金黃色葡萄球菌的分離及其抗藥性的研究

張念英

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué),四川成都 611130）

金黃色葡萄球菌的分離及其抗藥性的研究

張念英

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué),四川成都 611130）

通過對(duì)金黃色葡萄球菌的分離和抗藥性的研究，進(jìn)一步明確土壤中金黃色葡萄球菌的分離方法，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行研究。文中針對(duì)不同土壤共分10種方式進(jìn)行采樣，通過鑒定、分離和培養(yǎng)，找到了典型的金黃色葡萄球菌，并觀察分離的金黃色葡萄球菌的抗藥性。結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌直徑0.5～1.5μm，篩選出屬革蘭陽性球菌的微球菌科和消化球菌科細(xì)菌共25個(gè)。其中，有12個(gè)細(xì)菌（排除消化球菌科細(xì)菌）可生長(zhǎng)，最終確定8個(gè)葡萄球菌屬。有5個(gè)無法生長(zhǎng)，金黃色葡萄球菌對(duì)新生霉素敏感。當(dāng)金黃色葡萄球菌經(jīng)過亞硝酸鈉誘變后，對(duì)5種實(shí)驗(yàn)抗生素的抗性均有所增加，但對(duì)四環(huán)素的抗性較小。所以，可以看出，經(jīng)亞硝酸鈉誘變對(duì)金黃色葡萄球菌的抗藥性十分有利。

金黃色葡萄球菌 分離 抗藥性

金黃色葡萄球菌是一種革蘭氏陽性球菌，屬于微球菌科，能夠引起化膿性的炎癥。如果侵入血液，可能引起致病性敗血癥。部分由葡萄球菌產(chǎn)生的耐熱性腸毒素，會(huì)引起食物中毒反應(yīng)，金黃色葡萄球菌對(duì)抗生素較為敏感，因此，大部分抗生素對(duì)其相關(guān)病癥的治療效果較為明顯[1]。本文通過對(duì)金黃色葡萄球菌的分離以及其抗藥性的研究，以期為治療病原菌抗生素提供理論指導(dǎo)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

菌種：由金黃色葡萄球菌作為菌株，將其從花園與某大學(xué)宿舍樓的土壤中進(jìn)行分離。培養(yǎng)基和試劑：培養(yǎng)基包括糖發(fā)酵培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基以及醇類發(fā)酵培養(yǎng)基。試劑包括：生理鹽水，NaNO2溶液，和在市面上常見的青紅霉素、四環(huán)素和氯霉素、鏈霉素等。

1.2 方法

1.2.1 金黃色葡萄球菌的分離方法

（1）選擇10處采樣地點(diǎn)，采樣均在表層下8 cm左右采樣，后于容器，集體烘干后混勻；（2）針對(duì)樣品進(jìn)行統(tǒng)一處理，選取土樣1 g置入無菌錐形瓶中，加入100 ml蒸餾水，與土樣搖勻，搖晃時(shí)間在10 min左右。稀釋10-2土壤懸液，制備成為10-3、10-4、10-5、10-6、10-7；（3）分離菌種。本次分離的菌種為金黃色葡萄球菌，進(jìn)行革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)、酸鹽性試驗(yàn)、微量生化管試驗(yàn)，分別采用以上幾種實(shí)驗(yàn)方式對(duì)新生霉素進(jìn)行敏感試驗(yàn)。

1.2.2 菌種耐藥性鑒定

（1）分離：將菌種進(jìn)行培養(yǎng)和分離，采用梯度平皿，對(duì)菌種進(jìn)行抗性水平考核，將以上分離出的抗性菌株制成菌懸液，再接種到含抗生素的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，存放于37℃恒溫環(huán)境中觀察3 d。（2）制備菌懸液和穩(wěn)定性培養(yǎng)：測(cè)定金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線，觀察金黃色葡萄球菌的亞硝酸鈉的菌懸液的制備和穩(wěn)定培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 菌種分離觀察

觀察菌種分離情況。金黃色葡萄球菌菌落不大，平均在直徑0.8μm左右，濕潤(rùn)，呈透明狀，表面光滑，隆起邊緣。在接種的平板上鑒定出40個(gè)金黃色葡萄球菌菌落。

觀察菌種個(gè)體形態(tài)。金黃色葡萄球菌直徑0.5～1.5μm，單個(gè)排列或成對(duì)排列，可明顯看出呈葡萄串狀。菌種不運(yùn)動(dòng)，革蘭陽性。以上鑒定出的40個(gè)金黃色葡萄球菌菌落篩選出屬革蘭陽性球菌的微球菌科和消化球菌科細(xì)菌共25個(gè)。

2.2 金黃色葡萄球菌耐藥性觀察

40株金黃色葡萄球菌以青霉素、紅霉素、四環(huán)素、鏈霉素和氯霉素五種常見抗生素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)實(shí)，對(duì)以上五種抗生素耐藥率均大于65%，對(duì)其他兩種抗生素包括萬古霉素、利奈唑胺的敏感率可達(dá)到98%。針對(duì)7種抗生素的耐藥性和敏感性分析，具體結(jié)果如下：

對(duì)青霉素耐藥性為98.1%，敏感率為1.9%；紅霉素耐藥性為91.2%，敏感率為8.8%；四環(huán)素耐藥性為77.1%，敏感率為22.9%；鏈霉素耐藥性為75.6%，敏感率為24.4%；氯霉素耐藥性為72.1%，敏感率為27.9%。對(duì)萬古霉素和利奈唑胺的敏感率分別為98.1%和99.3%，耐藥性分別為1.9%和0.7%。

2.3 亞硝酸鹽誘變后的耐藥性觀察

在5種抗生素梯度平板上，菌落的生長(zhǎng)如下：抗生素濃度為40（μg ml-1）時(shí)，5種抗生素均可生長(zhǎng)，抗生素濃度為60（μg ml-1）時(shí)，青霉素和紅霉素可生長(zhǎng)，抗生素濃度≥80（μg ml-1）時(shí)，只有青霉素可生長(zhǎng)。由此可以看出，當(dāng)金黃色葡萄球菌經(jīng)過亞硝酸鈉誘變后，對(duì)5種實(shí)驗(yàn)抗生素的抗性均有所增加，但對(duì)四環(huán)素的抗性較小。

3 討論

土壤中包含多種微生物，從土壤中分理處來經(jīng)過培養(yǎng)可稱為金黃色葡萄球菌。在試驗(yàn)過程中，通過土壤分離金黃色葡萄球菌的試驗(yàn)方法已經(jīng)基本完備，本次選擇的分離方法是臨床中比較成熟的方法，在土表層下8 cm左右采樣，加入100 ml蒸餾水，搖晃時(shí)間在10 min左右，進(jìn)行革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)、酸鹽性試驗(yàn)、微量生化管試驗(yàn)進(jìn)行分離以及為抗藥性試驗(yàn)做出準(zhǔn)備。金黃色葡萄球菌對(duì)某些抗生素有一定的抗藥性，但通過亞硝酸鈉的誘變，金黃色葡萄球菌的抗藥性有所降低[3]。通過本次研究證明，利用無機(jī)鹽對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行誘變，能夠影響金黃色葡萄球菌的抗藥性。通過研究中對(duì)5種常見抗生素的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過誘變后的金黃色葡萄都對(duì)大部分抗生素的抗性均得到了提高。

[1] 高延玲，董鵬，李金磊，等.奶牛場(chǎng)金黃色葡萄球菌的分離及耐藥性研究[J].畜牧與飼料科學(xué)，2014，6（9）：1-4.

[2] 涂建斌，饒麗華.金黃色葡萄球菌醫(yī)院感染的臨床特征及耐藥性分析[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2014，5（12）：32-33.

[3] 安然，楊杰，孫家明.整形外科患者創(chuàng)面感染MRSA的感染率及對(duì)應(yīng)治療觀察[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2014，8（23）：1965-1968.