上皮細(xì)胞黏附分子在胃癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

何琦文 葉再元 徐繼 趙仲生 王元宇

●論 著

上皮細(xì)胞黏附分子在胃癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

何琦文 葉再元 徐繼 趙仲生 王元宇

目的 探討上皮細(xì)胞黏附分子（EPCAM）在胃癌組織中的表達(dá)及其與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，以及EPCAM作為胃癌早期診斷、預(yù)后判斷和治療靶點(diǎn)的臨床價(jià)值。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測436例胃癌組織及92例癌旁非腫瘤胃黏膜組織中EPCAM的表達(dá)情況，分析并探討EPCAM的表達(dá)與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 在92例非腫瘤胃黏膜組織中，50例（54.3%）EPCAM蛋白為陰性表達(dá)，42例（45.7%）呈弱陽性表達(dá)。在436例胃癌組織中，EPCAM蛋白高表達(dá)179例（41.1%），低表達(dá)257例（58.9%），主要在細(xì)胞包膜表達(dá)。EPCAM蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤部位、腫瘤大小、Lauren分型、浸潤深度、淋巴結(jié)分期、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（均P＜0.01），而與患者性別、分化程度、組織學(xué)類型無關(guān)（均P＞0.05）。EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（57.2%）明顯低于EPCAM低表達(dá)胃癌患者的5年生存率（17.3%，P＜0.05）。I、II和III期EPCAM高表達(dá)胃癌患者的5年生存率明顯低于EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（P＜0.05）；IV期EPCAM高表達(dá)和低表達(dá)胃癌患者的5年生存率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。EPCAM表達(dá)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期（均P＜0.05）是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論 EPCAM在胃癌中高表達(dá)，且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤的TNM分期顯著相關(guān)，提示EPCAM可以作為胃癌的早期診斷的篩查指標(biāo)以及治療的靶點(diǎn)之一。

胃癌 上皮細(xì)胞黏附分子 侵襲 轉(zhuǎn)移 預(yù)后

胃癌是我國病死率最高的腫瘤之一。經(jīng)外科手術(shù)治療后，胃癌5年生存率Ⅰ期為83.0%～99.0%，Ⅱ期為48.0%～70.0%，而Ⅳ期僅為25.0%[1]。在我國，大多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是Ⅲ或Ⅳ期。腫瘤的淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是胃癌患者死亡的最主要原因，對腫瘤進(jìn)行早期監(jiān)測，有助于提高胃癌患者的生存率。上皮細(xì)胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，EPCAM）是一個(gè)分子量為40kD、含314個(gè)氨基酸的鈣離子依賴的Ⅰ型跨膜糖蛋白，1979年由Koprowski等[2]首先描述的腫瘤相關(guān)抗原。目前關(guān)于EPCAM在胃癌組織表達(dá)及其臨床意義的研究甚少。本研究從蛋白水平探討EPCAM在92例非腫瘤胃黏膜組織和436例石蠟固定胃癌組織的表達(dá)情況及其表達(dá)與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系，旨在明確EPCAM作為胃癌早期篩查指標(biāo)、預(yù)后判斷及治療靶點(diǎn)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 對象和方法

1.1 對象 收集我院2002年1月至2004年12月期間436例胃癌患者的胃癌組織標(biāo)本，所有病例均經(jīng)病理證實(shí)，術(shù)前未經(jīng)任何治療?；颊咧心?11例，女125例，男女比例為2.49∶1；年齡17～91歲，中位年齡為60歲；隨訪起止日期為2002年1月至2008年12月，所有病例隨訪5年以上，生存期的計(jì)算從手術(shù)日期到隨訪截止日期，或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。腫瘤位于賁門55例，胃體163例，胃竇218例；腫瘤＜5cm 256例，≥5cm 180例；按Lauren分型：腸型胃癌223例，彌漫型胃癌213例；按WHO 2002年胃癌分類標(biāo)準(zhǔn)分為：乳頭狀腺癌16例，管狀腺癌326例，黏液腺癌29例，印戒細(xì)胞癌65例；高分化腺癌13例，中分化腺癌128例，低分化腺癌293例，未分化癌2例；TNM分期：Ⅰ期90例，Ⅱ期104例，Ⅲ期173例，Ⅳ期69例；胃癌淋巴分期：PN0期166例，PN1期136例，PN2期99例，PN3期35例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移61例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移375例。并取同期距癌邊緣5cm以上的無增生或不典型增生的非腫瘤胃黏膜92例作對照。

1.2 試劑 鼠抗人EPCAM抗體購于abcam公司，廣譜二抗試劑盒及DAB顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 按文獻(xiàn)[3-4]進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定 EPCAM以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒判為陽性，根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評定和分析[5-6]：基本不著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分率≤5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分；≥51%記3分。將每張切片的染色程度與染色細(xì)胞百分率得分相乘，其乘積為最后得分。0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），＞6分為強(qiáng)陽性（+++）。在統(tǒng)計(jì)分析中，將表達(dá)（-/+）劃為低表達(dá)組，（++～+++）劃為高表達(dá)組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2和 Fisher精確概率檢驗(yàn)，對生存數(shù)據(jù)采用Kaplan-Meier分析并繪制生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)差異性，用Cox風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行獨(dú)立預(yù)后因素分析。

2 結(jié)果

圖1 EPCAM在正常胃黏膜和胃癌組織中的表達(dá)（A：非腫瘤胃黏膜陰性表達(dá)，B：高分化腺癌陽性表達(dá)，C：中分化腺癌陽性表達(dá)，D：低分化腺癌陽性表達(dá)，SP法染色，×400）

2.1 EPCAM在正常胃黏膜和胃癌組織中的表達(dá)在92例非腫瘤胃黏膜組織中，50（54.3%）例EPCAM蛋白為陰性表達(dá)，42（45.7%）例呈弱陽性表達(dá)。在436例胃癌組織中，EPCAM蛋白高表達(dá)179（41.1%）例，低表達(dá)257（58.9%）例，主要在細(xì)胞膜表達(dá)，見圖1。

2.2 EPCAM在胃癌組織的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 EPCAM蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、Lauren分型、浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、及淋巴結(jié)分期有關(guān)（均P＜0.01），而與患者性別、分化程度、組織學(xué)類型無關(guān)（均P＞0.05），見表1。EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率明顯低于EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（圖2，見插頁）。

2.3 EPCAM在胃癌組織的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-meier分析EPCAM高表達(dá)和低表達(dá)患者總的5年生存率，EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（57.2%）明顯高于EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（17.3%）（P＜0.05）。在Ⅰ期，EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（57.1%）明顯低于EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（88.0%）（P＜0.05）。在Ⅱ期，EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（60.0%）明顯低于EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（74.2%）（P＜0.01）。在Ⅲ期，EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（17.3%）明顯低于EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（33.8%）（P＜0.01）。在Ⅳ期，EPCAM高表達(dá)患者的5年生存率（3.6%）與EPCAM低表達(dá)患者的5年生存率（0.0%）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。獨(dú)立預(yù)后因素分析表明，EPCAM表達(dá)（P＜0.05）、浸潤深度（P＜0.05）、淋巴結(jié)（P＜0.05）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P＜0.05）和TNM分期（P＜0.05）是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。

表1 EPCAM在胃癌組織的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系[例（%）]

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，胃癌病死率僅次于肺癌，居第2位[7]。在我國，胃癌患者5年生存率仍低于40.0%，大多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是Ⅲ或Ⅳ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)50.0%～75.0%[8]。早期診斷及治療可有效提高患者生存率。EPCAM作為一種腫瘤相關(guān)抗原，在上皮細(xì)胞來源的快速增殖的腫瘤組織高表達(dá)，在各種正常組織表達(dá)不一，但表達(dá)水平均低于腫瘤組織[9]。在絕大多數(shù)的實(shí)體腫瘤中，高表達(dá)的EPCAM與患者的不良預(yù)后有著對應(yīng)關(guān)系[10]。早期的研究表明EPCAM是一個(gè)細(xì)胞黏附分子?，F(xiàn)有研究表明，EPCAM不僅具有黏附分子的功能，還參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞遷移、增殖和分化[11]。EPCAM在各種實(shí)體腫瘤高表達(dá)，近年來研究表明EPCAM也是一個(gè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，在很多惡性增生的上皮腫瘤中EPCAM表達(dá)的強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常組織的表達(dá)水平。惡性腫瘤組織不但高表達(dá)EPCAM分子而且EPCAM陽性細(xì)胞無論從數(shù)量還是陽性程度上都與腫瘤發(fā)展的程度密切相關(guān)[12]。EPCAM在轉(zhuǎn)移性胃癌組織表達(dá)顯著高于非轉(zhuǎn)移性胃癌組織，siRNA下調(diào)EPCAM的表達(dá)將顯著抑制體外胃癌細(xì)胞的黏附、侵襲和遷移能力及體內(nèi)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力[13]。EPCAM能促進(jìn)相關(guān)腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其單克隆抗體（單抗17-1a）在德國已經(jīng)被批準(zhǔn)許可用于直腸癌的術(shù)后輔助化療，提高了21.0%的7年生存率以及減少了30.0%的復(fù)發(fā)率[14]。

EPCAM蛋白表達(dá)水平在絕大多數(shù)的上皮細(xì)胞來源的腫瘤中高表達(dá)。EPCAM蛋白的高表達(dá)與腫瘤不良預(yù)后有著密切關(guān)系，如肺癌、卵巢癌、胰腺癌、泌尿上皮癌以及膽囊癌[15-18]，但在腎癌以及甲狀腺癌中高表達(dá)的EPCAM蛋白反而有較高的生存率[19-20]。但關(guān)于胃癌與EPCAM關(guān)系的研究非常少見。本研究就以胃癌的發(fā)生、侵襲以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面與EPCAM的關(guān)系作為切入點(diǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)EPCAM蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與胃癌的腫瘤部位、腫瘤大小、Lauren分型、浸潤深度、淋巴結(jié)分期、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與患者性別、分化程度、組織學(xué)類型無關(guān)，EPCAM表達(dá)、浸潤深度、淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。

綜上所述，胃癌中EPCAM蛋白與胃癌的發(fā)生、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，并與胃癌患者的生存率呈負(fù)相關(guān)性，這為EPCAM蛋白作為胃癌早期診斷的重要篩查指標(biāo)、治療靶點(diǎn)、預(yù)后判斷及復(fù)發(fā)監(jiān)測的候選指標(biāo)提供了理論基礎(chǔ)。

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Expression of EPCAM correlated with invasion,metastasis and poor prognosis in patients with gastric cancer

HE Qiwen,YE Zaiyuan,XU Ji,et al.
Department of Gastrointestinal Surgery,Zhejiang People’s Hospitol,Hangzhou 310014,China

Objective To investigate the clinical significance of EPCAM expression in gastric cancer. Methods The expression of EPCAM was detected by immunohistochemistry(SP-9000)in 436 tissue samples of gastric cancer and 92 samples of non-cancerous gastric tissue. Results Low levels of EPCAM protein were detected in 42 of 92(45.7%)non-tumor mucosa samples.High expression of EPCAM protein was detected in 179(41.1%)gastric cancer samples,EPCAM was localized mainly in the cytoplasm of primary cancer.The expression of EPCAM was correlated with age,tumor location,tumor size,Lauren's classification,depth of invasion,distant metastases,regional lymph node stage and TNM stage(P＜0.05).EPCAM expression was not correlated with sex,differentiation or histological classification(P＞0.05).In stage I,II and III tumors,the 5-year survival rate in patients with high expression of EPCAM was significantly lower than that in patients with low expression(P＜0.05).In stage IVtumors,the expression of EPCAM was not correlated with the 5-year survival rate(P＞0.05).Cox regression analysis revealed that lymph node and distant metastases(P＜0.05),TNM stage(P＜0.05)and expression of EPCAM(P＜0.05)were independent prognostic factors in patients with gastric carcinoma. Conclusion Expression of EPCAM in gastric cancer is associated significantly with lymph node and distant metastases,and poor prognosis,which indicates that EPCAM may be a useful marker for predicting the development,progression and metastasis of gastric cancer.

Gastric carcinoma EPCAM Invasion Metastasis Prognosis

2014-04-22）

（本文編輯：沈昱平）

浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2011C33009）

310014 杭州，浙江省人民醫(yī)院胃腸外科（何琦文、葉再元、徐繼、王元宇，何琦文為浙江中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生），病理科（趙仲生）

葉再元，E-mail：zaiyuanye@163.com