唐山地區(qū)漢族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

趙佩，趙紅，曹新營，張文靜， 葛慶鋒，李海濤

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唐山地區(qū)漢族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

趙佩，趙紅，曹新營，張文靜， 葛慶鋒，李海濤

目的探討血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因插入/缺失（insertion/deletion，I/D）多態(tài)性與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┘肮跔顒用}（冠脈）病變支數(shù)間的關(guān)系。方法選取住院患者332例，其籍貫均為河北唐山地區(qū)，行冠脈造影術(shù)檢查判定其是否患有冠心病及其冠脈病變支數(shù)。根據(jù)造影結(jié)果分為冠心病組（至少有一支冠脈主支血管狹窄≥50%）233例（穩(wěn)定型心絞痛亞組150例、急性冠脈綜合征組亞組83例）和對照組99例（任一冠脈主支血管狹窄＜50%）。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測患者ACE基因I/D多態(tài)性，包括II型（插入型純合子）、ID型（插入與缺失型雜合子）、DD型（缺失型純合子）三組，并分析不同組別間I/D多態(tài)性差異。結(jié)果冠心病組及急性冠脈綜合征亞組ACE基因DD型和D等位基因頻率顯著高于對照組（P＜0.05）。穩(wěn)定型心絞痛組與對照組比較DD基因型和D等位基因頻率間并無顯著差異（P＞0.05）。不同冠脈病變支數(shù)在ACE基因型間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論唐山地區(qū)漢族人群ACE基因I/D多態(tài)性中DD型和D等位基因發(fā)生率冠心病及急性冠脈綜合征患者中增高，但與冠脈病變支數(shù)無關(guān)。

冠心??；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶；基因多態(tài)性；唐山地區(qū)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟?，CHD）是威脅人類健康的常見病之一[1]，目前認(rèn)為冠心病是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，但遺傳和環(huán)境因素具體通過哪些途徑最終導(dǎo)致其發(fā)生發(fā)展，至今尚無統(tǒng)一認(rèn)識。研究表明，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）過度激活與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）是RAAS的關(guān)鍵酶，其基因位于染色體17q23，在其16內(nèi)含子因存在或丟失287bp的DNA片段而有插入或缺失多態(tài)性（I/ D），即在人群中存在II型（插入型純合子）、ID型（插入與缺失型雜合子）、DD型（缺失型純合子）三種基因型[2]。近年來，ACE的I/D多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)系已成為人們研究的熱點(diǎn)之一[3]，但相關(guān)研究在不同地區(qū)、種族中結(jié)果亦不

同，不少研究發(fā)現(xiàn)DD基因型及D等位基因與ACE水平有關(guān)并能增加心血管疾病的危險(xiǎn)性[4,5]，但也有學(xué)者研究結(jié)論與上述結(jié)論相悖[6,7]，因此需要在不同地區(qū)及不同種族間開展大規(guī)模前瞻性研究證實(shí)。本研究旨在探討唐山地區(qū)漢族人群中ACE基因多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象入選2012年10月至2013年11月在河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院患者332例，籍貫均為唐山地區(qū)，其中男性191例，女性141例，均行冠狀動脈（冠脈）造影檢查。根據(jù)造影結(jié)果分為冠心病組（至少有一支冠脈主支血管狹窄≥50%，CHD組，n=233）和對照組（任一冠脈主支血管狹窄＜50%，n=99），其中冠心病組患者根據(jù)其臨床疾病特點(diǎn)分為穩(wěn)定型心絞痛（SA，n=150）和急性冠脈綜合征（ACS ，n=83）兩個(gè)亞組。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 嚴(yán)重肝、腎功能不全；②合并有先天性心臟病、陳舊性心肌梗死、心肌病、慢性心力衰竭（NYHA Ⅲ-Ⅳ級）；③嚴(yán)重的急性感染或代謝紊亂?；颊呔炇鹬橥鈺?。

1.2 研究方法

1.2.1 冠脈病變嚴(yán)重程度的判定病變血管與臨近正常血管比較，心外膜血管直徑狹窄≥50%為病變血管，左主干狹窄≥50%計(jì)為兩支血管病變，病變支數(shù)≥2支為多支病變。

1.2.2 血液樣本的采集及ACE基因多態(tài)性的測定空腹12 h后抽取外周靜脈血5 ml，EDTA抗凝，之后放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。以?氯仿法提取基因組DNA，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）擴(kuò)增分析基因片段。引物設(shè)計(jì)與合成參照文獻(xiàn)[8]進(jìn)行設(shè)計(jì), 由生工生物工程股份有限公司合成，其核苷酸序列為: 引物A：5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’；引物B：5’-GATGTG GCCATCACATTCGTCAGAT-3’。PCR反應(yīng)體系：25 ul，反應(yīng)條件：94℃ 5 min，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)（94℃ 45 s，62℃ 45s，72℃ 1 min，72℃ 5 min）。PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外攝影觀察可見ACE基因I/D多態(tài)性的三種類型：II型（插入型純合子，僅含490bp片段），ID型（插入與缺失型雜合子，含490bp、190bp兩種片段），DD型（缺失型純合子，僅含190bp片段），結(jié)果如圖1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各組基因型頻率，確定其是否符合Hardy—Weinberg遺傳平衡。對基因型頻率、等位基因頻率、吸煙、飲酒、高血壓及糖尿病頻數(shù)等計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。兩組間均數(shù)比較用成組t檢驗(yàn)。三組間均數(shù)比較用單因素方差分析。P＜0.05為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 ACE基因型分布與Hardy—Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)研究群體各組ACE基因型分布符合Hardy—Weinberg遺傳平衡，其觀察值與期望值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），提示樣本具有群體代表性（表1）。

2.2 兩組基線臨床指標(biāo)比較CHD組患者中危險(xiǎn)因素如總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、空腹血糖、吸煙比例明顯高于對照組（P＜0.05），高密度脂蛋白明顯低于對照組（P＜0.05）。兩組患者間年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)及飲酒、高血壓、糖尿病比例等指標(biāo)略有差異，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表2）。

2.3 ACE基因多態(tài)性與冠心病危險(xiǎn)因素CHD組患者中的年齡、性別、吸煙比例、飲酒比例、空腹血糖、體質(zhì)指數(shù)、總膽固醇水平、三酰甘油、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平、高血壓例數(shù)及

糖尿病比例等一般資料在ACE三種基因型間差異均無顯著性（P＞0.05）（表3）。

2.4 冠心病及亞組與ACE基因多態(tài)性的關(guān)系CHD組整體及ACS亞組中DD基因型和D等位基因頻率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。SA組與對照組比較DD基因型和D等位基因頻率間無顯著差異（P＞0.05）（表4）。

2.5 ACE基因多態(tài)性與冠狀動脈病變支數(shù)之間的關(guān)系A(chǔ)CE基因DD型頻率在冠脈無病變、單支病變、多支病變組頻率分別為23.9%、18.5%和57.6%。冠脈多支病變組ACE基因DD型較無病變及單支病變組有增高的趨勢, 但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；冠脈病變支數(shù)不同組間ACE基因DD型與非DD型間差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表5）。

3 討論

近年來，國內(nèi)外研究顯示ACE基因的I/D多態(tài)性影響外周血ACE水平[9]，這使ACE基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系成為研究焦點(diǎn)之一。Cambien等[10]研究首先發(fā)現(xiàn)了ACE基因DD基因型與冠心病的發(fā)生有關(guān)。其對610例心肌梗死患者與773例正常對照組進(jìn)行ACE基因多態(tài)性檢測，結(jié)果顯示DD基因型在心肌梗死組頻率明顯高于對照組（P=0.007）。但也有研究結(jié)果與此相反，Agerholm等[11]對47個(gè)大小樣本的研究進(jìn)行了meta分析，并未發(fā)現(xiàn)DD基因型增加心肌梗死（MI）和CHD的危險(xiǎn)性。國內(nèi)對ACE基因多態(tài)性與冠心病研究結(jié)果也存在爭議。本研究冠心病組中傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素在三種基因型間差異無顯著性，而冠心病組DD基因型及D等位基因頻率明顯高于對照組，說明DD型是獨(dú)立于冠心病常規(guī)危險(xiǎn)因子之外的危險(xiǎn)因子。

在國內(nèi)外相關(guān)研究中, 有研究證實(shí)ACE基因DD基因型可增加MI的風(fēng)險(xiǎn)[12,13]。此研究中，ACS組DD基因型及D等位基因顯著高于對照組（P=0.010），而SA組DD基因型及D等位基因頻率雖較對照組有所增高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.051）?？紤]ACS患者冠脈斑塊多為不穩(wěn)定性斑塊，而DD基因型個(gè)體外周血ACE水平偏高，進(jìn)一步導(dǎo)致AngⅡ升高，后者促使血管收縮導(dǎo)致冠脈血管痙攣或直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞合成纖溶酶原激活劑抑制劑-1（PAI-1），從而使斑塊中PAI-1的活性增加，纖溶酶缺乏進(jìn)一步導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定或血栓形成造成ACS等心血管不良事件。然而，上述病理機(jī)制可能與冠狀動脈粥樣硬化之間無密切關(guān)系。因此，ACE基因缺失多態(tài)性可能與ACS發(fā)生相關(guān)，與SA關(guān)系有待進(jìn)一步證實(shí)。

Nakai等[14]研究發(fā)現(xiàn)隨著冠脈病變支數(shù)的增加，ACE的D等位基因頻率顯著增加。國內(nèi)對于ACE基因多態(tài)性與冠脈病變嚴(yán)重程度的研究較少，結(jié)果尚有爭論。本次研究多支冠脈病變組DD型較單支病變組有增高的趨勢, 但差異無顯著性（P＞0.05）。DD型與非DD基因型間冠脈病變

支數(shù)差異也無顯著性（P＞0.05）。這可能是由于冠脈造影直觀下觀察到的管腔狹窄程度，但嚴(yán)重狹窄并不一定是導(dǎo)致心血管事件的必然原因。除了嚴(yán)重狹窄外，斑塊不穩(wěn)定、血栓形成、血管痙攣等同樣促進(jìn)冠心病的發(fā)生。此研究表明，DD基因型可能與血栓因素和（或）血管痙攣因素相關(guān)，而與動脈硬化的危險(xiǎn)因素?zé)o關(guān)。因此冠脈病變支數(shù)不能全面的預(yù)測冠心病臨床事件的發(fā)生及其預(yù)后。

總之，ACE基因的I/D多態(tài)性可能是漢族人群冠心病易感基因之一，它為評價(jià)冠心病危險(xiǎn)因素及識別冠心病的易感人群提供依據(jù)。但ACE基因多態(tài)性與冠心病關(guān)系的研究在不同種族、地區(qū)中結(jié)果不盡相同，因此需在不同地區(qū)及不同種族間開展大規(guī)模前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí)。

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Correlation between gene polymorphism of angiotensin-converting enzyme and coronary heart disease in population of Han nationality in Tangshan region

ZHAO Pei*, ZHAO Hong, CAO Xin-ying, ZHANG Wen-jing, GE Qing-feng, LI Hai-tao.*Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Hebei United University, Tangshan 063000 China.

ObjectiveTo discuss the relationship between gene insertion/deletion (I/D) polymorphism of angiotensin-converting enzyme (ACE) and coronary heart disease (CHD) or number of diseased coronary vessels.MethodsThe in-hospital patients (n=332, all from Tangshan region of Hebei Province) were chosen and given coronary angiography (CAG) for adjusting whether or not they suffered from CHD and number of diseased coronary vessels. According to the outcomes of CAG, the patients were divided into CHD group [at least 1 coronary major branch being stenosis≥50%, n=233, among them 150 were in stable angina pectoris (SAP) subgroup and 83 in acute coronary syndrome (ACS) subgroup] and control group (n=99, anyone coronary major branch being stenosis＜50%). I/D polymorphism of ACE was detected by using polymerase chain reaction (PCR), including type II (type of insertion homozygous), type ID (type of insertion and deletion heterozygous) and type DD (type of deletion homozygous), and the difference in I/D polymorphism were compared among all groups.ResultsThe frequency of type DD and D allele was significantly higher in CHD group and ACS subgroup than that in control group (P＜0.05), and that had no significant difference between SAP subgroup and control group (P＞0.05). The difference in number of diseased coronary vessels had no statistical significance among different ACE gene types (P＞0.05).ConclusionIn population of Han nationality in Tangshan region, type DD and D allele of ACE I/D polymorphism increase in patients with CHD and ACS, which, however, is not correlated to number of diseased coronary vessels.

Coronary heart disease; Angiotensin-converting enzyme; Gene polymorphism; Tangshan region

R541.4

A

1674-4055(2015)02-0221-04

2014-10-20）

（責(zé)任編輯：田國祥）

063000 唐山,河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科

李海濤,E-mail:lihaitaopro@sina.com

10.3969/j.1674-4055.2015.02.20