糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2的檢測(cè)意義

胡曼麗　陳延春　杜 娟

（1 長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，吉林 長(zhǎng)春 130031；2 長(zhǎng)春市中心醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051；3 吉林省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，吉林 長(zhǎng)春130021）

糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2的檢測(cè)意義

胡曼麗1陳延春2杜 娟3

（1 長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，吉林 長(zhǎng)春 130031；2 長(zhǎng)春市中心醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051；3 吉林省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，吉林 長(zhǎng)春130021）

目的 檢測(cè)糖尿?。―M）大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的變化，探討其意義。方法實(shí)驗(yàn)大鼠分為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組將10只雄性SD大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周，按40 mg/kg體質(zhì)量劑量腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。用ELISA方法檢測(cè)大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的變化。結(jié)果糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）尿排泄增加（P＜0.01）。結(jié)論尿水通道蛋白（AQP-2）在治療糖尿病腎病診斷指標(biāo)中占有很大的參數(shù)。

糖尿病；水通道蛋白-2；檢測(cè)

糖尿病腎病是指由于糖尿病糖代謝異常為主因所致的腎小球硬化，并伴尿蛋白含量超過(guò)正常，稱(chēng)為糖尿病腎病。糖尿病腎病由多種病因引起，其發(fā)病機(jī)制是引起體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足，而致糖蛋白質(zhì)和脂肪代謝障礙。由于糖尿病糖代謝異常形成腎小球硬化，并伴尿蛋白含量超過(guò)正常，引起終末期腎功能衰竭。在排除其他可能引起糖尿病性腎病原因基礎(chǔ)上，早期糖尿病性腎病的診斷主要根據(jù)6個(gè)月內(nèi)連續(xù)尿檢查有2次微量白蛋白排泄率在30～300 mg/24 h，則可初步診斷早期糖尿病性腎病。水通道蛋白-2（AQP-2）存在于腎臟腎小管和集合管［1］，故本實(shí)驗(yàn)將檢測(cè)糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的變化，進(jìn)而論證水通道蛋白-2（AQP-2）可作為腎臟損害的診斷指標(biāo)［2］。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型的建立：將4～8周齡無(wú)特定病源體（SPF級(jí)），體質(zhì)量180～220 g之間的雄性SD大鼠20只，適應(yīng)性飼養(yǎng)10 d后稱(chēng)量體質(zhì)量，測(cè)血糖、尿糖后。隨機(jī)分為正常對(duì)照組10只；實(shí)驗(yàn)組10只；實(shí)驗(yàn)組高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周，按40 mg/kg體質(zhì)量劑量腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。成模大鼠具有胰島素抵抗、高血糖、高胰島素血癥和血脂紊亂的糖尿病臨床特征。并且血糖≥16.67 mmol/L，尿糖（3+）以上為造模成功［3］。糖尿病組模型制成后，與正常對(duì)照組在同一環(huán)境中飼養(yǎng)，給予標(biāo)準(zhǔn)飲食，自由飲水。

1.2留取標(biāo)本：模型組成模、對(duì)照組均60 d一次取材。大鼠處死前分別稱(chēng)體質(zhì)量并測(cè)試大鼠的一般指標(biāo)。然后取兩組大鼠腎臟分別用聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)腎髓質(zhì)集合管水通道蛋白-2的表達(dá)。

1.3觀察指標(biāo)的測(cè)定：羅氏樂(lè)康全血糖儀測(cè)定；尿糖由尿糖試紙半定量測(cè)定；尿水通道蛋白-2檢測(cè)用中國(guó)上海出產(chǎn)的規(guī)格48T/96T水通道蛋白2（AQP-2）ELISA檢測(cè)試劑盒，試驗(yàn)方法按雙抗體夾心法測(cè)定。ELISA是1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann，荷蘭elisa法學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠的基線參數(shù)比較

2.1.1實(shí)驗(yàn)組：血糖（4.36±0.59）mmol/L，尿糖（-），體質(zhì)量（188.56±29.37）g；對(duì)照組：血糖（4.41±1.98）mmol/L，尿糖（-），體質(zhì)量（187.95±18.91）g。實(shí)驗(yàn)前選取的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較尿糖均為（-）。

2.1.2血糖無(wú)差異（P＞0.05），體質(zhì)量無(wú)差異（P＞0.05）。

2.2實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠60 d時(shí)理化指標(biāo)比較

2.2.1實(shí)驗(yàn)組：10例數(shù)結(jié)果血糖（25.10±0.71）mmol/L，尿量（29.87±16.47）mL/24 h，體質(zhì)量（133.±31.62）g，水通道蛋白-2（AQP-2）（9.98±0.65）pmol/mL；對(duì)照組：10例數(shù)結(jié)果血糖（4.41 ±1.11）mmol/L，尿量（10.78±4.55）mL/24 h，體質(zhì)量（194.7± 39.43）g，水通道蛋白-2（AQP-2）（7.22±1.02）pmol/mL。

2.2.2實(shí)驗(yàn)組60 d時(shí)SD大鼠血糖開(kāi)始明顯升高（P＜0.01），尿量高于對(duì)照組（P＜0.01）。體質(zhì)量明顯低于對(duì)照組（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組尿水通道蛋白-2（AQP-2）比對(duì)照組明顯升高（P＜0.01）。

3　討 論

3.1水通道蛋白-2（AQP-2）是與水通道有關(guān)的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，是水通道蛋白家族成員之一，在腎臟尿液濃縮、稀釋功能和維持體內(nèi)水平衡中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)糖尿病大鼠腎臟髓質(zhì)水通道蛋白-2（AQP-2）過(guò)高表達(dá)時(shí)，由于部分位于集合管亮細(xì)胞小管側(cè)細(xì)胞膜上的水通道蛋白-2（AQP-2）蛋白可脫落于小管腔而被尿液沖出，故有一部分水通道蛋白-2可以隨尿液排出體外，排入尿中水通道蛋白-2的量約占腎臟全部表達(dá)的3%。

3.2監(jiān)測(cè)尿水通道蛋白-2（AQP-2）的水平可以反映腎臟水通道蛋白-2基因表達(dá)的水平。尿液水通道蛋白-2的檢測(cè)方法包括放免法、免疫印記法和ELISA法。本研究采用ELISA方法，結(jié)果表明大鼠尿液水通道蛋白-2明顯高于正常對(duì)照組，與以往報(bào)道一致。同時(shí)計(jì)算了水通道蛋白-2的變異系數(shù)為6%。

綜上所述，水通道蛋白-2（AQP-2）是由日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)的［4］，僅在腎臟集合管表達(dá)，受加壓素的調(diào)節(jié)。水通道蛋白-2作為腎臟集合管改變的診斷指標(biāo)，易于檢測(cè)，不受年齡、性別、飲食［5］、運(yùn)動(dòng)、溫度等影響，其變異系數(shù)為6%，糖尿病一旦合并腎臟病變，腎功能將呈進(jìn)行性惡化，直至終末期腎功能衰竭。而尿液腎臟水通道蛋白-2檢查作為一種無(wú)創(chuàng)傷性檢查，在各種診斷技術(shù)日新月異的今天，仍然有其不可取代的優(yōu)勢(shì)。

［1］Radin MJ，Yu MJ，Stoedkilde L，et al.Aquaporin-2 regulation in health and disease［J］.Vet Clin Pathol，2012，41（4）:455-470.

［2］何翠娥，李華珠，梁力暉.糖尿病大鼠腎組織中水通道蛋白2的表達(dá)及意義［J］.中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào)，2009，23（1）:28-30.

［3］孔兆峰，王利.2型糖尿病動(dòng)物模型研究概要［J］.中國(guó)微循環(huán)，2008，3:187-188.

［4］杜娟.水通道蛋白-2的研究進(jìn)展［J］.國(guó)際老年醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（4）:176-181.

［5］朱妍焦悅.腎臟水通道蛋白-2“穿梭機(jī)制”的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥理學(xué)報(bào)，2012，28（4）:451-452.

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