影響酶抑制率法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留準確性因素的研究

王文豐，王艷樹，馬 濤，王 琴，湯新金，2

(1.湖北省孝感市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測中心，湖北孝感 432000；2.湖北省孝感市農(nóng)業(yè)技術推廣總站，湖北孝感 432000)

影響酶抑制率法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留準確性因素的研究

王文豐1，王艷樹1，馬 濤1，王 琴1，湯新金1，2

(1.湖北省孝感市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測中心，湖北孝感 432000；2.湖北省孝感市農(nóng)業(yè)技術推廣總站，湖北孝感 432000)

[目的]了解酶抑制率法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的影響因素，為提高準確度提供參考。[方法]采用酶抑制率法測定蔬菜中有機磷類農(nóng)藥，研究測定過程中提取溫度、提取時間、提取方法等對蔬菜上殘留農(nóng)藥提取效率的影響。[結(jié)果]測定過程中提取溫度、提取時間、提取方法等對蔬菜上殘留農(nóng)藥提取效率的影響有很大差別，25 ℃時15 min左右提取較充分，超聲波能夠提高提取效率。酶活性和酶反應速率受溫度影響較大，37 ℃左右測定結(jié)果較好。[結(jié)論]為蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測提供了新思路。

農(nóng)藥殘留；快速檢測；條件；準確性

有機磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前使用廣泛的農(nóng)藥，傳統(tǒng)的GC/MS等能夠準確、定量、定性地分析出具體的藥物殘留成分[1]，但是設備昂貴，另外，理化分析法的樣品前處理操作繁雜，費時費工，需要受過專門訓練的技術人員，使其也難以在基層推廣應用[2]，從而給農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管部門對農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)前、產(chǎn)中、產(chǎn)后的監(jiān)督工作帶來許多不便，由此也催生出大量的快速農(nóng)藥殘留的檢測技術。以乙酰膽堿酯酶抑制法為原理的酶抑制率法測定農(nóng)藥殘留具有快速、簡便、經(jīng)濟等優(yōu)點，作為一種蔬菜農(nóng)藥初篩手段深受廣大基層食品監(jiān)督部門、生產(chǎn)基地及流通市場的歡迎[3]。但使用該方法檢測蔬菜農(nóng)藥殘留時受環(huán)境、提取條件、反應溫度等因素影響嚴重，存在檢測結(jié)果重現(xiàn)性差等問題。鑒于此，筆者對采用酶抑制率法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留準確性的影響因素(提取溫度、提取時間、提取方式和反應溫度)進行了研究，以期為農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試劑與藥劑。乙腈、乙酸乙酯為色譜純；氯化鈉為分析純；農(nóng)殘快速檢測試劑盒由廣東深圳安鑫寶科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；敵敵畏標樣由農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)提供；添加農(nóng)藥為有效成分77.5%的敵敵畏，由湖北沙隆達股份有限公司生產(chǎn)。

1.1.2供試樣品。黃瓜和菠菜取自蔬菜集貿(mào)市場。

1.1.3儀器。6890n氣相色譜儀為安捷倫科技(中國)有限公司產(chǎn)品；LDSJ-RM10農(nóng)殘速測儀為湖南利德集團產(chǎn)品。

1.2 試驗方法用50 μl/L 77.5%的敵敵畏溶液浸泡菠菜和黃瓜樣品1 min后取出，自然風干。將風干后的黃瓜和菠菜樣品分別分為兩部分，其中一部分參照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》(NY/T761—2008)的方法使用安捷倫6890n氣相色譜儀對樣品中敵敵畏含量進行定量檢測，另一部分參考《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》(GB/T5009.199—2003)采用酶抑制率檢測農(nóng)藥殘留。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量檢測結(jié)果根據(jù)《食品中農(nóng)藥殘留最大限量GB2763-2014》進行判定，未添加敵敵畏的黃瓜和菠菜樣品均未檢出敵敵畏殘留；添加敵敵畏的黃瓜樣品中敵敵畏殘留量(0.09 mg/kg)未超過限量標準(0.20 mg/kg)，添加敵敵畏的菠菜樣品中敵敵畏殘留量(1.69 mg/kg)超過了限量標準(0.20 mg/kg)。

2.2 提取溫度對蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測的影響由圖1可知，低溫條件下提取液對殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取不充分，對測定結(jié)果影響較大，25 ℃時提取效率較高，測定的抑制率達到最大。

2.3 提取時間對蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測的影響由圖2可知，隨著提取時間延長，殘留在蔬菜上的農(nóng)藥逐漸溶解到提取液中，抑制率升高，提取時間為15 min左右時抑制率基本達到最大。

2.4 提取方式對蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測的影響由圖3可知，不同的提取方法對黃瓜和菠菜上殘留的農(nóng)藥提取效果存在很大差別，超聲波提取效果最好，振蕩提取效果稍差，靜置的提取效果較差。

2.5 反應溫度對蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測的影響由圖4可知，酶的活性大多是隨著溫度的升高而先升高后降低，反應溫度對乙酰膽堿酯酶活性影響較大，37 ℃左右時乙酰膽堿酯酶的活性達到最高，此時測定的抑制率也最高。

3 討論

用酶抑制法測定有機磷類農(nóng)藥最直接、最專一，且方法靈敏，對前處理步驟要求相對較低[4]，但是測定的環(huán)境溫度、提取條件等因素對殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取效果影響較大，通過試驗結(jié)果分析，提取環(huán)境溫度為25 ℃時，經(jīng)過15 min提取液對殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取效果較好，但隨著溫度的升高、時間的延長蔬菜組織液滲出過多，對測定結(jié)果影響較大，超聲波可提高提取效率。乙酰膽堿酯酶是由動物體中提取得到的，其活性受溫度等環(huán)境條件影響較大，酶反應速率隨溫度變化先升高后降低，反應溫度為37 ℃時測定結(jié)果較好。

[1] 鐘峰，楊曉云，李小璽，等.農(nóng)藥殘留檢測的技術研究進展[J].世界農(nóng)藥，2008，30(6)：40-44.

[2] 楊東鵬，張春榮，董民，等.用于檢測蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶抑制分光光度法研究進展[J].中國農(nóng)學通報，2004，20(2)：37-39.

[3] 彭少杰，吳衛(wèi)平，趙宇翔，等.基于重組乙酰膽堿酯酶的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測方法的應用驗證[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012，20(7)：1636-1638.

[4] 王小紅.酶抑制法檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的方法研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學，2006.

Research on Influencing Accuracy Factors of the Enzyme Inhibition Rate Method Detecting Pesticide Residues in Vegetables

WANG Wen-feng, WANG Yan-shu, MA Tao et al

(Agricultural Products Quality-safety Supervision and Inspection Center of Xiaogan City, Xiaogan, Hubei 432000)

[Objective] Influencing factors of the enzyme inhibition rate method detecting pesticide residues in vegetables were studied to improve accuracy. [Method] Organophosphorus pesticides in vegetables were detected by the enzyme inhibition rate method, and effects of some influencing factors on extraction efficiency of pesticide residues in vegetables were studied, such as extraction time, extraction temperature and extraction method. [Result] During the process of detection, the factors like extraction temperature, extraction time and extraction methods had much difference in the extraction efficiency of pesticide residues in vegetables, and pesticide residues could be extracted more fully at 25 ℃ for 15 minutes or so. Ultrasound could improve the extraction efficiency. Enzyme activity and enzyme reaction rate were much affected by temperature, and the detection result was better at about 37 ℃. [Conclusion] The results provide new idea for the detection of pesticide residues in vegetables.

Pesticide residues; Rapid detection; Conditions; Accuracy

王文豐(1966- )，男，湖北孝感人，高級農(nóng)藝師，從事土壤肥料和農(nóng)產(chǎn)品安全研究。

2015-03-17

S 188+.3

A

0517-6611(2015)12-121-02