HSV-2對(duì)血管內(nèi)皮樣細(xì)胞ECV304的致病特性

田麗茹

（黑龍江省杜爾伯特蒙古族自治縣腰新鄉(xiāng)衛(wèi)生院，黑龍江　大慶　166200）

HSV-2對(duì)血管內(nèi)皮樣細(xì)胞ECV304的致病特性

田麗茹

（黑龍江省杜爾伯特蒙古族自治縣腰新鄉(xiāng)衛(wèi)生院，黑龍江大慶166200）

通過(guò)對(duì)單純皰疹病毒2型（HSV-2）進(jìn)行研究，探討其血管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞-ECV304的致病特性，并在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下使得HSV-2對(duì)血管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞ECV304進(jìn)行感染，從而對(duì)其進(jìn)行細(xì)致的觀察。通過(guò)觀察可知，在HSV-2感染管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞ECV304一天時(shí)間內(nèi)，能夠檢查到潛伏的有關(guān)轉(zhuǎn)錄體基因發(fā)生感染現(xiàn)象。在經(jīng)歷感染后的第二天時(shí)間，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開始出現(xiàn)病變現(xiàn)象，可以得出，HSV-2對(duì)血管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞ECV304具有較強(qiáng)的感染性，從而對(duì)ECV304產(chǎn)生破壞作用

HSV-2；血管內(nèi)皮樣細(xì)胞ECV304；細(xì)胞；病變

HSV-2屬于α皰疹病毒類型，大部分在新生兒感染和外生殖器的感染中出現(xiàn)［1］。通過(guò)最近幾年研究發(fā)現(xiàn)其和宮頸癌的發(fā)生有著較多的聯(lián)系。而血管內(nèi)皮樣細(xì)胞ECV304屬于具有較強(qiáng)增殖活性的一種細(xì)胞，和腫瘤等相關(guān)病癥有著一定的相似性，所以通過(guò)使HSV-2對(duì)ECV304進(jìn)行感染，從而可以研究HSV-2在人體內(nèi)引發(fā)細(xì)胞感染的因素，為未來(lái)的實(shí)際治療工作做好鋪墊。

1　材料與方法

1.1病毒、細(xì)胞與相關(guān)使用試劑

廣東第一醫(yī)院提供了HSV-2，而西南醫(yī)院腎內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室則提供了血管內(nèi)皮樣細(xì)胞ECV304。通過(guò)杭州的相關(guān)生物制品公司購(gòu)買了胎牛血清，通過(guò)武漢博士德生物有限公司購(gòu)買了羊抗鼠二抗等相關(guān)試驗(yàn)必備用品。

1.2對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)和病毒接種工作

把HSV-2病毒接種到Vero的細(xì)胞里，在經(jīng)過(guò)6天后對(duì)其進(jìn)行滴度測(cè)試。將ECV304按照正常的培養(yǎng)方式進(jìn)行培養(yǎng)，并將其接種到胎牛血清的MEM生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中，等到實(shí)際成熟時(shí)，將HSV-2在36℃的環(huán)境下安放1 h，在放入牛血清培養(yǎng)基中急性培養(yǎng)，并且從第二天開始每隔1天進(jìn)行1次細(xì)胞對(duì)照試驗(yàn)，這個(gè)過(guò)程可以利用高倍顯微鏡和高清數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍攝［2］。

1.3LAT基因蛋白的檢查工作

通過(guò)運(yùn)用間接免疫熒光法對(duì)LAT蛋白進(jìn)行檢測(cè)。具體而言，在六個(gè)孔板內(nèi)插入ECV304的細(xì)胞蓋玻片，在進(jìn)行感染試驗(yàn)的1 h后，將2%多聚甲醛同0.1%的X-100的溫度穩(wěn)定30 min，并用1/5的養(yǎng)血清進(jìn)行PBS稀釋，20 min稀釋3次，再通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行觀察

1.4HSV-2對(duì)ECV304生長(zhǎng)的影響

運(yùn)用MTT對(duì)HSV-2對(duì)ECV304生長(zhǎng)的影響進(jìn)行測(cè)量，當(dāng)細(xì)胞形成單層的時(shí)候，就將病毒放入懸液中放在36℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并用具有PBS的洗液洗滌2次，后去除舊液，進(jìn)行搖晃，并且用EL340酶聯(lián)免疫儀測(cè)量每孔的OD數(shù)值，測(cè)量16次，運(yùn)用相關(guān)軟件，進(jìn)行測(cè)驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

2.1對(duì)GADPH和LAT基因的相關(guān)測(cè)試

運(yùn)用RT-PCR擴(kuò)增GADPH和LAT基因進(jìn)行測(cè)試，從而可知，當(dāng)感染體感染后，會(huì)增加約148 bp的特異性條帶，而且呈陰性。而受感染的血管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞ECV304則增加約485 bp。

2.2經(jīng)受HSV-2感染的ECV304觀測(cè)

當(dāng)ECV304受到HSV-2感染后，相關(guān)細(xì)胞逐漸發(fā)生病變反應(yīng)，具體說(shuō)來(lái)就是細(xì)胞會(huì)逐漸擴(kuò)增，并且發(fā)生核膜位移變化，而接種兩天后，其感染加劇，細(xì)胞核破裂，在第四天后，發(fā)生細(xì)胞脫落現(xiàn)象，多核細(xì)胞破裂。

2.3電鏡下感染的ECV304形態(tài)

通過(guò)電鏡對(duì)受到HSV-2感染的ECV304進(jìn)行觀察可以發(fā)現(xiàn)，開始階段對(duì)比細(xì)胞核正常，并且細(xì)胞的膜和核膜都是具有整體性，核仁較為清晰，染色質(zhì)無(wú)異常現(xiàn)象；而在ECV304感染半天后，ECV304細(xì)胞開始逐漸發(fā)生變化，細(xì)胞之間開始互相融合，并且可以發(fā)現(xiàn)較為顯著的空泡現(xiàn)象，期內(nèi)有一些沒(méi)有成熟的病毒分子；在ECV304感染一天后，可以發(fā)現(xiàn)多核巨細(xì)胞，并且對(duì)照組的線粒體結(jié)構(gòu)較為明顯，受到感染的細(xì)胞體出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象、自噬化現(xiàn)象［3］。

3　結(jié) 論

在臨床醫(yī)學(xué)中，宮頸癌、動(dòng)脈硬化是較為常見(jiàn)的疾病，雖然我國(guó)目前醫(yī)學(xué)水平已經(jīng)取得了極大的進(jìn)步，但是對(duì)于這些疾病的病因還不了解。血清流行病相關(guān)專家通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)HSV-2和宮頸癌、動(dòng)脈硬化有著較為密切的關(guān)系，在本文的試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)受感染的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試，可以發(fā)現(xiàn)ESC-2缺失可以使得ECV304受到感染，而且可以存活和繁衍，使受到感染的細(xì)胞感染程度加劇，在宿主體內(nèi)逐漸變多，從而影響宿主的生命健康［4］。

通過(guò)具體的試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血管內(nèi)部的皮樣細(xì)胞ECV304受到HSV-2感染后，會(huì)使得ECV304受到改變，通過(guò)改變可以使得次集體逐漸產(chǎn)生抗體，而抗體則可以和皮內(nèi)細(xì)胞的抗原互相結(jié)合，從而使補(bǔ)體激活，進(jìn)而使得皮內(nèi)細(xì)胞受損。而對(duì)病毒的增殖曲線進(jìn)行研究可以發(fā)現(xiàn)由于HSV-2的自我繁殖，使得具有感染性病毒的顆粒出現(xiàn)，它的出現(xiàn)既可以讓血管局部區(qū)域得到病毒滴度上升，從而為病毒進(jìn)入周圍的實(shí)質(zhì)細(xì)胞提供便利，也可以讓ECV304的新陳代謝功能產(chǎn)生變異。

在這次試驗(yàn)中通過(guò)對(duì)受到感染后的ECV304進(jìn)行研究，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的具體變化程度，這表明HSV-2對(duì)于ECV304具有較為直接的影響，HSV-2作為重要的感染因素，一旦進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞外貌的改變，從而引發(fā)人體內(nèi)的免疫功能，導(dǎo)致新陳代謝混亂的現(xiàn)象［5］。這些年的研究可以表明HSV-2和很多疾病的發(fā)生有關(guān)，已經(jīng)嚴(yán)重的影響了人們生活健康，在本次試驗(yàn)中研究了HSV-2對(duì)于感染細(xì)胞具體的形態(tài)變化，為今后研究克制HSV-2的工作提供了相關(guān)的理論依據(jù)。

［1］ 徐 放，遇廣輝，王 普，等.抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶融合蛋白的制備［J］.浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42（1）：45-49.

［2］ 李成德，李 玲，歐麗紅，等.宮頸病灶HSV-2感染及其與宮頸癌的關(guān)聯(lián)性［J］.海南醫(yī)學(xué)，2014，（16）：2395-2397，2398.

［3］ 郭立方，王 榮，賈正平，等.氨甲喋呤對(duì)映體對(duì)ECV304細(xì)胞抑制作用及其機(jī)制［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010，26（2）：213-216.

［4］ 陳小義，徐忠偉，王 娜，等.哇巴因?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞ECV304細(xì)胞凋亡及胞內(nèi)游離鈣離子和活性氧濃度的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2010，24（4）：241-248.

［5］ 劉 寧，薛耀明，朱 波，等.低濃度葡萄糖誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞損傷機(jī)制的初探［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（10）：2314-2317.

本文編輯：楊 志

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ISSN.2095-6681.2015.020.004.02