蒼辛滴鼻劑的提取工藝實驗研究

宮鵬 高建

蒼辛滴鼻劑的提取工藝實驗研究

宮鵬 高建

目的優(yōu)選蒼辛滴鼻劑的最佳提取工藝。方法水提工藝及醇沉工藝均以綠原酸為考察指標進行正交實驗。結果蒼辛滴鼻劑的最佳水提工藝為:加水8倍量，煎煮2次，每次1 h。最佳醇沉工藝為:水提液濃縮至相對密度為1.05的清膏，乙醇濃度為70%，靜置24 h。結論優(yōu)選出的蒼辛滴鼻劑提取工藝穩(wěn)定可行。

蒼辛滴鼻劑;正交實驗;綠原酸

蒼辛滴鼻劑由蒼耳子、辛夷、白芷三味中藥組方而成，主要治療鼻炎、鼻竇炎及相關并發(fā)癥［1－3］。本方參照宋代《濟生方》中的治療鼻炎鼻竇炎的經典方(蒼耳子散)，原方為蒼耳子、薄荷、辛夷、白芷四味中藥，本方在原有基礎上進行了調整，選取蒼耳子、辛夷、白芷這三味，由對治療鼻炎明確有效的中藥提取精制而成［4］。本制劑汲取了傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，運用現(xiàn)代的研究精制方法，制備成外用滴鼻制劑，不僅療效顯著且使用方便。本文依據(jù)方中君藥蒼耳子的理化性質，同時結合本制劑的功能主治，以綠原酸為考察指標，采用正交實驗法優(yōu)選蒼辛滴鼻劑的提取工藝［5］。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 Waters 600高效液相色譜儀(美國Waters公司)，BP210S型萬分之一電子天平(德國賽多利斯)，AS3120型超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯公司)。蒼耳子、辛夷、白芷均購自合肥和義堂中藥飲片廠。綠原酸對照品(批號:753－9205)由中國藥品生物制品檢定所提供，乙腈(色譜純)，重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.2 水提工藝的研究

1.2.1 水提正交實驗設計 分別稱取蒼耳子10 g、辛夷10 g、白芷10 g，共9份，按照表1中的L9(3)4正交表進行正交實驗，收集水提液，并定容到1 000 mL。

表1 水提實驗因素水平

1.2.2 HPLC法測定水提液中綠原酸含量

1.2.2.1 色譜條件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13 ∶87);檢測波長:327 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.2.2.2 綠原酸對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品1.967 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目標濃度的溶液，即得。

1.2.2.3 供試品溶液的制備 取“1.2.1”項下的水提液適量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2.4 標準曲線制備 精密吸取綠原酸對照品1、2、4、8、12、16 μL，依次注入液相色譜儀，依法測定。得A=1 414 320 C+72 469;R2=0.998 8。結果表明，綠原酸在0.196 7～3.147 2 μg范圍內，綠原酸含量與峰面積呈良好線性關系。

1.2.2.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，依照水提正交實驗設計測定。

1.3 醇沉工藝的研究

1.3.1 醇沉正交實驗設計 取水提液，平均分成9份，再按照表2中L9(3)4正交表進行醇沉實驗。棄去醇沉后的雜質，得醇液定容至500 mL。

表2 醇沉實驗因素水平

1.3.2 HPLC法測定醇沉液中綠原酸含量

1.3.2.1 色譜條件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(10 ∶90);檢測波長:327 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.3.2.2 綠原酸對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品1.706 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目標濃度的溶液，即得。

1.3.2.3 供試品溶液的制備 取“1.3.1”項下的醇液適量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.2.4 標準曲線的制備 精密吸取綠原酸對照品0.5、2、4、6、8、10 mL 至 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇至刻度，搖勻即得。得 A=34 653 C－4 485.6;R2=0.999 8。結果表明，綠原酸在 8.53 ～136.48 μg/mL 范圍內，綠原酸含量與峰面積呈良好線性關系。

1.3.2.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液20 μL與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依照醇沉正交實驗設計測定。

2 結果

2.1 水提正交結果 正交實驗表結果可知最佳水提工藝為:A3B1C3，見表3。方差分析見表4，B項煎煮時間具有極顯著性影響，故煎煮時間1 h即可，符合綠原酸長時間受熱會被破壞的理論依據(jù)［6］。其他兩項加水量為默認誤差，煎煮次數(shù)的顯著性相對于煎煮時間的顯著性可忽略，故從降低工業(yè)生產成本的角度出發(fā)，可得最佳水提工藝為A1B1C1。綜合考慮，并參照表3中的綠原酸含量，最后確定最佳水提工藝為A2B1C2，即用8倍量水，提取2次，每次1 h。

表3 水提正交實驗結果

表4 水提方差分析結果

2.2 水提驗證實驗 稱取蒼耳子300 g、辛夷300 g、白芷300 g，按照水提正交實驗優(yōu)選后的方案，即用8倍量水，提取2次，每次1 h進行驗證實驗，水提液定容到9 000 mL，作為供試品溶液。按“1.2.2”項下的色譜條件，運用外標一點法依法進行含量測定。水提后綠原酸得提取率可達80%以上，此驗證實驗可確定該水提工藝穩(wěn)定合理，見表5。

表5 水提工藝驗證實驗結果

2.3 醇沉正交結果 正交實驗表結果可知最佳醇提工藝為:A1B3C1，見表6。方差分析見表7，A項相對密度和B項醇沉濃度均具有極顯著性，A項相對密度越小，即在水提液濃縮的過程中有效成分綠原酸被雜質包裹的可能性越低［7］，所得綠原酸含量越高;B項醇沉濃度決定在醇沉時濃縮液中綠原酸的溶出，綠原酸在70%乙醇中的溶解度最大［8］，與方差分析結果一致，故可確定最佳醇沉工藝的相對密度為1.05，醇沉濃度為70%乙醇。C項醇沉時間為默認誤差，故從縮短工業(yè)生產周期的角度出發(fā)，選取醇沉時間為24小時，可得最佳水提工藝為 A1B3C1，與表6所得結果一致。最后確定的最佳醇提工藝為A1B3C1，即相對密度1.05，醇沉濃度為70%，醇沉時間24 h。

表6 醇沉正交實驗結果

表7 醇沉方差分析結果

2.4 醇沉驗證實驗 稱取蒼耳子100 g、辛夷100 g、白芷100 g，水提后按照醇沉正交實驗優(yōu)選后的方案，即相對密度1.05，醇沉濃度為70%，醇沉時間24 h進行驗證實驗，按“1.3.2”項下的色譜條件，運用外標一點法依法進行含量測定。水提醇沉后綠原酸得提取率可達75%以上，此驗證實驗可確定該醇沉工藝穩(wěn)定合理，見表8。

表8 醇沉工藝驗證實驗

3 討論

3.1 考察指標選擇 本方蒼辛滴鼻劑中蒼耳子為君藥，具有散風除濕，通鼻竅的功能，為歷代治療鼻淵及頭痛要藥。蒼耳子主要含有酚酸類、水溶性苷類、脂肪油、蛋白質等成分［6］。現(xiàn)代研究表明蒼耳子主要活性成分為酚酸類化合物，具有抗感染和鎮(zhèn)痛等作用［4］，其中綠原酸為主要有效成分。故本文選取綠原酸為指標對提取工藝進行篩選。

3.2 提取方法的選擇 在確定蒼辛滴鼻劑以綠原酸為考察指標后，考慮到蒼耳子中含有大量的蛋白質成分［8］，制成鼻腔給藥制劑會對鼻黏膜造成一定的刺激，影響制劑使用的舒適性，故在提取方法的選擇方面采用水提醇沉法。先進行水提最大限度的保留有效成分，得水提液后醇沉去除水溶性蛋白雜質。

3.3 流動相篩選 在正交水提過程中，綠原酸的測定方法是參照2010年版藥典第一部中測金銀花中的綠原酸含量的色譜條件，流動相即乙腈－0.4%磷酸 溶液(13∶87)為流動相，此條件下峰形，柱效均可達到藥典標準。但在測定醇沉實驗項下的綠原酸時，樣品峰分離度不佳，故考慮以增大流動相中的水相比例來增大分離度，最后確定流動相為乙腈－0.4%磷酸溶液(10∶90)，在此條件下峰形，柱效均可達到藥典標準。

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Study on extraction process of Cangxin Nasal Drops

Gong Peng，Gao Jian
College of Pharmacy，Anhui Traditional Chinese Medicine University，Hefei 230038，China

ObjectiveTo optimize the extracting technique condition of Cangxin Nasal Drops.MethodsThe total quantity of Cycolohexanecaboxylio acid was used as the index for both the processing for water extraction and alcohol precipitation by the orthogonal design.ResultsThe optimum water extraction conditions of Cangxin Nasal Drops were:8 times of water，extracted 2 times and each time lasted 1 hours.The optimum alcohol precipitation conditions of Cangxin Nasal Drops were:the relative density of water extraction was 1.05，and the concentration of the alcohol for precipitate was 70%，settlement for 24 h.ConclusionThe extraction process of Cangxin Nasal Drops is stable and feasible.

Cangxin Nasal Drops;Orthogonal experiments;Cycolohexanecaboxylio acid

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.002

2013年安徽省高等教育振興計劃人才項目;2013年安徽省中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展專項資金項目

230038 合肥 安徽中醫(yī)藥大學藥學院(宮鵬)

230022 合肥 安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，國家中醫(yī)藥管理局中藥化學三級實驗室(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－09－05收稿 2014－11－30修回)