細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子在人前列腺癌組織的表達(dá)及臨床意義▲

黃俊波 莊曉波 鄭躍東

(廣東省揭西縣人民醫(yī)院泌尿外科，揭西縣 515400，E-mail:306669335@qq．com)

隨著人口老齡化和居民飲食結(jié)構(gòu)變化，前列腺癌的發(fā)病率和死亡率逐年上升。惡性腫瘤的生物學(xué)特性多變，其生長和侵襲、轉(zhuǎn)移是一個多因素、多步驟的復(fù)雜過程［1］。運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對調(diào)控基因及其表達(dá)的蛋白進(jìn)行檢測，可更好地了解惡性腫瘤的生物學(xué)行為，并有助于尋找治療的新靶點(diǎn)［2］。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子CD147是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞膜相關(guān)抗原，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的多個關(guān)鍵環(huán)節(jié)扮演著重要角色［3］。但目前CD147在前列腺癌中作用的報告較少。本研究運(yùn)用免疫組化方法檢測CD147蛋白在人前列腺癌的表達(dá)情況，旨在探討其在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 2008年1月至2012年12月我院收治前列腺癌患者56例(前列腺癌組)，年齡(58．6±4．2)歲。同期在我院就診良性前列腺增生患者56例(前列腺增生組)，年齡(56．9 ±5．4)歲，高分化8 例，中分化16例，低分化36例。兩組均經(jīng)病理確診。排除合并嚴(yán)重臟器損傷者、嚴(yán)重精神性疾病者等。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，兩組患者或家屬均知情同意。

1．2 主要試劑 CD147單克隆抗體(稀釋濃度1∶50)、鏈霉菌抗生物素蛋白－過氧化酶試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺染色顯色試劑盒均購自美國Sigma公司。

1．3 方法

1．3．1 收集臨床資料及標(biāo)本:記錄前列腺癌組患者的詳細(xì)臨床資料，包括年齡、病理分級、臨床分期、Gleason評分［4］、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存情況、分化程度等。Gleason評分＜5分為分化程度好;Gleason評分5～7分為分化程度中;Gleason評分＞7分為分化程度差或未分化。記錄前列腺增生組的年齡、病情等。于我院病理科取兩組患者的病灶石蠟標(biāo)本，標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，制作5 μm連續(xù)切片備用。

1．3．2 免疫組織化學(xué)染色:將組織蠟塊制成厚約5 μm的切片，按照鏈霉菌抗生物素蛋白－過氧化酶試劑盒說明書嚴(yán)格操作。使用已知陽性切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。

1．3．3 結(jié)果判讀:光鏡(德國徠卡公司，DM1000型)下進(jìn)行觀察，陽性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，出現(xiàn)淺黃色、黃色或棕黃色顆粒時為陽性反應(yīng)，出現(xiàn)陽性反應(yīng)的細(xì)胞即為陽性細(xì)胞。依據(jù)染色深淺與視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占比例評定陽性反應(yīng)的強(qiáng)度。觀察時每張切片選取5個高倍視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，按照觀察視野中陽性細(xì)胞所占的百分比例進(jìn)行評分:≤5%時為0分，5% ～25%為1分，25% ～50%為2分，50% ～75%為3分，＞75%為4分。按照染色強(qiáng)度進(jìn)行評分:0分 為陰性，1分為弱陽性，2分為中等陽性，3分為強(qiáng)陽性。兩者相乘得分≥3分時為陽性表達(dá)，＜3分時為陰性表達(dá)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，各病理特征與臨床預(yù)后的關(guān)系采用Cox回歸分析法，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組CD147表達(dá)情況比較 前列腺癌組CD147表達(dá)陽性率為100．0%(56/56)，明顯高于前列腺增生組的 14．3%(8/56)(χ2=84．000，P ＜0．001)。

2．2 前列腺癌組CD147與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

CD147的表達(dá)與Gleason評分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯關(guān)系(P＜0．05)，與患者的年齡和腫瘤分化程度無關(guān)(P ＞0．05)，見表1。

表1 前列腺癌組患者CD147與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系(n，%)

2．3 前列腺癌患者Cox回歸模型多因素分析 對56例前列腺癌患者進(jìn)行隨訪發(fā)現(xiàn)，1年時存活51例(91．1%)，2年時存活43例(76．8%)。CD147表達(dá)陽性、Gleason評分高是前列腺癌患者的預(yù)后差的危險因素(P＜0．05)，CD147陽性、Gleason評分高的患者，復(fù)發(fā)和死亡的風(fēng)險大。見表2。

表2 Cox回歸模型多因素分析結(jié)果

3 討論

目前惡性腫瘤已成為我國居民首位死亡原因，腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移特性使其成為導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因和腫瘤臨床治療的主要困難。目前惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制及生物學(xué)行為成為生命科學(xué)中的研究熱點(diǎn)［5］。

CD147是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞膜相關(guān)抗原，廣泛表達(dá)于惡性腫瘤細(xì)胞表面［6］。腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，涉及細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解、腫瘤血管的形成等［7］。在這過程中，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的所有成分，在腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用［8］。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的血管生成促進(jìn)因子，已被證實(shí)是腫瘤新生血管生成的主要調(diào)節(jié)因子。VEGF通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂，增加血管通透性等使血管內(nèi)膠質(zhì)外滲，為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長提供必需的基質(zhì)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管形成，為腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移提供條件［9］。有研究證明CD147具有刺激腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞分泌和活化MMPs，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞之間、腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的相互作用;與MMPs在腫瘤細(xì)胞表面形成復(fù)合物，形成腫瘤細(xì)胞－細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶類－基質(zhì)成分構(gòu)成的腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的局部微環(huán)境［10－12］。因此人們廣泛認(rèn)同CD147的表達(dá)與人體某些惡性腫瘤的惡性程度、侵襲能力和轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。

本文結(jié)果顯示，前列腺癌組CD147表達(dá)陽性率為100．0%，明顯高于前列腺增生組的 14．3%(P ＜0．05)。表明前列腺癌組織中CD147表達(dá)率明顯高于前列腺良性增生組織，這與相關(guān)文獻(xiàn)［13］報告一致。本文結(jié)果顯示，CD147的表達(dá)與前列腺癌Gleason評分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P＜0．05)，而與患者的年齡和腫瘤分化程度無關(guān)(P＞0．05)。Cox回歸模型分析結(jié)果顯示，CD147表達(dá)陽性、Gleason評分高是前列腺癌患者的預(yù)后危險因素(P＜0．05)，CD147陽性、Gleason評分高的患者，復(fù)發(fā)和死亡的風(fēng)險大。Gleason評分是由病理科醫(yī)生在顯微鏡下，通過對前列腺癌細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察所建立的病理學(xué)評估方法，其結(jié)果受醫(yī)生的主觀因素影響較大［14］。相對而言，CD147的檢測結(jié)果更為客觀可靠。本組研究結(jié)果表明CD147異常表達(dá)是除Gleason評分外的可用來獨(dú)立判斷前列腺癌進(jìn)展程度的臨床指標(biāo)，其表達(dá)上調(diào)可作為前列腺癌預(yù)后不良的危險信號。

綜上所述，前列腺癌組織CD147的高表達(dá)在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，可作為研究腫瘤發(fā)病機(jī)制、判斷腫瘤進(jìn)展及臨床預(yù)后的有效分子標(biāo)志。

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