淺析雞馬立克氏病毒毒力進化與疫苗防控

劉永振 李凱 劉長軍 高玉龍 王笑梅

（中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室禽免疫抑制病創(chuàng)新團隊 150001）

淺析雞馬立克氏病毒毒力進化與疫苗防控

劉永振 李凱 劉長軍 高玉龍*王笑梅*

（中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室禽免疫抑制病創(chuàng)新團隊 150001）

雞馬立克氏病是由雞馬立克氏病病毒引起雞的一種高度傳染性、以淋巴細胞增生為特征的腫瘤病[1]。由于MDV疫苗的廣泛使用，該病已基本得到控制；但近些年來，MD的危害有進一步加重的趨勢，免疫失敗時有發(fā)生。MDV毒株毒力的不斷增強可能是近年來MD危害加重的主要原因之一[2]。根據MDV毒力進化趨勢分析，MDV毒株毒力大約每十幾年發(fā)生一次毒力躍遷，與之對應的疫苗研究也幾乎得到同步發(fā)展[3]。本文對MDV毒力進化、疫苗防控以及我們將來可選擇的其他防控措施等方面進行了簡要分析和概述。

1 MDV毒力進化趨勢

1.1 病毒毒力進化情況

自從Marek博士1907年首次報道MD以來，MDV的毒力就一直呈現增強的趨勢。其導致的臨床癥狀也相應的發(fā)生了改變。以前的散發(fā)性和慢性病例已被急性病例所代替[1]。在過去的35年中，MDV毒力仍持續(xù)增強，疾病的臨床癥狀呈現出溶細胞感染活性的增高，組織嗜性的改變，淋巴器官的嚴重萎縮，較為嚴重的免疫抑制，T細胞轉化能力的增強，和引起更早的宿主死亡等新特點[4]。美國農業(yè)部禽腫瘤病研究所根據不同毒株的致瘤率和死亡率，將MDV毒株毒力的劃分為溫和型（m）、強毒型（v），超強毒型（vv）和特超強毒型（vv+）[5]。

1.2 病毒毒力進化原因

關于病毒毒力進化的 “病毒毒力平衡理論”[6-9]認為，病毒在進化過程中，病毒和宿主之間存在兩個方面的平衡，一方面是那些能夠在宿主體內長時間復制和傳播的毒株更容易被宿主的免疫環(huán)境選擇，得以存活；另一方面這些能夠在宿主免疫環(huán)境中長時間存在的毒株又可以在自己毒力增強的同時并不造成宿主死亡。這兩方面的平衡是病毒毒力進化的主要原因。根據這一理論推測，MDV毒力的進化主要由以下幾個方面的原因引起。

1.2.1 養(yǎng)殖方式的改變

隨著人們生活水平的提高，對蛋白質的需求不斷提高，養(yǎng)禽業(yè)得到迅猛發(fā)展，其飼養(yǎng)模式由原來傳統(tǒng)的散養(yǎng)模式逐漸轉變?yōu)槊芗图s化養(yǎng)殖模式。在這種情況下，MDV在易感宿主上更易傳播并持續(xù)作用。一方面，MDV在環(huán)境中的廣泛存在增加了雞群感染的機會；另一方面，病毒可以在已免疫的健康雞體內長久復制，并長期承受著來自機體的免疫壓力和環(huán)境的選擇壓力的作用。以上兩個方面往往導致MDV發(fā)生變異。變異的結果可能是產生毒力更強的毒株，可以突破既有的免疫方法和疫苗株，發(fā)生群體免疫失敗，導致出現更大的經濟損失[10]。

1.2.2 MD疫苗自身特點

MD疫苗只能減少宿主的發(fā)病率和死亡率，不能阻止強毒在宿主體內的復制和在宿主之間的傳播[10]。因此，MD疫苗在MDV防控中的廣泛使用，能夠降低受強毒感染宿主的死亡率，這樣就會減少由于宿主死亡而對強毒自身的進化產生不利影響，使強毒能夠在宿主的免疫環(huán)境下持續(xù)存在并進一步進化[11]。

近年來養(yǎng)殖管理逐漸規(guī)范化，養(yǎng)殖人員水平不斷提高，MD疫苗使用不當的現象越來越少。但由于MD疫苗，尤其是MDV血清1型疫苗，具有嚴格細胞結合型的特性，在運輸和保存過程中有嚴格的要求，操作稍有不慎就有可能降低疫苗效力降低，由此引起的疫苗免疫效果的降低，可能也會為病毒的進化提供契機[10]。

2 MD疫苗防控進展

2.1 MD疫苗株的種類

自上個世紀70年代開始，人們便利用疫苗來控制MD，抗MD疫苗也隨著MD防疫要求的不斷提高而得到不斷發(fā)展。目前采用MDV三種不同的血清學的疫苗毒株預防MD：一種是血清Ⅰ型MDV的弱毒疫苗株，現地應用的代表株有CVI988/Rispens株和814株。CVI988株疫苗自上個世紀90年代開始在我國廣泛應用，其免疫效果較好，可以有效控制不同毒力的MDV野毒株[3]。MD疫苗814株是通過MDV自然弱毒株馴化獲得的，是我國具有獨立自主知識產權的疫苗毒株，疫苗安全性好，免疫效力高[12]。第二種是血清Ⅱ型MDV，該病毒因對于雞無致瘤性，被用于疫苗，其代表株為SB-1株。血清Ⅱ型MDV疫苗株免疫效果較血清Ⅰ型MDV疫苗株效果相對較低，較少單獨使用，主要用于制備多價苗。由于其能造成淋巴白血病的發(fā)病率增加，出于安全的考慮，該血清型毒株已經很少使用。第三種是血清Ⅲ型MDV，即火雞皰疹病毒（HerpesvirusofTurkey，HVT），HVT對雞無致病性，免疫效果也較好，并且HVT具有細胞游離性可凍干，使用方便[17]。

2.2 新型疫苗的研究

為了最大限度的控制馬立克氏病對養(yǎng)雞業(yè)的影響，在探索發(fā)展更有效的疫苗防控策略的過程中。基因工程疫苗成為了一個重要的研究方向。并且隨著基因工程技術的發(fā)展，MDV基因工程疫苗也出現了例如痘病毒表達MDV的gB基因[3]，在HVT基因組中表達MDV基因，MDV敲除meq基因[14]等重組病毒。但通過基因工程方法所構建的病毒疫苗株由于存在體內的復制水平都要低于原始毒株等原因一直沒有成為疫苗產品得到應用。

核酸疫苗也是將來MDV疫苗研制的一個重要方向。研究的原理是將編碼免疫原的基因插入真核表達質粒中，質粒在細菌中復制，提取并純化質粒后，再采用一定方法給動物接種。當質粒在宿主細胞中表達，表達產物可激發(fā)機體產生免疫應答。例如，將血清Ⅰ型MDV克隆到BAC（細菌人工染色體）上免疫雞，發(fā)現DNA疫苗可以對雞產生保護作用，但其免疫保護力并不比傳統(tǒng)的疫苗高[17]。

盡管我們在新型疫苗研究中遇到了諸多困難，至今也沒有一種有效的疫苗真正的應用到實際生產中去。但隨著MDV基礎研究的不斷深入和對MDV各基因功能的不斷揭示，MDV新型疫苗的研究一定會有突破。

3 控制MD的其他措施

從MDV野毒株的變異規(guī)律可以看出，MDV野毒株在適應免疫大約二十幾年后，可能變異成為毒力更強的毒株[15]。為對抗可能新出現的毒力更強的MDV毒株，在研究新型疫苗的同時，也可采取一些可行的措施來增強現有疫苗的免疫效力。

3.1 胚胎免疫

胚胎免疫是一種對18日齡雞胚進行免疫接種的方法，該方法免疫效果確實，成本低廉，在美國、以色列等國家已經廣泛使用[15]。18日齡胚胎免疫比1日齡雛雞免疫能更好地產生免疫應答，并促進免疫器官的成熟。18日齡雞胚接種MD疫苗不僅能預防早期感染，還能有效的抑制羽囊排毒或延緩羽囊排毒的時間，可大大減少MD對環(huán)境的污染，對防制MD有重要意義，并且胚胎接種不會降低孵化率和健雛率[15]。目前在我國這種方法還沒有得到推廣，原因主要是孵化規(guī)模較小，進口較為昂貴的免疫接種機成本比較高。不過隨著我國養(yǎng)禽業(yè)的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模和孵化場的孵化規(guī)模的不斷擴大，胚胎免疫可能在不遠的將來會成為我國MD免疫的一種方式。

3.2 二次免疫與交互使用疫苗

MDV疫苗二次免疫是指在雛雞出殼后即作第一次常規(guī)免疫接種，10日齡左右進行第二次免疫接種[16]。從理論上講，針對MDV的母源抗體往往能干擾l日齡免疫接種，使其產生不了應有的效果，因此，疫苗二次免疫可能能夠提供比一次免疫更高的保護效力[16]。而且，二次免疫可以很好地彌補第一次免疫漏免情況的發(fā)生。關于二次免疫的時間和劑量也沒有統(tǒng)一的意見。如果這種情況確實存在，那么將這一程序進一步優(yōu)化，顯然是改進免疫效果的又一種途徑。

MDV毒力增強與疫苗使用不當有一定的關系，制訂有效的免疫程序從而控制病毒毒力增強是非常有用的。在連續(xù)的不同批雞分別選用不同血清型的疫苗，可能分散病毒變化的壓力，降低由于免疫選擇給病毒帶來的變異壓力，并且提高免疫效力[17]。

3.3 飼養(yǎng)管理

早期感染是使疫苗效力降低的重要原因之一。給剛孵化出的雛雞提供無殘留灰塵和羽毛碎屑的環(huán)境，實行全進全出的飼養(yǎng)模式等都是防控MDV傳播的重要方法。在蛋雞場要嚴格執(zhí)行生物安全措施和徹底的清掃。在商品代肉雛雞場，必須采取徹底措施來消除前一批雞留下的傳染性物質，如果為了降低成本，放松管理，有可能引起更嚴重疾病流行，得不償失[18]。因此，加強管理，最大限度地延緩早期感染，可有效提高各種疫苗的效力。通過控制病毒感染擴散，緩解MDV毒力增強。

4 結語

作為養(yǎng)禽業(yè)一種重要疾病，MD持久的威脅始終是預防獸醫(yī)學的一個研究焦點。在長達50年的MD疫苗研究應用中，取得了諸多成功，MD疫苗作為第一個應用于抗腫瘤方面的疫苗，有力地控制了疫病的發(fā)生，降低養(yǎng)禽業(yè)的損失。但是在這個過程中，我們必須意識到簡單的依靠疫苗控制疾病的發(fā)展只能是一個暫時的解決方法，未曾從根本上阻止病毒的感染和傳播，尤其疫苗的使用推動了病原毒力不斷增強，也增加了疫苗研制的難度。因此在研發(fā)疫苗的進展中，我們必須要重視病毒毒力的進化態(tài)勢，通過采取更多有效手段，阻止病毒毒力增強，正確把握疫苗的功效。

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國家國際科技合作專項項目（2011DFA32210）。*