜蛋白酶粉劑的生產商為：Merck公司；基質金屬蛋白酶-13單抗的生產商為：NeoMarker公司，

1.3 動物分組

將30只兔子隨機分三組，A組在右膝關節(jié)中，每日注射生理鹽水，劑量為0.3ml；B組給予大劑量的多西環(huán)素，將0.3ml濃度為1.33%多西環(huán)素注射到關節(jié)中，C組給予小劑量的多西環(huán)素，將0.3ml濃度為0.67%多西環(huán)素注射到關節(jié)中。另外15只兔子為對照組，并采取任何干預措施。

1.4 取材

在實驗動物處死的過程中，在關節(jié)腔中注入1ml的三蒸水，用注射器進行反復的抽吸，30秒后將0.5ml吸出，在零下20攝氏度的環(huán)境下進行保存。取材前要將脛骨內側的平臺進行暴露，然后給予基本觀察，然后選擇直徑為3mm的圓骨鑿給予脛骨中髁關節(jié)的定點取材，一直到軟骨的下骨，給予相關評分，并截取留下脛骨內側的平臺軟骨，將其放置在10%中性的甲醛溶液中給予固定，然后給予脫水、脫鈣和石蠟包埋的處理，并垂直骨表面給予5mm的切片，給予免疫組織和病理學的化學檢查。

1.5 檢測

將冷凍關節(jié)液取出，復溫后根據說明書進行操作，選擇化學的比色法，在550mm和530mm的波長下進行OD值的測定，計算相應一氧化氮的釋放量，以及誘導型一氧化氮合酶與總一氧化氮合酶的活性。在光鏡下進行細胞數量、軟骨組織結構、潮線完整性、甲苯胺藍染色的觀察，給予評分。并對其余脛骨內側的軟骨組織給予病例形態(tài)的觀察，將切片放置在10×20光鏡下采取5個視野，并將視野中細胞的陽性表達率進行記數。

1.6 統(tǒng)計學分析

對本文所得實驗數據均采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行檢驗，所得計量資料采用t檢驗，所得計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 多西環(huán)素對關節(jié)液一氧化氮釋放量，總一氧化氮合酶活性的影響

同15只健康兔子進行對比，模型對照組關節(jié)液中一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性得到明顯增加，差異較大，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩個多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對照組低，差異顯著，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 光鏡下軟骨組織的Mankin‘s評分

正常對照組的評分為：（0.0±0.0），基質鍵鼠蛋白酶：（0±0）；模型對照組的評分為：（6.8±0.5），基質鍵鼠蛋白酶：（92±4）；大劑量多西環(huán)素組的評分為：（3.7±1.1），基質鍵鼠蛋白酶：（25±5），小劑量多西環(huán)素組的評分為：（4.7±1.0），基質鍵鼠蛋白酶：（44±4）。兩組多西環(huán)素組的評分明顯低于模型對照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對照組的評分明顯比正常對照組高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

骨關節(jié)炎實驗動物模型的制作方法為機械和藥物兩種，藥物方法就主要在關節(jié)腔中給予木瓜蛋白酶的注射，該模型能夠防止機械法因手術因素影響造成的藥物滲漏[2]。通過相關實驗，促使局部藥物濃度的提高，減緩藥物的不良反應。通過實驗得出兩個多西環(huán)素組一氧化氮的釋放量和總一氧化氮合酶活性明顯比模型對照組低，差異顯著，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。且兩組多西環(huán)素組的評分明顯低于模型對照組，差異顯著（P＜0.05）；模型對照組的評分明顯比正常對照組高，差異顯著（P＜0.05）。

綜上所述，骨關節(jié)炎這一疾病給予多西環(huán)素的治療，可明顯緩解骨關節(jié)炎的軟骨退變，提高治療效果。

[1] 商亮.多西環(huán)素治療兔實驗性骨關節(jié)炎的療效及其作用機制研究[D].武漢大學，2005.

[2] 商亮，陳廖斌，鄭先念，等.多西環(huán)素治療兔實驗性骨關節(jié)炎的療效及其作用機制的研究[J]. 中國臨床藥理學與治療學，2004，（11）：1248-1252.