超高效合相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)合維生素片中11種脂溶性維生素及其衍生物

周圍+王波+劉倩倩+楊盛鑫+王麗婷

摘 要 建立了超高效合相色譜法（Ultra performance convergence chromatography，UPC2）分離和測(cè)定復(fù)合維生素片中11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的方法。超高效合相色譜（UPC2）技術(shù)集合超臨界流體色譜（Supercritical fluid chromatography，SFC）和超高效液相色譜（Ultra performance liquid chromatography，UPLCTM）的技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，流動(dòng)相以CO2為主體，乙腈為助溶劑梯度洗脫。選用Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB色譜柱（100 mm × 3.0 mm 1.8 μm），流速1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。方法檢出限在1.5～2.0 mg/L之間;VK1， VK2， VK3和VD3的線性范圍分別為3～300 mg/L; VA、VA棕櫚酸酯、VA甲酸、VE、VE醋酸酯、VE琥珀酸酯和VD2的線性范圍分別為5～300 mg/L;加標(biāo)回收率范圍為97.31%～98.76%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%～0.96%，可以滿足復(fù)合維生素片中11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的方法要求。

關(guān)鍵詞 超高效合相色譜; 脂溶性維生素; 復(fù)合維生素片

1 引 言

脂溶性維生素包括維生素A， D， E， K及其衍生物，是維持機(jī)體正常生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝和機(jī)體生理功能所必需的物質(zhì)。維生素A又稱為視黃醇，只存在動(dòng)物性食品中，具有維持視覺、生殖、細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育等生理功能^[1];維生素E又稱為生育酚，具有抗氧化、抗衰老、保護(hù)血管、促進(jìn)生育的作用^[2];維生素D為固醇類衍生物，能夠促進(jìn)鈣在骨骼沉積，具抗佝僂病作用^[3];維生素K又稱抗出血維生素、凝血維生素，具有止血的作用^[4]。如果缺乏或者攝入過量，就會(huì)引起代謝失衡，嚴(yán)重時(shí)會(huì)產(chǎn)生缺乏癥疾病，甚至致人死亡^[5]。但是脂溶性維生素在結(jié)構(gòu)上極不穩(wěn)定，在光照、氧氣、高溫及極端pH的條件下極易被氧化破壞^[6]，因此維生素A， E， D和K的同時(shí)測(cè)定目前仍然是檢驗(yàn)技術(shù)的難點(diǎn)。

脂溶性維生素的有關(guān)測(cè)定方法主要有比色法^[7]、熒光法^[8]、分光光度法^[9]、電化學(xué)法^[10]、氣相色譜法^[11]、免疫分析法^[12]、高效液相色譜法^[13，14]。目前的國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)方法也僅限于對(duì)這4種維生素進(jìn)行分別測(cè)定，這些方法的特異性不強(qiáng)，有時(shí)樣品還要采用復(fù)雜的化學(xué)、物理或生物前處理，步驟繁雜、費(fèi)時(shí)，而且干擾物質(zhì)較多、要接觸較多對(duì)人體有害的有機(jī)溶劑，容易造成維生素被破壞， 導(dǎo)致回收率下降，使測(cè)定結(jié)果偏低，不能用于多種物質(zhì)的同時(shí)測(cè)定。有關(guān)同時(shí)測(cè)定多種脂溶性維生素的方法的文獻(xiàn)很少，僅見于少數(shù)幾篇液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法[15～17]。超高效合相色譜法（Ultra performance convergence chromatography，UPC2）除了具有傳統(tǒng)超高效液相色譜的優(yōu)點(diǎn)外，還可與超臨界流體色譜技術(shù)結(jié)合，以超臨界流體CO2為流動(dòng)相主體，依靠流動(dòng)相的溶劑化能力進(jìn)行分離、分析的色譜過程^[18，19]。加之超細(xì)（2 μm）填料技術(shù)，能夠通過精確調(diào)節(jié)流動(dòng)相強(qiáng)度、壓力和溫度，獲得所需的系統(tǒng)分辨率和選擇性，對(duì)待測(cè)物的保留和分離進(jìn)行有效調(diào)控，具有操作溫度低、有機(jī)溶劑使用量少、靈敏度高、重現(xiàn)性好、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)[20～22]。本研究采用超高效合相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)合維生素片中的11種脂溶性維生素，在12 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的分離。實(shí)驗(yàn)表明，本方法快速、準(zhǔn)確、樣品預(yù)處理簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復(fù)性好、回收率較高、實(shí)用性強(qiáng)，為維生素定性與定量檢測(cè)提供了一種高效可行的色譜檢測(cè)方法。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

超高效合相色譜儀（美國(guó)Waters公司），配有Waters EmpowerTM 3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);3K30冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）;MS3渦旋儀（德國(guó)IKA公司）;移液槍（美國(guó)Thermo Electron公司，100～1000 μL、20～100 μL）。

維生素K1（純度98.5%）、維生素K2（純度99.5%）、維生素K3（純度99.5%）、維生素A（純度98.5%）、維生素A棕櫚酸酯（純度98%）、維生素A甲酸（純度99%）、維生素E（純度98.3%）、維生素E醋酸酯（純度98.5%）、維生素E琥珀酸酯（純度97.5%）、維生素D2（純度98%）、維生素D3（純度99.5%），德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司;CO2（純度99.997%，蘭州匯能公司）;甲醇、乙腈、異丙醇、正己烷（色譜純， 德國(guó)Merck KGaA公司）;石油醚（分析純，天津登峰公司）;蒸餾水;復(fù)合維生素（美國(guó)安利紐崔萊公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精確稱取每種維生素各0.030 g，用正己烷-異丙醇（8∶2， V/V）溶液溶解并定容至100 mL，配制成300 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃下冷藏待用（4 h后重新配制）。endprint

標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移1000， 834， 500， 250， 100和25 μL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別稀釋為300， 250， 150， 75， 30， 7.5， 5.0， 1.0， 0.5和0.3 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，4℃下冷藏待用（4 h后重新配制） 。

2.3 超高效合相色譜條件

Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB色譜柱：（100 mm×3.0 mm， 1.8 μm），流動(dòng)相：A為CO2， B為乙腈;梯度洗脫： 0～3 min， 95% A; 3～7 min， 85% A; 7～10 min， 60% A; 10～10.2 min， 60%～95% A; 10.2～12 min， 95% A。流速1 mL/min;進(jìn)樣量 1 μL;柱溫50 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm;動(dòng)態(tài)背壓（ABPR）： 1900 psi。

2.4 樣品處理

復(fù)合維生素片劑：準(zhǔn)確稱取2.0 g研磨后的復(fù)合維生素片，于15 mL聚乙烯管中，加入10 mL異丙醇-正己烷（1∶1， V/V）溶液，用渦旋振蕩器振搖10 min充分混勻后，高速冷凍離心機(jī)于4 ℃下以13000 r/min離心10 min， 取1 mL上清液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，直接進(jìn)樣分離分析。

復(fù)合維生素膠囊：準(zhǔn)確稱取復(fù)合維生素膠囊內(nèi)的油狀液體1.0 g于15 mL聚乙烯管中，加入10 mL異丙醇-正己烷（1∶1， V/V）溶液，用渦旋振蕩器振搖10 min充分混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，直接進(jìn)樣分離分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

使用HSS C18 SB柱時(shí)，在2.3節(jié)的色譜條件下分析濃度為75 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（圖1）。

3.2 色譜分離條件的優(yōu)化

3.2.1 色譜柱的選擇 為了使11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到分離，并具有良好峰形，比較了Waters Acquity UPC2 BEH 2-EP （150 mm×2.1 mm i.d.， 1.7 μm）和Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB（100 mm×3.0 mm i.d.， 1.8 μm）這兩種色譜柱對(duì)11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物分離的影響。

使用BEH 2-EP柱（圖2）時(shí)，11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物出峰不完全，其中VE琥珀酸酯、VE醋酸酯未出峰，而且VK1、VK2與VA棕櫚酸酯出峰完全重疊，VD2和VD3色譜峰粘連在一起，分離效果不理想;當(dāng)使用HSS C18 SB柱（圖1）時(shí)，11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物在8 min內(nèi)出峰完全，且峰形尖銳，相互之間無影響。因此，選擇Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB色譜柱進(jìn)行分離。

3.2.2 流速的選擇

超臨界CO2作為流動(dòng)相時(shí)，由于其黏度低，擴(kuò)散系數(shù)高，使它在分離過程中具有較高的線速度，流速越大，被分離物質(zhì)出峰時(shí)間越快，峰型尖銳，靈敏度增加，較小的流速會(huì)造成分析時(shí)間過長(zhǎng)，峰展寬較大，影響靈敏度，故本實(shí)驗(yàn)通過使用超高效合相色譜，對(duì)亞2 μm填料的色譜柱的流速在0.6～1.2 mL/min 范圍內(nèi)進(jìn)行優(yōu)化。當(dāng)流速為1.2 mL/min時(shí)，VE醋酸酯、VK1、VK2、VD2及VD3會(huì)因?yàn)榱魉龠^快而無法分離，或達(dá)不到分離要求;當(dāng)流速為0.6 mL/min時(shí)，分離時(shí)間長(zhǎng)達(dá)15 min，不能做到快速、高通量分析。為了保證較好的靈敏度、色譜柱壓力以及盡可能與雜質(zhì)分離，本實(shí)驗(yàn)最佳流速選擇為1 mL/min。

3.2.3 助溶劑的選擇

由于UPC2的流動(dòng)相主要是CO2超臨界流體，助溶劑的選擇對(duì)于目標(biāo)化合物的峰形及保留時(shí)間起著至關(guān)重要的作用，為了調(diào)整流動(dòng)相對(duì)不同目標(biāo)化合物的不同溶解性，通常加入甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇、乙酸乙酯等助溶劑，有效改變目標(biāo)化合物的峰形及保留時(shí)間。本試驗(yàn)分別選用了甲醇、乙醇和乙腈3種常用的不同極性的助溶劑，對(duì)相同濃度的11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物進(jìn)行分離。結(jié)果表明，隨著助溶劑極性的增加，流動(dòng)相的溶解能力也相應(yīng)得到增強(qiáng)，使得11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的出峰時(shí)間提前。在使用甲醇為助溶劑時(shí)，由于甲醇較大的極性使得部分維生素（如維生素K1、維生素A甲酸）在流動(dòng)相中的溶解能力降低而出現(xiàn)色譜峰分叉;使用極性較弱的乙醇作為助溶劑時(shí)，部分維生素（如VK1和VK2、VD2和VD3）不能很好地分離，且由于流動(dòng)相的溶解能力使VA甲酸峰分叉。當(dāng)選用助溶劑為乙腈時(shí)，11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到較好的分離，并具有較好的峰型，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈為助溶劑。

3.2.4 動(dòng)態(tài)背壓（ABPR）的選擇

超高效合相色譜中，動(dòng)態(tài)背壓（ABPR）是影響分離過程的重要因素之一。它主要作用是控制CO2在整個(gè)操作過程中的超臨界流體狀態(tài)。不同的動(dòng)態(tài)背壓下，CO2超臨界流體對(duì)各種樣品有著不同的溶解能力。當(dāng)背壓升高時(shí)，超臨界流體密度會(huì)增大，溶劑化能力增強(qiáng)，柱壓升高，分析物保留時(shí)間提前。本實(shí)驗(yàn)考察了背壓在1800～2200 psi范圍內(nèi)CO2超臨界流體對(duì)樣品分離度的影響。結(jié)果表明，隨著背壓的增加，CO2超臨界流體密度、黏度隨之增加，柱壓升高，當(dāng)背壓為2200 psi時(shí)，VE醋酸酯、VK1、VK2、VD2以及VD3分離度達(dá)不到分離要求。當(dāng)背壓為1800 psi時(shí)，因?yàn)镃O2超臨界流體溶劑化能力的降低，使得VD2和VD3色譜峰分叉，分析時(shí)間增加。通過對(duì)樣品基質(zhì)、保留時(shí)間、峰形及色譜柱壓力的綜合考慮，當(dāng)背壓為1900 psi時(shí)，11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物相互之間分離情況最好，保留時(shí)間較短、峰形對(duì)稱，故本實(shí)驗(yàn)選擇動(dòng)態(tài)背壓為1900 psi。endprint

3.2.5 色譜柱溫度的選擇 溫度對(duì)CO2超臨界流體影響也較大，一般在30～50℃之間進(jìn)行選擇。隨著溫度升高，超臨界流體的黏度降低，溶劑化能力減小，出峰時(shí)間延長(zhǎng)。隨著溫度降低，超臨界流體黏度增加，溶劑化能力增強(qiáng)，出峰時(shí)間縮短;為了使樣品中11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物得到較好的分離，本實(shí)驗(yàn)在保持其它色譜條件不變的前提下，在30～50℃ 范圍內(nèi)考察了柱溫對(duì)目標(biāo)物分離的影響。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的保留時(shí)間逐漸增加，當(dāng)溫度為30 ℃時(shí)，雖然目標(biāo)物均得到分離，但是柱壓較高且重現(xiàn)性較差。當(dāng)溫度為50 ℃時(shí)，保證了脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物在分析過程中相互之間不干擾，并且具有較好的重現(xiàn)性。故本實(shí)驗(yàn)最佳分離溫度選擇50 ℃。

3.3 方法學(xué)考察

3.3.1 線性范圍和靈敏度 將11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物系列標(biāo)準(zhǔn)工作液按2.3節(jié)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，繪制樣品濃度（x，mg/L）與峰面積（y）標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸分析，且當(dāng)信噪比為3（S/N=3）時(shí)，方法對(duì)11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的檢出限（LOD）分析結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，本方法在表1所列的線性范圍內(nèi)，線性良好。

3.3.2 樣品加標(biāo)回收率和精密度 在空白樣品中添加5， 10和50 mg/L的維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混合，放置20 min，按2.4節(jié)進(jìn)行前處理操作后，按2.3節(jié)進(jìn)樣測(cè)定，以濃度值計(jì)算加標(biāo)回收率。為得到11種脂溶性維生素（A， D， E， K）及其衍生物的精密度，對(duì)每一添加濃度樣品重復(fù)測(cè)定8次。各維生素的加標(biāo)回收率在97.31%～98.76%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏（RSD）為0.41%～0.96%。方法的回收率和重現(xiàn)性均較好。

3.3.3 實(shí)際樣品測(cè)定 在上述優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)維生素含量進(jìn)行了分析，采用與標(biāo)準(zhǔn)保留時(shí)間相對(duì)照，外標(biāo)法定量的方法測(cè)得兩種復(fù)合維生素片（膠囊）中維生素的色譜圖（圖3），分析結(jié)果見表2。在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定條件下樣品及標(biāo)樣均能得到較好分離。

行檢測(cè)，前處理過程簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，結(jié)果可靠，有效避免脂溶性維生素在長(zhǎng)時(shí)間、復(fù)雜、繁瑣的前處理及檢測(cè)過程中的損失，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)過程誤差較大的弊端，提高了脂溶性維檢測(cè)的準(zhǔn)確性。由于流動(dòng)相為CO2超臨界流體，對(duì)環(huán)境污染小，運(yùn)行成本低。本方法為多種脂溶性維生素在食品中的同時(shí)檢測(cè)分析提供了技術(shù)支持。超高效合相色譜（UPC2）將為未來的色譜分析提供新的方向。

References

1

Villamor E， Fawzi W W. Clin. Microbiol. Rev.， 2005， 18（4）： 446-464

2 ZHANG Xiao-Lei. Central South University of Forestry and Technology， ?2012： ?3-4

張曉雷. 中南林業(yè)科技大學(xué)， 2012： ?3-4

3 HUANG Fang， WU Hui-Qin， HANG Yi-Ping. Physical Testing and Chemical Analysis Part B： Chemical Analgsis， ?2011， ?47（5）： 577-579

黃 芳， 吳惠勤， 杭義萍. ?理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)， ?2011， ?47（5）： 577-579

4 Ahmed S， Kishikawa N， Nakashima K， Kuroda N. Anal. Chim. Acta， ?2007， ?591（2）： 148-154

5 HUANG Cheng， LIN Sheng-Jun. Life Science Instruments， ?2012， ?10（4）： 3-5

黃 誠(chéng)， 林勝軍. ?生命科學(xué)儀器， ?2012， ?10（4）： 3-5

6 CHENG Wan-Qin， WANG Jin， HUANG Li-Ying， ZHANG Shui-Feng， LI Hong-Yan， LIU Zhu， SHAO Liang-Liang， ZHANG Dong-Lei. Journal of Analytical Science， ?2013， ?29（1）： 109-111

陳萬勤， 王 瑾， 黃麗英， 張水鋒， 李紅艷， 劉 柱， 邵亮亮， 張東雷. ?分析科學(xué)學(xué)報(bào)， ?2013， ?29（1）： 109-111

7 LI Shu-Guo， XUE Wen-Tong， CHEN Hui， LI Xue-Mei. Cereals & Oils， ?2006， ?10： 26-29

李書國(guó)， 薛文通， 陳 輝， 李雪梅. ?食品與油脂， ?2006， ?10： 26-29

8 Feng S， Gao F， Chen Z， Grant E， Kitts D D， Wang S， Lu X. J. Agric. Food Chem.， ?2013， ?61（44）： 10467-10475

9 LIU Shu-Heng. Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory， ?2010， ?27（5）： 890-892endprint

劉樹恒. ?光譜實(shí)驗(yàn)室， ?2010， ?27（5）： 890-892

10 YI Shu-Tao， XUE Wen-Tong， ZHANG Ze-Jun， HUO Ting. Science and Technology of Food Industry， ?2008， ?29（12）： 233-235

尹淑濤， 薛文通， 張澤俊， 霍 婷. ?食品工業(yè)科技， ?2008， ?29（12）： 233-235

11 SHAO Xiao-Fen， ZHANG Yun-Hui. Chinese Journal of Analysis Laboratory， ?1994， ?13（5）： 61-62

邵曉芬， 張韻惠. ?分析試驗(yàn)室， ?1994， ?13（5）： 61-62

12 WANG Yu-Tang， CHI Tao， HU Ben-Tao， TAN Ju-Zhong， LIU Ning. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology， ?2013， ?13（12）： 222-225

王玉堂， 池 濤， 胡本濤， 譚居中， 劉 寧. ?中國(guó)食品學(xué)報(bào)， ?2013， ?13（12）： 222-225

13 GB 5413.9-2010， Determination of Vitamin A， D， E in Foods for Infants and Young Children Milk and Milk Products. National Standards of the People′s Republic of China.

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素 A、D、E 的測(cè)定. ?中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn). GB 5413.9-2010

14 Chavez-Servin JL， Castellote AI， López-Sabater M C. J. Chromatogr. A， ?2006， ?1122（1-2）： 138-143

15 DONG Ai-Jun， CUI Yan-Hua， YANG Xin. Journal of Instrumental Analysis， ?2011， ?30（8）： 887-891

董愛軍， 崔艷華， 楊 鑫. ?分析測(cè)試學(xué)報(bào)， ?2011， ?30（8）： 887-891

16 QIU Li-Qun， GAO Ai-Ying， ZHANG Hao， JING Sheng. Guangzhou Chemical Industry， ?2010， ?38（10）： 151-153

裘立群， 高艾英， 張 昊， 井 升. ?廣州化工， ?2010， ?38（10）： 151-153

17 DUAN Yu-Lin， SU Jun， WU Xue， ZHANG Shao-Mei， WEN Tao， LIANG Meng-Yu， CHEN Xiao-Cong， MENG Yong， ZHOU Man， ZONG Yu-Ying. China Dairy Industry， ?2012， ?40（5）： 58-60

段玉林， 蘇 駿， 吳 雪， 張少梅， 溫 韜， 梁夢(mèng)宇， 陳小聰， 蒙 泳， 周 曼， 宗玉英. ?中國(guó)乳品工業(yè)， ?2012， ?40（5）： 58-60

18 LI Zhong-Hao， WU Shuai-Bin， LIU Shan-Shan， FAN Zi-Yan， YANG Fei， BIAN

Zhao-Yang， TANG Gang-Ling， CHEN Zai-Gen， HU Qing-Yuan. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（12）： 1817-1824

李中皓， 吳帥賓， 劉珊珊， 范子彥， 楊 飛， 邊照陽(yáng)， 唐綱嶺， 陳再根， 胡清源. 分析化學(xué)， 2013， 41（12）： 1817-1824

19 XU Yong-Wei， SUN Qing-Long， HUANG Jing， TAN Xiao-Jie. Modern Instruments， ?2012， ?18（5）： 45-48

徐永威， 孫慶龍， 黃 靜， 譚曉杰. ?現(xiàn)代儀器， ?2012， ?18（5）： 45-48

20 Gourmel C， Grand-Guillaume Perrenoud A， Waller L， Reqinato E， Veme J， Dulery B， Veuthey J L， Rudaz S， Schappler J， Guillarme D. J. Chromatogr. A， ?2013， ?1282： 172-177

21 Grand-Guillaume Perrenoud A， Veuthey J L， Guillarme D. J. Chromatogr. A， ?2012， ?1266： 158-167

22 Grand-Guillaume Perrenoud A， Boccard J， Veuthey J L. J. Chromatogr. A， ?2012， ?1262： 205-213endprint

Determination of 11 Fat-soluble Vitamins （A， D， E， K） and

Their Derivatives in Vitamin Tablets by Ultra Performance

Convergence Chromatography

ZHOU Wei*1，2，3， WANG Bo1， LIU Qian-Qian2， YANG Sheng-Xin3， WANG Li-Ting3

1（Central Laboratory of Technical Center of Gansu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Lanzhou 730000， China）

2（College of Food Science and Engineering， Gansu Agricultural University， Lanzhou 730070， China）

3（College of Geography and Environment Science， Northwest Normal University， Lanzhou 730070， China）

Abstract A new method was developed for the determination of 11 fat-soluble vitamins （A， D， E and K） and its derivatives in vitamin tablets by ultra performance convergence chromatography （UPC2）. The mobile phase was the mixture of supercritical CO2 and acetonitrile at a flow rate of 1 mL/min. The separation was carried out on the Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB 100 mm× 3.0 mm i.d.， 1.8 μm column. The UV detector was set at a wavelength of 284 nm. The limits of detection （LOD） were 1.5-2.0 mg/L， and the calibration linear for VK1， VK2， VK3 and VB3 was 3-300 mg/L， linear for VA， VA palmitate， VA formic acid， VE， VE acetate， VD2 and VD3 was 5-300 mg/L， respectively. Its spiked recoveries were 97.31%-98.76%， and the relative standard deviations （RSDs） were 0.41%-0.96%. The method is applicable for the determination of fat-soluble vitamins （A， D， E and K） and Their derivatives in vitamin tablets.

Keywords Ultra performance convergence chromatography; Fat-soluble Vitamin; Vitamin tablets

（Received 23 May 2014; accepted 28 September 2014）endprint