牛副結(jié)核病的流行病學(xué)特征與實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)研究進(jìn)展

孫 雨，馬世春，時(shí)建忠，魏 巍，董 浩，徐 一，蘇增華，池麗娟，馬繼紅，王曉英

（中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 102600）

專(zhuān)論與綜述

牛副結(jié)核病的流行病學(xué)特征與實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)研究進(jìn)展

孫 雨，馬世春，時(shí)建忠，魏 巍，董 浩，徐 一，蘇增華，池麗娟，馬繼紅，王曉英

（中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 102600）

牛副結(jié)核?。╞ovine paratuberculosis）是由副結(jié)核分支桿菌引起的以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染病。其臨床癥狀與病理變化是頑固性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦、慢性肉芽腫回腸炎，腸粘膜增厚并形成皺褶。除常規(guī)的臨床診斷外，牛副結(jié)核病的確診依賴(lài)于實(shí)驗(yàn)室診斷方法，主要有病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等方法。牛副結(jié)核病給畜牧業(yè)造成很大的損失。由于本病潛伏期長(zhǎng)，傳播快，加之人工培養(yǎng)副結(jié)核分枝桿菌難度又高，因此加強(qiáng)對(duì)該病的病原學(xué)、流行病學(xué)特征的認(rèn)識(shí)，加快實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究對(duì)其綜合防控工作具有十分重要的意義。作者主要介紹了目前國(guó)內(nèi)外牛副結(jié)核病流行病學(xué)特征和診斷方法的研究進(jìn)展，并比較了各種方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，為牛副結(jié)核病的臨床快速診斷和深入研究提供科學(xué)依據(jù)。

牛副結(jié)核??；流行病學(xué)；實(shí)驗(yàn)室診斷

牛副結(jié)核?。╞ovine paratuberculosis）是由副結(jié)核分支桿菌引起的以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染?。?］。牛副結(jié)核病又稱(chēng)副結(jié)核性腸炎或Johne病，主要臨床癥狀和病理變化是頑固性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦、慢性肉芽腫回腸炎，腸粘膜增厚并形成皺褶。人類(lèi)的副結(jié)核病又稱(chēng)為克羅恩?。–rohn’s disease），是由食用被該菌污染的牛奶或奶制品而造成的人過(guò)敏性腸道癥狀、潰瘍性腸炎［2］?？肆_恩病是人慢性炎癥性腸道疾病，其特征為腸道組織發(fā)生廣泛性炎癥反應(yīng)與肉芽腫。由于本病潛伏期長(zhǎng)，特征性癥狀不明顯，人工培養(yǎng)分離難度較大，一旦發(fā)病在整個(gè)牛群傳播速度較快、危害較大，動(dòng)物發(fā)病后會(huì)給地方畜牧業(yè)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失［3］。副結(jié)核病嚴(yán)重危害了人民群眾的身體健康和生命安全，影響社會(huì)與經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。因此，加強(qiáng)對(duì)該病的病原學(xué)、流行病學(xué)特征的認(rèn)識(shí)，加快實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究對(duì)其綜合防控工作具有十分重要的意義。

1　病原特征

1.1病原分類(lèi)

副結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium paratuberculosis，MP）在分類(lèi)上屬于分枝桿菌屬。近年來(lái)的研究結(jié)果表明，該菌與禽分支桿菌有較多的相似性，變態(tài)反應(yīng)也與禽分支桿菌有明顯的交叉性［4］。

1.2病原的基本特征

副結(jié)核分枝桿菌為短桿菌，是一種細(xì)長(zhǎng)桿菌，有的呈短棒狀，有的呈球桿狀，常呈縱排列，無(wú)鞭毛，無(wú)運(yùn)動(dòng)力，不形成莢膜和芽孢，革蘭氏染色為陽(yáng)性，抗酸染色為陽(yáng)性。本菌為需氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為37.5℃，最適pH值為6.8～7.2。該菌生長(zhǎng)緩慢、原代分離極為困難，需在培養(yǎng)基中添加草分支桿菌素抽提物，一般需要6～8周才能發(fā)現(xiàn)小菌落［5］。

2　流行病學(xué)特征

2.1傳染來(lái)源

病畜和帶菌畜是主要傳染源，反芻動(dòng)物對(duì)副結(jié)核分枝桿菌易感，其中奶牛最易感。牛奶或奶制品是人類(lèi)副結(jié)核病的主要感染源，其次是被副結(jié)核分枝桿菌污染的環(huán)境、水源等［6］。人與人的直接接觸傳播尚未見(jiàn)報(bào)道。

2.2傳播途徑

主要傳播途徑是動(dòng)物采食污染的飼料和飲水，消化道是最常見(jiàn)的感染途徑，也可通過(guò)精液和胎盤(pán)傳播。最易感時(shí)期是出生后3個(gè)月的哺乳期，犢牛因攝取成年牛糞便污染的奶或飲水而感染。一般感染后3～6年不發(fā)病，而成為隱性感染［7］。

2.3易感動(dòng)物

該病的自然宿主為反芻動(dòng)物，如牛、綿羊、山羊、鹿及駱駝對(duì)本菌易感，且多見(jiàn)于母牛，尤其是在妊娠以及泌乳期的母牛最易感［8］。馬、水牛、豬等也有自然感染的報(bào)道；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如家兔、豚鼠、大鼠、小鼠、雞等小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可以用來(lái)進(jìn)行副結(jié)核感染研究。但鼠類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最為易感，特別是BALB/c、C57/B6、SCID系鼠類(lèi)［9］。

2.4流行特征

本病無(wú)明顯的季節(jié)性，但常發(fā)生于春秋兩季。潛伏期長(zhǎng)，可達(dá)6～12個(gè)月或更長(zhǎng)，主要呈散發(fā)，有時(shí)呈地方流行性。在青黃不接、草料供應(yīng)不上、羊只體質(zhì)不良時(shí)發(fā)病率上升。轉(zhuǎn)入青草期，病羊癥狀減輕，病情見(jiàn)好轉(zhuǎn)［10］。副結(jié)核病廣泛流行于世界各國(guó)。養(yǎng)牛業(yè)較為發(fā)達(dá)的國(guó)家，例如美國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、加拿大、澳大利亞、意大利、丹麥等國(guó)受害嚴(yán)重。我國(guó)遼寧、黑龍江、內(nèi)蒙古、貴州、陜西、河北等地區(qū)也有發(fā)生過(guò)本病的報(bào)道，幾乎遍及了東北、西北、華北大部分地區(qū)。近年來(lái)由于奶牛和肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展非常迅速，生產(chǎn)規(guī)模越來(lái)越大，集約化程度越來(lái)越高，牛流動(dòng)范圍也越來(lái)越廣，副結(jié)核發(fā)病也呈上升趨勢(shì)［11］。

2.5對(duì)牛的致病性

幼齡期牛易感染副結(jié)核，尤其在1月齡內(nèi)最易感染。動(dòng)物發(fā)病緩慢，有反復(fù)加重和緩解的過(guò)程，腹痛輕重不一。發(fā)病時(shí)臨床表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦，周期性、頑固性下痢，下痢呈噴射狀、惡臭、糞便中常混有脫落的腸粘膜和血液。牛在發(fā)病后期極度消瘦，有時(shí)可見(jiàn)到下頜和腹下水腫，最后衰竭而死［12］。

3　實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

3.1細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

該法為活體定性方法，并且為目前世界上認(rèn)可推薦使用的方法。其具體操作步驟：取病牛直腸病變部位組織的刮取物或糞便放入蒸餾水中混勻，離心后取沉淀物用萋-尼氏抗酸染色顯微鏡下觀察。如果是陽(yáng)性病料，顯微鏡下可見(jiàn)紅色球桿狀成團(tuán)的細(xì)菌。該方法的缺點(diǎn)是由于糞便或者直腸刮取物中含有其他抗酸菌，所以容易干擾副結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)［13］。

3.2皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)診斷（PPD試驗(yàn)）

副結(jié)核的皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)診斷主要使用提純的副結(jié)核菌素對(duì)動(dòng)物進(jìn)行皮內(nèi)注射，一般使用劑量為0.1 mL，作用72 h后仔細(xì)觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測(cè)量皮皺厚度，作好詳細(xì)記錄。對(duì)疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進(jìn)行第二次皮內(nèi)注射，再經(jīng)72 h觀察反應(yīng)結(jié)果。對(duì)陽(yáng)性牛和疑似反應(yīng)牛，于注射后96 h和120 h再分別觀察一次，以防個(gè)別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。一般的判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性反應(yīng)局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差大于或等于4.0 mm；疑似反應(yīng)的判定為局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0 mm、小于4.0 mm；陰性反應(yīng)的判定為無(wú)炎性反應(yīng)，皮厚差在2.0 mm以下。本方法能檢測(cè)出副結(jié)核感染前期的大部分發(fā)病動(dòng)物，對(duì)于感染中后期以及處于耐受期的動(dòng)物敏感性不強(qiáng)或者不出現(xiàn)反應(yīng)狀態(tài)。另外其他一些分枝桿菌，如禽型結(jié)核分枝桿菌、鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌可以干擾副結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)［14］。

3.3補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)方法為檢測(cè)本病最早的方法，并且是國(guó)際上常用的一種經(jīng)典檢測(cè)方法，它的優(yōu)點(diǎn)與PPD檢測(cè)方法一樣可用于動(dòng)物感染前期的抗體檢測(cè)。缺點(diǎn)是容易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，并存在一些非特異性的反應(yīng)，操作程序復(fù)雜，不適用于血清樣品的大規(guī)模檢測(cè)［15］。

3.4γ-干擾素ELISA檢測(cè)方法

動(dòng)物感染副結(jié)核分枝桿菌后的前期并不產(chǎn)生抗體，只有在臨床癥狀階段才產(chǎn)生抗體，所以使用血清學(xué)方法不能準(zhǔn)確地鑒定動(dòng)物是否患有副結(jié)核病。γ-干擾素ELISA檢測(cè)方法則可以用于檢測(cè)副結(jié)核病的亞臨床感染狀態(tài)。γ-干擾素ELISA檢測(cè)方法的原理是動(dòng)物感染病原后，循環(huán)淋巴細(xì)胞對(duì)病原致敏，致敏后的淋巴細(xì)胞遇到副結(jié)核分枝桿菌或結(jié)核分枝桿菌抗原后會(huì)在體外模擬遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。發(fā)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)后，致敏的淋巴細(xì)胞會(huì)釋放出γ-干擾素［16］。γ-干擾素是可以用于ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)的，并且檢測(cè)的含量與副結(jié)核分枝桿菌的含量呈正相關(guān)性。該方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、敏感性好，可用于檢測(cè)動(dòng)物的亞臨床感染狀態(tài)；缺點(diǎn)是采集的動(dòng)物血清必須經(jīng)過(guò)前期刺激抗原的致敏處理，操作過(guò)程較為繁瑣［17］。

3.5酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法是近幾年研究學(xué)者們比較關(guān)注的一個(gè)方法，并有可能取代PPD試驗(yàn)與CFT試驗(yàn)，用于樣品的大規(guī)模初篩檢測(cè)［18］。目前使用的ELISA方法大多為直接ELISA方法，其優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、可用于大規(guī)模定性檢測(cè)。但由于其敏感性較差，所以一般定量檢測(cè)還需要CFT試驗(yàn)與γ-干擾素檢測(cè)方法輔助進(jìn)行［19-21］。

3.6膠體金檢測(cè)技術(shù)

該方法是膠體金標(biāo)記羊抗兔IgG抗體，檢測(cè)動(dòng)物副結(jié)核病IgG1抗體的銀加強(qiáng)膠體金技術(shù)。用本法檢測(cè)動(dòng)物血清中抗副結(jié)核分枝桿菌IgG1抗體的可信度高，并且具有敏感、特異、簡(jiǎn)易、經(jīng)濟(jì)和適用于現(xiàn)場(chǎng)推廣應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)，作為一種新的血清學(xué)診斷方法具有較強(qiáng)的推廣價(jià)值［22］。

3.7RNA探針檢測(cè)方法

RNA探針?lè)椒ㄒ云漭^高的特異性而廣泛用于目前動(dòng)物疫病檢測(cè)中。rRNA的一些基因存在于所有的副結(jié)核分枝桿菌中具有高度的同源性，檢測(cè)時(shí)有明顯的交叉反應(yīng)，而某些基因具有明顯的種屬特異性。利用具有特異性的rRNA標(biāo)記成rRNA探針就是檢測(cè)副結(jié)核分枝桿菌的基礎(chǔ)［23］。該方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性好，結(jié)果較為可靠。

3.8聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）

隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）也逐步用于動(dòng)物疫病病原的檢測(cè)工作中。在副結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)過(guò)程中，目前的研究熱點(diǎn)是細(xì)菌的插入序列IS900［15］。IS900由1 451個(gè)堿基組成，G+C的含量為66%，具有明顯的特異性［4，24］。利用IS900的某些片段標(biāo)記為DNA探針，結(jié)合套式PCR技術(shù)可以特異性的檢測(cè)出動(dòng)物糞便中的細(xì)菌［25］。目前國(guó)外對(duì)這方面技術(shù)的研究，尤其是如何消除假陽(yáng)性和假陰性因素的研究有了很全面的介紹。由于副結(jié)核分枝桿菌為無(wú)細(xì)胞壁的細(xì)菌，所以分離培養(yǎng)十分困難，一般常規(guī)培養(yǎng)細(xì)菌需要6周以上的時(shí)間且步驟十分繁瑣，而使用PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)菌只需要幾個(gè)小時(shí)，能夠快速、敏感、特異地檢出病料中的細(xì)菌，對(duì)于副結(jié)核病的控制具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值，是目前診斷副結(jié)核病的理想方法［26］。由于PCR方法比其他方法具有更高的檢出效率，并且克服了其他常規(guī)方法耗時(shí)、敏感性不強(qiáng)等缺點(diǎn)，有望成為檢測(cè)副結(jié)核病的一種實(shí)用而可靠的手段［27-28］。

4　防治措施

4.1綜合性防治措施

因病牛往往在感染后期才出現(xiàn)癥狀，因此用藥物治療的實(shí)際意義較小。預(yù)防本病主要是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，尤其要注意幼年牛的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充以便增強(qiáng)抵抗力。如從疫區(qū)引進(jìn)牛只則必須進(jìn)行健康檢查才能混群。對(duì)曾有過(guò)病牛的假定健康牛群，隨時(shí)做好觀察、定期進(jìn)行臨床檢查，對(duì)所有牛只每隔3個(gè)月做一次變態(tài)反應(yīng)，變態(tài)反應(yīng)為陰性的牛方可調(diào)出，連續(xù)3次檢查為陰性的?？梢暈榻】蹬?。對(duì)變態(tài)反應(yīng)和臨床癥狀明顯的排菌牛，應(yīng)隔離分批撲殺。被污染的牛舍、欄桿、飼槽、用具、繩索、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)要用生石灰、來(lái)蘇兒、氫氧化鈉、漂白粉、石碳酸等消毒液進(jìn)行噴霧、浸泡或沖洗，糞便應(yīng)堆積高溫發(fā)酵后作肥料［29］。

4.2疫苗免疫接種

歐美一些副結(jié)核病流行嚴(yán)重的國(guó)家由于流行面廣、感染率高，承受不了檢出撲殺的巨大經(jīng)濟(jì)損失。這些國(guó)家通過(guò)長(zhǎng)期的論證認(rèn)為，對(duì)新生犢牛進(jìn)行免疫接種、配合必要的獸醫(yī)衛(wèi)生措施是控制本病的最有效措施［30］。但因犢牛的接種免疫效果不佳以及接種牛對(duì)變態(tài)反應(yīng)呈陽(yáng)性等問(wèn)題，未能在世界各國(guó)推廣。副結(jié)核病是在幼齡期感染的，并存在較高的垂直傳播，因此僅靠主動(dòng)免疫防止感染較為困難。在實(shí)際應(yīng)用中，副結(jié)核疫苗只是抗臨床發(fā)病，不能徹底清除排菌牛。另外接種副結(jié)核疫苗的牛對(duì)結(jié)核菌素和副結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)都呈陽(yáng)性，對(duì)識(shí)別結(jié)核病牛造成困難，從而影響牛結(jié)核病的檢疫，只有幾個(gè)國(guó)家使用此方法。目前使用的疫苗有兩種，一是弱毒疫苗，一是滅活疫苗。英國(guó)及一些東歐國(guó)家一般采用弱毒活疫苗，而美國(guó)、挪威等國(guó)家使用滅活疫苗［31］。

5　公共衛(wèi)生影響

近年來(lái)由于奶牛和肉牛業(yè)發(fā)展迅速，生產(chǎn)規(guī)模逐漸擴(kuò)大，集約化程度越來(lái)越高，牛的流動(dòng)范圍也隨之加大，副結(jié)核發(fā)病呈上升趨勢(shì)，需要重點(diǎn)關(guān)注。當(dāng)前一些劣質(zhì)奶及其乳產(chǎn)品的出現(xiàn)，人類(lèi)免疫抑制性疾病的發(fā)病率逐漸增高，加劇了牛副結(jié)核病的潛在危險(xiǎn)，也使人克羅恩病的發(fā)病率增大。要更好地預(yù)防副結(jié)核病的發(fā)生需要定期檢疫、處理或隔離病牛并采取相應(yīng)的衛(wèi)生消毒措施，對(duì)具有明顯臨床癥狀的開(kāi)放性病牛和細(xì)菌學(xué)檢查為陽(yáng)性的病牛，要及時(shí)捕殺處理，防止細(xì)菌繼續(xù)擴(kuò)散。同時(shí)要加強(qiáng)食品衛(wèi)生的檢疫力度，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并淘汰劣質(zhì)牛奶，爭(zhēng)取將其影響控制到最小程度［32］。

［1］ 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.

［2］ 田克恭.人與動(dòng)物共患?。跰］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2013.

［3］ 查紅波，索勛校.副結(jié)核病及其危害［J］.國(guó)外畜牧科技，1998，25（5）：51.

［4］ Tripathi B N，Stevenson K.Detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in formalin-fixed，paraffin embedded tissues of goats by IS900 polymerase chain reaction［J］.Aust Vet J，2012，102（1）：84-88.

［5］ Santema W，Hensen S，Rutten V，et al.Heat shock protein 70 subunit vaccination against bovine paratuberculosis does not interfere with current immuno-diagnostic assays for bovine tuberculosis［J］.Vaccine，2009，27（17）：2312-2319.

［6］ Bannantine J P，Bayles D O，Waters W R，et al.Early antibody response against Mycobacterium avium subsp paratuberculosis antigens in subclinical cattle［J］.Proteome Sci，2008，6：5-9.

［7］ Bannantine J P，Waters W R，Stabel J R，et al.Development and use of a partial Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis protein array［J］.Proteomics，2008，8（3）：463-474.

［8］ Shimizu K.Studies on mycobacterial infection of cow in hokaido［J］.J Vet Sci，1981，48：15-19.

［9］ KennedyD.International efforts at paratuberculosis control［J］.Vet Clin North AmFood AnimPract，2011，27：647-654.

［10］Katrina L，Bower J，Richard J.Culture of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis（MAP）from blood and extra-intestinal tissues in experimentally infected sheep［J］.Veterinary Microbiology，2011，147：127-132.

［11］Stabel J R，Bannantine R.Development of a nested PCR method taigeting a unique multicopy element，ISMap02，for detection of mycobacterium avium subsp.paratuberculosis in fecal samples［J］.J Clin Microbio，2005，43（9）：4744-4750.

［12］Duffield B J，Norton J，Hoffmann D.An analysis of recent isolation of Mycobacterium.bovis and saprophytic mycobacteria from cattle in northern Queensland.［J］.Austra Vet J，1989，66：307-308.

［13］王忠福.以直腸粘膜糞便檢查法診斷奶牛副結(jié)核?。跩］.黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志，2003，3：35.

［14］何昭陽(yáng)，李卯年，胡桂學(xué)，等.牛源性分枝桿菌的犢牛變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1994，25（6）：545-550.

［15］Castellanos E，Aranaz A，Juan L，et al.Single nucleotide polymorphisms in the IS900 sequence of Mycobacterium avium subspparatuberculosis are strain type specific［J］.Journal of Clinical Microbiology，2009，47：2260-2264.

［16］Collins M T.Diseases of dairy animals：infectious diseases：Johne's disease［M］.Encyclopedia ofDairySciences，2011，12：174-180.

［17］Singh S，Sohal J，Singh P，et al.Genotype profiles of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis isolates recovered from animals，commercial milk，and human beings in North India［J］.International Journal ofInfectious Diseases，2009，13：221-227.

［18］何昭陽(yáng)，韓有庫(kù)，顧萬(wàn)軍，等.牛副結(jié)核ELISA診斷方法研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1991，22（1）：57-60.

［19］寧定橋.從亞臨床臨床癥狀奶牛的乳中分離副結(jié)核分枝桿菌［J］.國(guó)外獸醫(yī)學(xué)—畜禽疾病，1996，17（4）：31-32.

［20］王永康.上海市奶牛副結(jié)核病的血清學(xué)調(diào)查［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2000（2）：24.

［21］張?jiān)词缯g.瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)盒檢測(cè)綿羊副結(jié)核分枝桿菌抗體效果的評(píng)價(jià)［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，1999，29（1）：60-61.

［22］金鑫，魯永，朱永哲，等.銀加強(qiáng)膠體金技術(shù)檢測(cè)牛副結(jié)核病IgG1抗體的研究［J］.中國(guó)獸醫(yī)科技，1999，29（2）：10-12.

［23］王素華，王忠才，李孝軍，等.牛副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39（10）：125-126.

［24］王素華，王忠才，李孝軍，等.牛副結(jié)核病PCR檢測(cè)方法的建立［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39（5）：125-126.

［25］王春雨，楊莉，劉金華，等.應(yīng)用TaqMan熒光定量PCR快速檢測(cè)鹿血中副結(jié)核分枝桿菌［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33（3）：208-210.

［26］徐鳳宇，姜秀云，何昭陽(yáng).禽分枝桿菌副結(jié)核亞種基因分型研究進(jìn)展［J］.2007，29（8）：649-654.

［27］Hurley S S.et al.Development of a diagnosis for Johnes disease using a DNA hybridization probe［J］.J Clin Microbiol，1989，27（7）：1582-1587.

［28］Martinson SA，Hanna PE，Ikede BO，et al.Comparison of bacterial culture，histopathology and immunohistochemistry for the diagnosis of Johne disease in culled dairy cows［J］.J Vet Diagn Invest，2008，20（1）：51-57.

［29］Holland BK.Treatments for bubonic plague：Reports from seventeenth century British epidsmics［J］.J R Soc Med，2000，93：322-324.

［30］Heuer C，Mitchell R M，Schukken Y H，et al.Modelling transmission dynamics of paratuberculosis of red deer under pastoral farming conditions［J］.Prev Vet Med，2012，106（1）：63-74.

［31］Radka P，Iva S.Correlation of Mycobacterium avium paratuberculosis counts in gastrointestinal tract，muscles of the diaphragm and the masseter of dairy cattle and potential risk for consumers［J］.International Journal of Food Microbiology，2011，151：314-318.

［32］Mutharian L，Klassen M，F(xiàn)airies J，et al.Mycobacterium avium subsp. paratuberculosisin muscle，lymphatic and organ tissues from cows with advanced Johne's disease［J］.International Journal of Food Microbiology，2010，136：340-344.

Progress in the Epidemiological Characteristics and Diagnosis Technology of Bovine Paratuberculosis

Sun Yu，Ma Shichun，Wang Xiaoying，et al
（China Animal Disease Control Center，Beijing102600，China）

Bovine paratuberculosis is a zoonosis caused by mycobacterium paratuberculosis，which was characterized by chronic hyperplastic and intractable enteritis and progressive weight loss.Clinical symptom and pathological change of the disease is intractable diarrhea，progressive weight loss，chronic granulomatous ileitis，intestinal mucosal thickening and the formation of wrinkles.Diagnosis methods of paratuberculosis include clinical symptoms，while a final diagnos is depended on laboratory diagnostic methods，such as etiological diagnosis，serological diagnosis and molecular biological diagnosis.It results in considerable economic losses to the stock farming.Because of the long latence，easy transmissibility and the limitations of culture，so strengthening of the awareness of disease etiology and epidemiology is very important to comprehensive prevention measures of paratuberculosis.The author mainly introduced the research progress on pathogen，epidemiology and diagnosis technology of paratuberculosis.In addition，the advantages and disadvantages of various mothods were compared，in order to provide scientific basis for a further study and rapid diagnosis of paratuberculosis.

bovine paratuberculosis；epidemiology；laboratory diagnosis

S858.23

A

2095-3887（2015）02-0044-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.02.014

2015-02-04

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)（201403052）

孫雨（1983－），男，獸醫(yī)師，博士。

王曉英（1963－），女，研究員。研究方向：動(dòng)物疫病預(yù)防控制。