延冰片中脫氫紫堇堿的含量測定

侯曉琳 劉芳馨 鮑慧瑋 張 晨 尚 坤

長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130117

延冰片中脫氫紫堇堿的含量測定

侯曉琳 劉芳馨 鮑慧瑋 張 晨 尚 坤*

長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130117

目的：延冰片是由延胡索、冰片以及輔料等組成的片劑，臨床用于治療冠心病，心絞痛。研究旨在制定延冰片中脫氫紫堇堿的含量限度。方法：以脫氫紫堇堿作為延冰片成品的跟蹤指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定其含量。結(jié)果：延冰片以脫氫紫堇堿作為定性鑒別標(biāo)準(zhǔn)，脫氫紫堇堿的含量不得少4.25mg/g。結(jié)論：該方法測定脫氫紫堇堿的含量可行性良好，可作為延冰片質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。

延冰片；脫氫紫堇堿；含量測定

延胡索為罌粟科紫堇屬多年生草本植物延胡索的干燥塊莖，又稱玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山東、江蘇、浙江、內(nèi)蒙古等地，與山芥、將離、川貝等并稱“浙八味”[1]。延胡索具有活血止痛、利氣的功效，是活血化瘀、理氣止痛、鎮(zhèn)靜催眠之佳品，尤以止痛、鎮(zhèn)痛之功效著稱于世[2,3]，臨床常用于治療心律失常、冠心病、心絞痛、氣滯血瘀等諸痛。其主要成分為延胡索總生物堿[4,5]。《本草綱目》中記載，延胡索有“活血、止痛、理氣、通小便”四大之功效。實(shí)驗(yàn)依據(jù)延冰片片劑處方中各味藥材有效成分的研究，采用高效液相色譜法(HPLC)測定三批延冰片試樣中脫氫紫堇堿的含量，同時(shí)制定延冰片片劑中脫氫紫堇堿的含量限度[6]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀；EL-204十萬分之一分析天平。

1.2 試劑 脫氫紫堇堿對照品(批號：MUST-15032613，中國藥品生物制品檢定所)；延胡索藥材(長春宏檢藥材公司提供)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[7]參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)，色譜條件為：流動相：乙腈-水(含0.1% 三乙胺和0.4% 冰乙酸)(22∶78)；檢測波長：338nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min。

2.2 波長(λmax)選擇 精密移取脫氫紫堇堿對照品溶液和供試品溶液，以無水乙醇溶液為空白，在200～450nm波長處掃描，結(jié)果見圖1、2。

由圖1、2可知，脫氫紫堇堿對照品溶液和供試品溶液在338nm有最大吸收，通過查閱文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，最終以338nm為測定波長。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取脫氫紫堇堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

2.3.2 延冰片溶液的制備 取本品粉末0.5g(過三號篩)，加甲醇提取，定容于25ml的容量瓶中，搖勻，過濾，備用。

2.3.3 延胡索藥材溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約1g，精密稱定，加甲醇提取，后定容于25ml的容量瓶中，搖勻，過濾，取續(xù)濾液過濾膜，即得。

2.4 樣品的色譜圖 分別精密吸取對照品溶液、延冰片溶液、延胡索藥材溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見圖3、4、5。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性范圍的考察 分別吸取對照品溶液(濃度為0.01944mg/ml)4、6、10、12、14、18μl注入液相色譜儀，依法測定。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(x)，以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：y=77.6x+0.378，R2=1。表明進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)的線性關(guān)系表現(xiàn)為良好。見表1、圖6。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 分別取對照品溶液(濃度為0.01944mg/ml)10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積。精密度試驗(yàn)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表2。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取對照品溶液(濃度為0.01944mg/ml)和供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h后注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10μl。其對照品和供試品溶液穩(wěn)定性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.91%和0.17%，說明二者在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表3。

2.5.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取延冰片(批號：20131101)樣品，精密稱量，平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為10μl。延冰片片劑中脫氫紫堇堿的平均含量5.2591mg/g，其相應(yīng)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.70%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表4。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 取延冰片(批號：20131101，含量為5.2591mg/g)樣品6份，精密稱定，分別加入的脫氫紫堇堿對照品(濃度為0.01944mg/ml)0.25g，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備并依法測定，計(jì)算其加樣回收率。結(jié)果延冰片的回收率均在95%～105%之間，平均回收率是99.25%，均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表5。

2.6 含量測定 精密稱取3批不同批號的延冰片樣品，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備并依法測定。結(jié)果三批延冰片片劑樣品中脫氫紫堇堿的平均含量為5.32mg/g。見表6。

3 討論

試驗(yàn)對流動相的篩選做了大量嘗試，試用了不同溶劑及不用比例、不同pH的溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果以乙腈-水(含0.1% 三乙胺和0.4% 冰醋酸)(22∶78)為流動相最佳，峰形、分離度、出峰時(shí)間等較好。

藥方延胡索中脫氫紫堇堿的含量、轉(zhuǎn)移率、加速與長期穩(wěn)定性均符合要求。在2010版《中國藥典》一部延胡索含量測定項(xiàng)下，檢測成分為脫氫紫堇堿，而脫氫紫堇堿藥材最低限度為0.08%，含量偏低。綜上所述，延冰片中脫氫紫堇堿的平均含量為5.32mg/g，而含量限度可在平均含量下浮20%范圍內(nèi)容制定，即延冰片中含脫氫紫堇堿的含量不得少于4.25mg/g。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

[2]劉芳，羅躍娥．延胡索研究概況[J]．天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24(4):240-242．

[3]黃云，陳華師．中藥延胡索的研究進(jìn)展[C]．中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會2011年學(xué)術(shù)年會論文集，2011．

[4]江紀(jì)武．植物藥有效成分手冊(精裝)[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社，1986．

[5]Wang wen-shu,Xiao Wei. Study on the Chemical Composeition from Chinese Traditional Medicine ofCorydalisyanhusuo[J]. Journal of the CUN，2007,16(l):80-82．

[6]張萍．延胡索提取物治療冠心病室性心律失常的機(jī)理研究[D]．北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[7]王紅，田明，王一，等．高效液相色譜法測定延胡索總生物堿滴丸中巴馬汀堿和脫氫紫堇堿含量[J]．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)．2013，4(1):96-98．

The Content determination of Dehydrocorydaline in Rhizoma corydalis borneol

HOU Xiaolin LIU Fangxin BAO Huiwei ZHANG Chen SHANG Kun*

Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117,China

Objective Rhizoma corydalis borneol tablets dosage form consists of corydalis rhizome,borneolum syntheticum and auxiliary material, and other two taste of traditional Chinese medicine, mainly used for coronary heart disease, the treatment of angina pectoris.The purpose of this paper is to develop content limit extension of dehydrocorydaline in rhizoma corydalis borneol.Methods Using orthogonal design method, taking the extract the alkaloids content as index, The quality standards for Dehydrocorydaline, borneol tablets dosage form. Quantitative analysis of its content by HPLC.Results The formulation for Dehydrocorydaline as qualitative identification standard, the content of dehydrocorydaline shall not be less than 4.25mg/g. To develop a limit for the product.Conclusion This experiment optimized production technology is considered feasible and reasonable, And the quality is stable and controllable.As one of the indicators of the quality control of Rhizoma corydalis borneol.

Rhizoma corydalis borneol; Dehydrocorydaline; Content determination

教育部博士點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目(20122227110003)；吉林省衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(2012s007)；吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目。

侯曉琳(1978-)，女，吉林延吉市，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥治療。

尚坤(1978-)，女，吉林延吉市，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥治療及相關(guān)藥理研究。

R284.1

A

1007-8517(2015)18-0017-03

2015.06.23)