小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收特征分析

陳琳　王京霞　高瑞蘭

小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收特征分析

陳琳王京霞高瑞蘭

目的 分析小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收動(dòng)力學(xué)特征，并優(yōu)選出最佳透皮促進(jìn)劑。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定小兒止瀉巴布劑不同時(shí)間點(diǎn)接收液中葛根素的濃度，采用Franz擴(kuò)散池和大鼠腹部皮膚進(jìn)行體外透皮擴(kuò)散試驗(yàn)分析葛根素累積釋放量與釋放時(shí)間的關(guān)系，找出符合小兒止瀉巴布劑透皮吸收的最佳動(dòng)力學(xué)擬合方程。并且考察氮酮、冰片及其復(fù)合促滲劑對(duì)葛根素的體外透皮吸收的影響，以葛根素的滲透系數(shù)為判斷標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選出最佳透皮促進(jìn)劑。結(jié)果 葛根素的單位面積累積滲透量（Q）與時(shí)間t1/2呈線性關(guān)系。單獨(dú)加入4%冰片使葛根素的滲透系數(shù)增加1.61倍，單獨(dú)加入4%氮酮使葛根素的滲透系數(shù)增加2.10倍，2%氮酮與2%冰片聯(lián)合使用使葛根素的滲透系數(shù)增加1.68倍。結(jié)論 小兒止瀉巴布劑的透皮吸收動(dòng)力學(xué)符合Higuchi方程，氮酮為最佳透皮促進(jìn)劑。

小兒止瀉巴布劑 透皮吸收 葛根素 氮酮

小兒止瀉巴布劑是一種用于治療小兒腹瀉的中藥外用復(fù)方制劑，對(duì)治療小兒非感染性腹瀉及小兒感染性腹瀉均具有一定的療效。該巴布劑是基于經(jīng)典方藥七味白術(shù)散的基礎(chǔ)上研制而成，具有健脾除濕、扶正驅(qū)邪等功效。巴布劑作為一種經(jīng)皮給藥新劑型，可以增強(qiáng)患兒的依從性、確保藥物的療效，為治療小兒腹瀉提供一種安全可靠、質(zhì)量可控的新制劑。作者以小兒止瀉巴布劑中葛根素的單位面積累積滲透量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用Franz擴(kuò)散池和大鼠腹部皮膚進(jìn)行體外透皮擴(kuò)散試驗(yàn)分析葛根素累積釋放量與釋放時(shí)間的關(guān)系，找出符合小兒止瀉巴布劑透皮吸收的最佳動(dòng)力學(xué)擬合方程，并且考察氮酮、冰片及其復(fù)合促滲劑對(duì)葛根素的體外透皮吸收的影響，以葛根素的滲透系數(shù)為判斷標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選出最佳透皮促進(jìn)劑。

1　材料與方法

1.1試劑與儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀；JJ200型電子天平（常熟市雙杰測(cè)試有限公司）；真空干燥箱DZF-6050型（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TK-12D型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀（上海楷凱科技貿(mào)易有限公司）；KQ3200型水洗超聲儀（上海昆山）；葛根素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定研究院）；SD大鼠雌雄不限，購(gòu)自浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2透皮吸收試驗(yàn) （1）巴布劑樣品的制備：分別制備4種巴布劑樣品：不含氮酮和冰片的巴布劑、含4%氮酮（AZ）的巴布劑、4%冰片（BO）的巴布劑、含2%氮酮（AZ）+2%冰片（BO）的巴布劑［1，2］。（2）體外鼠皮的制備：將健康大鼠用電動(dòng)剃毛刀剃毛后處死，取腹部皮膚，剝離，剃毛皮膚，小心剔除皮下組織和脂肪等粘連物質(zhì)，用無(wú)菌生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，置于無(wú)菌生理鹽水中，密封、置低溫冰箱中保存。試驗(yàn)前自然恢復(fù)至室溫，并檢查鼠皮的完整性。（3）透皮吸收實(shí)驗(yàn)：將大鼠皮于37℃、無(wú)菌生理鹽水中解凍后剪成大小適宜的4塊，將4種小兒止瀉巴布劑貼于鼠皮上，與皮膚角質(zhì)層一側(cè)緊密接觸，不留空氣，分別固定在4套透皮吸收實(shí)驗(yàn)裝置的擴(kuò)散室與接收室之間（透過(guò)面積2.30cm2，接收液體積為6.5cm3），在接收室中注入30%乙醇-生理鹽水，記錄加入的液量，溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速150r/min恒速攪拌，記錄裝入時(shí)間，在2、4、6、8、10、24 h時(shí)精密取出接受液5 ml，同時(shí)補(bǔ)加30%乙醇-生理鹽水并排凈氣泡。取出的接收液經(jīng)微孔濾膜（孔徑0.22m）過(guò)濾后，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，按已確定的色譜條件進(jìn)樣5μl，測(cè)定葛根素的含量，并計(jì)算累積滲透量。

1.3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5m）；流動(dòng)相：甲醇-水 （27：73）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；柱溫25℃。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)≥4000；分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各5μl注入液相色譜儀。結(jié)果表明，葛根素峰與其他峰分離完全。

1.4方法學(xué)考察 （1）線性關(guān)系考察：精密稱取葛根素對(duì)照品21.2mg，置50ml量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，制成濃度為0.424mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密稱取一定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，得濃度為84.8、127.2、169.6、212.0、254.4、296.8μg/ml的系列溶液，分別取5μl進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得葛根素回歸方程y=21.192x-51.944，相關(guān)系數(shù)r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在0.424～1.484mg之間呈良好的線性關(guān)系。（2）精密度試驗(yàn)：精密吸取濃度為0.212mg/ml的葛根素對(duì)照品溶液5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積 計(jì)算得平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.15%（n=5），表明該方法精密度良好。（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。經(jīng)計(jì)算葛根素峰面積值的RSD為3.82%（n=5）。結(jié)果表明葛根素在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。（4）加樣回收率試驗(yàn)：精密量取已知含量的接受液5 ml，共6份，各精密加入一定量的葛根素對(duì)照品溶液，用0.22m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為待測(cè)溶液，測(cè)定并計(jì)算回收率，平均回收率為98.61%，RSD為2.05%（n=6）。結(jié)果表明，該方法回收率良好。

1.5數(shù)據(jù)處理方法 按公式Q=（Cn×V1+∑Ci×V2）/S……（i=1…n-1）計(jì)算單位面積累積滲透量［Q，（mg/ cm2）］。式中，Cn：第n個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)得的藥物質(zhì)量濃度（mg/ml）；Ci：第i（i=n-1）個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)得的藥物質(zhì)量濃度（mg/ml）；V1：接收液體積（6.5cm3）；V2：取樣體積（5.0cm3）；S：有效透皮面積（2.30cm2）。對(duì)4種小兒止瀉巴布劑以單位面積累計(jì)釋放量（Q）對(duì)t1/2作圖，進(jìn)行回歸，該直線的斜率為滲透系數(shù)［Kp，mg/（cm2?h1/2）］。

2　結(jié)果

按上述測(cè)定方法，測(cè)定4種小兒止瀉巴布劑中葛根素的透皮釋放量，以Q對(duì)t1/2作圖，進(jìn)行回歸，得出擬合方程及相關(guān)系數(shù)，并計(jì)算出滲透系數(shù)。結(jié)果顯示：葛根素的Q與時(shí)間t1/2呈線性關(guān)系。4%氮酮的滲透系數(shù)為不含滲透促進(jìn)劑的2.1046倍；4%冰片的滲透系數(shù)為不含滲透促進(jìn)劑的1.6117倍； 2%氮酮+2%冰片滲透系數(shù)為不含滲透促進(jìn)劑的1.6788倍。實(shí)驗(yàn)表明：小兒止瀉巴布劑的經(jīng)皮滲透符合Higuchi方程，4%氮酮對(duì)小兒止瀉巴布劑中的葛根素有較好的促滲透作用，氮酮是小兒止瀉巴布劑的最佳透皮促進(jìn)劑。

3　討論

體外透皮吸收試驗(yàn)中接收介質(zhì)的選擇：分別以生理鹽水、30%乙醇-生理鹽水溶液及pH為 7.4的磷酸鹽緩沖液［3～5］為接收介質(zhì)，考察小兒止瀉巴布劑中葛根素經(jīng)過(guò)大鼠腹部離體皮膚在不同接收介質(zhì)中透皮滲透情況。結(jié)果顯示，pH 7.4磷酸鹽緩沖液組中體外透皮滲透量在0～24 h均未檢測(cè)到葛根素，說(shuō)明pH 7.4磷酸鹽緩沖液不宜作為小兒止瀉巴布劑中葛根素的透皮吸收試驗(yàn)接收介質(zhì)。而30%乙醇-生理鹽水溶液與生理鹽水溶液相比，葛根素在30%乙醇-生理鹽水溶液中體外透皮滲透量有顯著性增加（P＜0.01）。因此本實(shí)驗(yàn)選擇30%乙醇-生理鹽水溶液作為接收介質(zhì)。同時(shí)對(duì)攪拌速度和水浴溫度進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)磁力攪拌速度為150 r/min，水浴恒溫至（37±0.5）℃時(shí)即可滿足要求。

藥物透皮吸收的動(dòng)力學(xué)擬合模型的選擇：藥物經(jīng)皮滲透是符合菲克擴(kuò)散定律的被動(dòng)擴(kuò)散過(guò)程，以濃度差為滲透原動(dòng)力，本試驗(yàn)分別采用Ⅰ級(jí)、○級(jí)、Higuchi方程進(jìn)行擬合［6，7］，以相關(guān)系數(shù)r作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，葛根素的相關(guān)系數(shù)（r）大小順序?yàn)椋篐iguchi方程擬合＞一級(jí)方程擬合＞○級(jí)方程擬合。葛根素的Q與時(shí)間t1/2呈線性關(guān)系，小兒止瀉巴布劑的透皮吸收動(dòng)力學(xué)符合Higuchi方程，含4%氮酮小兒止瀉巴布劑的滲透系數(shù)為0.6781 mg/（cm2?h1/2）。

巴布劑中的透皮促進(jìn)劑的選擇：本試驗(yàn)以葛根素的滲透系數(shù)為判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果表明氮酮對(duì)小兒止瀉巴布劑中的葛根素有較好的促滲透作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，氮酮對(duì)親水、親油性藥物均可增加其透皮吸收，尤其對(duì)親水性化合物的促滲透效果更佳。其機(jī)制是通過(guò)溶解角質(zhì)細(xì)胞間和細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)，增加角質(zhì)層的通透性，減少藥物擴(kuò)散阻力，同時(shí)角質(zhì)層的含水量也會(huì)提高，促進(jìn)藥物經(jīng)水性通道滲透［8］。

1趙桂福，李雁.中藥透皮吸收促進(jìn)劑的研究進(jìn)展.上海中醫(yī)藥雜志，2009，43（9）：82.

2李智勇，羅霄山，孫冬梅，等.痹痛巴布劑中多元復(fù)合透皮吸收促進(jìn)劑的優(yōu)選. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，19（10）：42～45.

3郭偉英，王雨.葛根芩連巴布劑的制備與體外透皮研究.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009， 28（3）： 351～353.

4秦海軍，馬玲，張毅，等.透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)小兒腹瀉凝膠膏經(jīng)皮滲透性的影響.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（3）：39～41.

5王霞，吳勝林，曾凡波，等.布洛芬巴布劑的制備與體外釋放研究.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（10）：1345～1346.

6Figen Timaksiz，Zeynep Yuce.Development of transdermal system containing nicotine by using sustained release dosage design.Farmaco，2005， 60（9）：763.

7Dam Fitzpatrick，John Corish.Release characteristics of anionic drug compounds from liquid crystalline gels.Passive release across non-ratelimiting membranes.Inter J Pharm， 2005，301（1～2）：226.

8Williams A C，Barry B W.Penetration enhancers.Adv Drug Deliv Rev，2004，56（5）：603～618.

310006 浙江省中醫(yī)院