杯鞘石斛的化學成分研究

高巍，楊柳，李慧慧，劉長倩，劉守金*，胡江苗*

(1.安徽中醫(yī)藥大學 藥學院 安徽省現(xiàn)代重點實驗室，安徽 合肥 230012；2.中國科學院 昆明植物研究所 植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201)

·基礎(chǔ)研究·

杯鞘石斛的化學成分研究

高巍1，楊柳2，李慧慧1，劉長倩1，劉守金1*，胡江苗2*

(1.安徽中醫(yī)藥大學 藥學院 安徽省現(xiàn)代重點實驗室，安徽 合肥 230012；2.中國科學院 昆明植物研究所 植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201)

目的：研究杯鞘石斛DendrobiumgratiosissimumRchb.f.莖的化學成分。方法：采用多種色譜技術(shù)對杯鞘石斛莖的醇提物進行分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和譜學數(shù)據(jù)對化合物結(jié)構(gòu)進行鑒定。結(jié)果：從杯鞘石斛莖95%乙醇提取物中分離得到10個化合物，分別鑒定為松柏醛(1)、二氫松柏醇二氫對羥基桂皮酸酯(2)、N-反式桂皮酰酪胺(3)、柚皮素(4)、腺苷(5)、正丁基-α-D-呋喃果糖苷(6)、莽草酸(7)、莽草酸正丁酯(8)、左旋丁香樹脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、煙酰胺(10)。結(jié)論：以上化合物系首次從該植物中分離得到，其中化合物6、8和10為首次從石斛屬中分離得到。

杯鞘石斛；化學成分；正丁基-α-D-呋喃果糖苷；莽草酸；煙酰胺

杯鞘石斛DendrobiumgratiosissimumRchb.f.為蘭科(Orchidaceae)石斛屬Dendrobium植物，廣泛分布于印度、緬甸、老撾、越南等國家及我國西南地區(qū)。中藥石斛具有益胃生津、滋陰清熱之功能，《神農(nóng)本草經(jīng)》中列其為上品，備受歷代本草推崇，《中華人民共和國藥典》各版均有收載。臨床多用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟等[1]。部分地區(qū)將杯鞘石斛視為中藥石斛的一種，但其能否作為中藥石斛的代用品一直缺乏科學依據(jù)。為闡明杯鞘石斛的藥用基礎(chǔ)，探知其中有效成分，筆者分別對杯鞘石斛醇提物的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的化學成分進行研究，共分離鑒定出10個化合物，本文報道其分離鑒定過程。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AM-400型、Avance III 600型核磁共振儀(Brucker 公司)；AutoSpec Premier P776三扇型雙聚焦磁質(zhì)譜儀(Waters公司)。

1.2 材料

柱色譜硅膠(200-300目)、薄層色譜硅膠G、硅膠GF254(青島美高化工廠)；反相填充材料Rp-8、Rp-18(Merck公司)；Sephadex LH-20凝膠(Pharmacia 公司)；顯色劑為9%硫酸-乙醇溶液。

本研究所用材料為杯鞘石斛干燥莖。杯鞘石斛藥材于2013年2月采自云南省勐臘縣，經(jīng)云南大學虞虹教授鑒定為杯鞘石斛。標本(No.Zsh-13)存放于中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室。

2 提取與分離

杯鞘石斛干燥莖4.15 kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，合并提取液，減壓回收乙醇，得浸膏。水混懸后分別用等體積乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，減壓回收溶劑后得乙酸乙酯萃取部位100 g、正丁醇萃取部位43 g。

取乙酸乙酯萃取部位100 g，采用正相硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脫，每1000 mL為1個流份，薄層色譜檢識，合并斑點相近的流份，濃縮回收溶劑得到5個部分(Fr.1～Fr.5)。Fr.2經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮(10∶1→0∶1)梯度洗脫，采用三氯甲烷-甲醇(1∶1)系統(tǒng)，Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及反復(fù)硅膠柱色譜分離純化，得化合物1(1.3 mg)、2(2.3 mg)、3(5 mg)。Fr.3經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(9∶2→0∶1)梯度洗脫，三氯甲烷-甲醇(50∶1)洗脫后采用三氯甲烷-甲醇(1∶1)系統(tǒng)，Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離純化，得化合物4(13.3 mg)。

取正丁醇萃取部位43 g，采用正相硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷-甲醇(4∶1→0∶1)梯度洗脫，每500 mL為1個流份，薄層色譜檢識，合并斑點相近流份，濃縮回收溶劑得到5個部分(Fr.1～Fr.5)。Fr.1經(jīng)正相硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇(20∶1→0∶1)梯度洗脫，然后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，采用三氯甲烷-甲醇(1∶1)系統(tǒng)洗脫；以Rp-8反相柱色譜，甲醇-水(0∶100→100∶0梯度洗脫)系統(tǒng)分離純化，得化合物6(7.6 mg)、8(0.8 mg)、10(5.5 mg)。Fr.2經(jīng)正相硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇(15∶1→0∶1)梯度洗脫，然后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，采用三氯甲烷-甲醇(1∶1)系統(tǒng)洗脫；以Rp-8反相柱色譜，甲醇-水(0∶100→100∶0梯度洗脫)系統(tǒng)分離純化，得化合物5(3.5 mg)、9(4.3 mg)。Fr.3經(jīng)MCI柱色譜，以甲醇-水(0∶100→100∶0)梯度洗脫，然后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，采用三氯甲烷-甲醇(1∶1)系統(tǒng)洗脫；以Rp-8反相柱色譜，甲醇-水(0∶100→100∶0梯度洗脫)系統(tǒng)分離純化，得化合物7(1.8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，在TLC上展開后噴霧9%硫酸-乙醇溶液顯藍色。EI-MSm/z：178[M]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：9.66(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)，7.42(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，7.14(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-2)，7.07(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.97(1H，d，J=1.8 Hz，H-5)，6.62(1H，dd，J=7.8，15.6 Hz，H-8)，3.96(3H，s，3-OMe)；13C-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：193.6(C-9)，153.0(C-7)，148.9(C-3)，146.9(C-4)，126.7(C-1)，126.5(C-8)，124.1(C-6)，114.9(C-5)，109.4(C-2)，56.0(3-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[2]基本一致，故鑒定化合物1為松柏醛(coniferyl aldehyde)。

化合物2：淡黃色粉末，在TLC上展開后噴霧9%硫酸-乙醇溶液顯紫紅色。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.10(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.78(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.68(1H，s，H-2)，6.66(1H，br s，H-6)，4.11(2H，t，J=6.6 Hz，H-9)，3.90(3H，s，3-OMe)，2.91(2H，t，J=7.8 Hz，H-7′)，2.63(2H，t，J=8.4 Hz，H-8′)，2.59(2H，t，J=8.4 Hz，H-7)，1.93(2H，m，J=8.4 Hz，H-8)；13C-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：173.0(C-9′)，154.0(C-4′)，146.4(C-3)，143.8(C-4)，133.1(C-1)，132.8(C-1′)，129.5(C-2′，6′)，121.0(C-6)，115.3(C-3′，5′)，114.3(C-5)，110.9(C-2)，63.8(C-9)，56.0(3-OMe)，36.2(C-8′)，31.8(C-7)，30.5(C-8)，30.2(C-7′)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[3]基本一致，故鑒定化合物2為二氫松柏醇二氫對羥基桂皮酸酯(dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate)。

化合物3：白色粉末。1H-NMR(400 MHz，pyridine-d5)δ：8.09(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，7.51(2H，d，J=7.0 Hz，H-3，5)，7.26(3H，m，H-2，4，6)，7.23(3H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，7.12(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，6.97(1H，d，J=15.8 Hz，H-8)，3.86(2H，m，H-8′)，2.99(2H，m，H-7′)；13C-NMR(400 MHz，pyridine-d5)δ：166.1(C-9)，157.5(C-4′)，139.8(C-7)，135.7(C-1)，130.5(C-2′，6′)，129.6(C-4)，129.2(C-2，6)，128.0(C-3，5)，123.0(C-8)，116.3(C-3′，5′)，42.0(C-8′)，35.5(C-7′)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[4]基本一致，故鑒定化合物3為N-反式桂皮酰酪胺(N-trans-cinnamoyltyramine)。

化合物4：黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.32(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.82(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，5.89(2H，dd，J=2.0 Hz，H-6，8)，5.35(1H，dd，J=2.8，12.8 Hz，H-2)，3.10(1H，dd，J=13.2，17.2 Hz，H-3a)，2.66(1H，dd，J=13.2，17.2 Hz，H-3b)；13C-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：197.8(C-4)，168.4(C-7)，165.5(C-5)，164.9(C-9)，159.0(C-4′)，131.1(C-1′)，129.0(C-2′，6′)，116.3(C-3′，5′)，103.3(C-10)，97.0(C-6)，96.1(C-8)，80.5(C-2)，44.0(C-3)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[5]基本一致，故鑒定化合物4為柚皮素(naringenin)。

化合物5：白色粉末。(+)ESI-MSm/z：268[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：8.34(1H，s，H-2)，8.12(1H，s，H-8)，7.35(2H，s，6-NH2)，5.87(1H，d，J=6.4 Hz，H-1′)，5.46(2H，m，2′，5′-OH)，5.20(1H，d，3′-OH)，4.62(1H，q，J=5.9，11.2 Hz，H-2′)，4.13(1H，d，J=2.8 Hz，H-3′)，3.95(1H，d，J=2.8 Hz，H-4′)，3.67(1H，m，J=4.0，8.4 Hz，H-5′a)，3.56(1H，m，J=3.6，7.2 Hz，H-5′b)；13C-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：158.0(C-6)，154.2(C-2)，150.9(C-4)，141.8(C-8)，121.2(C-5)，89.7(C-1′)，87.8(C-4′)，75.3(C-2′)，72.5(C-3′)，63.5(C-5′)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[6]基本一致，故鑒定化合物5為腺苷(adenosine)。

化合物6：白色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：4.05(1H，d，J=4.9 Hz，H-3′)，3.89(1H，m，H-5′)，3.83(1H，m，H-4′)，3.74(2H，m，H-1′)，3.63(2H，m，H-6′)，3.54(2H，m，H-1)，1.50(2H，m，H-2)，1.42(2H，m，H-3)，0.93(3H，t，J=7.2 Hz，H-4)；13C-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：108.8(C-2′)83.8(C-5′)83.2(C-3′)，78.5(C-4′)62.7(C-6′)61.9(C-1′)61.6(C-1)33.4(C-2)20.4(C-3)14.2(C-4)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[7]基本一致，故鑒定化合物6為正丁基-α-D-呋喃果糖苷(n-butyl-α-D-fructofuranoside)。

化合物7：白色粉末。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.73(1H，s，H-2)，4.34(1H，s，H-3)，3.97(1H，m，H-4)，3.63(1H，m，H-5)，2.76(1H，m，H-6a)，2.19(1H，m，H-6b)；13C-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：168.8(C-7)，137.4(C-2)，129.3(C-1)，72.9(C-3)，68.0(C-4)，67.1(C-5)，32.2(C-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[8]基本一致，故鑒定化合物7為莽草酸(shikimic acid)。

化合物8：白色固體。(+)ESI-MSm/z：253[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.78(1H，t，J=1.8 Hz，H-2)，4.36(1H，s，H-3)，4.16(2H，t，J=6.6 Hz，H-1′)，3.99(1H，m，H-5)，3.69(1H，m，H-4)，2.70(1H，m，H-6a)，2.22(1H，m，H-6b)，1.68(2H，m，H-2′)，1.44(2H，m，H-3′)，0.97(3H，t，J=7.2 Hz，H-4′)；13C-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：168.3(C-7)，138.9(C-2)，130.4(C-1)，72.6(C-4)，68.4(C-5)，67.3(C-3)，65.6(C-1′)，31.8(C-2′)，31.5(C-6)，20.3(C-3′)，14.0(C-4′)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[9]基本一致，故鑒定化合物8為莽草酸正丁酯(shikimic acidn-butyl ester)。

化合物9：白色粉末。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.71(2H，s，H-2，6)，6.65(2H，s，H-2′，6′)，4.85(1H，d，J=7.2 Hz，H-1′′)，4.76(1H，d，J=4.2 Hz，H-7)，4.71(1H，d，J=4.2 Hz，H-7′)，4.28(1H，m，H-9eq)，4.28(1H，m，H-9′eq)，3.91(1H，m，H-9aq)，3.91(1H，m，H-9′aq)，3.85(6H，s，3，5-OCH3)，3.84(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.13(1H，m，H-8)，3.13(1H，m，H-8′)；13C-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：1154.4(C-4)，149.3(C-4′)，139.5(C-3)，139.5(C-5)，135.5(C-1)，134.8(C-1′)，133.0(C-3′，5′)，105.3(C-1′′)，104.8(C-2，6)，104.4(C-2′，6′)，87.6(C-7)，87.2(C-7′)，78.3(C-5′′)，77.8(C-3′′)，75.7(C-2′′)，72.9(C-9)，72.9(C-9′)，71.3(C-4′′)，62.5(C-6′′)，57.0(-OCH3×2)，56.8(-OCH3×2)，55.8(C-8′)，55.5(C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[10]基本一致，故鑒定化合物9為左旋丁香樹脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[(+)-syringaresinol-O-β-D-glucopyranoside]。

化合物10：白色粉末。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：9.02(1H，s，H-2)，8.69(1H，br s，H-6)，8.28(1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，7.55(1H，dd，J=7.9，4.9 Hz，H-5)；13C-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：152.8(C-6)，149.4(C-2)，137.3(C-4)，131.4(C-3)，125.1(C-5)。以上波譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻報道[11]基本一致，故鑒定化合物10為煙酰胺(niacinamide)。

4 結(jié)論

本文報道從杯鞘石斛莖95%乙醇提取物中分離得到的10個化合物均為首次從該植物中分離得到，其中化合物6，8和10為首次從該屬植物分離得到。

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PhytochemicalStudyofDendrobiumgratiosissimum

GAOWei1,YANGLiu2,LIHuihui1,LIUChangqian1,LIUShoujin1*,HUJiangmiao2*

(1.ModernKeyLaboratoryofAnhuiProvince,CollegeofPharmacyinAnhuiUniversityofTraditionalChinese,Hefei230012,China;2.StateKeyLaboratoryofPhytochemistryandPlantResourcesinWestChina,KunmingInstituteofBotany,ChineseAcademyofSciences,Kunming650201,China)

Objective：To study the chemical constituents from the stems ofDendrobiumgratiosissimum.Methods：The chemical constituents were isolated and purified by various column chromatographies.The structures of isolated compounds were identified by combination of spectroscopic methods(MS，1H，13C NMR)and comparisons with the literature data.Result：Chemical investigation of the stems ofD.gratiosissimumled to the isolation of ten compounds，including coniferyl aldehyde(1)，dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate(2)，N-trans-cinnamoyltyramine(3)，naringenin(4)，adenosine(5)，n-butyl-α-D-fructofuranoside(6)，shikimic acid(7)，shikimic acidn-butyl ester(8)，(+)-syringaresinol-O-β-D-glucopyranoside(9)，niacinamide(10).Conclusion：This is the first time to report all compounds fromD.gratiosissimum，and the compounds6、8、10were firstly isolated from the genusDendrobium.

Dendrobiumgratiosissimum；phytochemicals；n-butyl-α-D-fructofuranoside；shikimic acidn-butyl ester；niacinamide

2014-11-25)

*

劉守金，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物學與中藥資源化學；E-mail：shjinliu@sina.com 胡江苗，副研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物資源化學；Tel：(0871)65233261， E-mail：hujiangmiao@mail.kib.ac.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.004